CHP收录的维生素类药物的分析方法.doc

CHP收录的维生素类药物的分析方法性状鉴别检查含量测定类别维生素 A 本品为淡黄色油溶液或结晶与油的混合物（加热至60应为澄清溶液）；无臭；在空气中易氧化，遇光易 变质。 本品与三氯甲烷、乙醚、环己烷或石油酴能任意混合，在 乙醇中微溶，在水中不溶。 取本品1滴，加三氯甲烷10ml振摇使溶解；取2 滴，加三氯甲烷2ml与25%三氯化锑的三氯甲烷溶液0. 5ml,即显蓝色，渐变成紫红色。酸值 取乙醇与乙醚各 15ml, 置锥形瓶中，加酚駄指示液5滴，滴加氢氧化钠滴定液（0. lmol/L)至微显粉红色，再加本品 2. 0g ，振摇使溶解，用氢氧化钠滴定 液(0. lmol/L)滴定，酸值应不大于2. 0(附录W H ) .过氧化值 取本品l.Og，加冰醋酸-三氯甲烷（6 ： 4)30ral,振摇使溶解，加碘化钾的饱和溶液lml，振摇1分钟，加水100ml 与淀粉指示液lml，用硫代硫酸钠滴定液(0. Olmol/L)滴定至紫蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。消耗硫代硫酸钠 滴定液（0. 01mol/L)不得过1. 5ral。取本品，照维生素A测定法（附录W J)项下紫外-可见分光光度法测定，即得。 维生素类药。维 生 素B1本品为白结晶或结晶性粉末；有微弱的特臭,苦 ；干品在 空气 中 即吸收约4% 的水分。本品在水中易溶，在乙醇中微 溶，在乙醚中不 溶。吸收系数 取品密 称 加 酸 溶 液 （9 1000) 溶，并 定 量 稀 释 制 成 每 lm l 约 含 12.5叫 的 溶 液 ，照紫 -可见光 光度 法（附录IV A ) ，在 246nm的 波 长 处 测 定 吸 光 度 吸收系 数（ !2 ) 406436。（1)取 品 约 5mg,加 氧 试液 2. 5ml溶解后 ，加 铁 氰 试 液 0. 5 m l与丁醇 5ml，强 振 摇 2 钟 ，放 置 使 分层 ，面 的 层 显强烈的 光；加 酸 使 成酸性光即消失 ；再加碱使成碱性 光 。(2 )取 品 量 加 水 溶 解 浴 蒸 干 ，在 105C干 2 小时测 定。 品 的 光 吸 收 图 谱 照 的 图 谱 （光谱1205 图） 致。(3 ) 品的 水溶液 物的鉴别 酸 度 取 品 0.50g,加 水 20ml溶 解 后 ，依法测 定（附 录 见 H ),p H 值 2. 83 .3。溶 液 的 澄 清 度 与 颜 色 取 品 l.O g,加 水 10ml溶 解 后 ，溶液 澄 清 无 色 ； 照 液 （取 比 重 铬 酸 液0.1ml，加 水 量 使 成 10ml)比较 ，不得更深。取 品 约 0. 12g， 密 称 加 醋 酸 20ml微热使溶 解，放 冷 ，加 醋 酐 30ml，照 电 滴 定 法 （附 录 珊 A ),高 酸滴定液(0. lm ol/L) 并将滴 定 的 结果 用空白试校 。每 lm l高 酸 滴 定 液 （0. lm o l/L )相 当 于 16. 86mg的 C12Hn ClN4OS HCl。维 生 素类 。维生素B2本品为橙黄色结晶性粉末；微臭，味微苦；溶液 易变质，在碱性溶液中或遇光变质更快。 本品在水、乙醇、三氯甲烷或乙醚中几乎不溶；在稀氢氧 化钠溶液中溶解。 比旋度 避光操作。取本品，精密称定，加无碳酸盐 0.05mo/L氢氧化钠溶液溶解并定量稀释制成每lml中约含 5mg的溶液，在30分钟内，依法测定（附录W E)，比旋度为一 115至一 135。（1)取本品约lmg，加水100ml溶解后，溶液在透射光下显淡黄绿色并有强烈的黄绿色荧光；分成二份：一份 中加无机酸或碱溶液，荧光即消失；另一份中加连二亚硫酸钠 结晶少许，摇匀后，黄色即消褪，荧光亦消失。 (2) 取含量测定项下的溶液，照紫外-可见分光光度法（附录IV A)测定在267nm、375nm与444nm的波长处有最大吸收。375nm波长处的吸光度与267nm波长处的吸光度的比 值应为0. 310.33;444nm波长处的吸光度与267nm波长处的吸光度的比值应为0. 36-0.39。(3) 本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集447图）一致。 酸碱度取本品 0 . 50g, 加 水 25ml, 煮 沸 2 分钟，放冷，滤过，取滤液10ml，加酚酞指示液0.05ml与氢氧化 钠滴定液（0. Olmol/L) 0. 4ml, 显橙色，再加盐酸滴定 液(0. 01mol/L) 0. 5ml ，显黄色，再加甲基红溶液（取甲基 红50mg，加0. lmol/L 氢氧化钠溶液 1.86ml 与乙醇 50ml 的 混合液溶解，加水稀释至100ml,即得）0. 15ml，显橙色。感光黄素取本品 25mg, 加无乙醇三氯甲烷 10ml, 振 摇 5分钟，滤过，滤液照紫外-可见分光光度法（附录IV A)，在440nm的波长处测定，吸光度不得过0. 016。避光操作。照髙效液相色谱法（附录V D)测定。 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅 胶 为填充剂；以0. Olmol/L庚烷磺酸钠的0.5%冰醋酸溶液-乙腈-甲醇（85 ： 10 ： 5)为流动相；检测波长为444nm。理论板数按维生素&峰计算不低于2000。 测定法取本品约15mg，精密称定，置500ml量瓶中，加 冰醋酸5ml与水200ml ，置水浴上加热，并时时振摇使溶解，加水适量稀释，放冷，再用水稀释至刻度，摇匀，精密量取20M1 注人液相色谱仪，记录色谱图；另取维生素&对照品，同法测 定。按外标法以峰面积计算，即得。维 生 素类 。维生素B6本品为白色或类白色的结晶或结晶性粉末；无 臭.味酸苦；遇光渐变质。 本品在水中易溶，在乙醇中微溶，在三氯甲烷或乙醚中 不溶。（1 )取本品约lOmg,加水100ml溶解后，各取 l ml ，分别置甲、乙两支试管中，各加20%醋酸钠溶液2ml ，甲管中加水lml，乙管中加4%硼酸溶液lml，混匀，各迅速加氯 亚氨基-2,6-二氯醌试液lml;甲管中显蓝色，几分钟后即消 失，并转变为红色，乙管中不显蓝色。 (2) 在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。 (3) 本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集448图）一致。 (4)本品的水溶液显氯化物的鉴别反应酸度取本品 l.Og, 加 水 20ml 使溶解，依法 测 定（附录YI H) ， p H 值应为 2.43.0 。溶液的澄清度与颜色取本品 l.O g ，加水10ml溶解后，溶液应澄清；如显浑浊，与1号浊度标准液（附录K B )比较，不得更浓；如显色，与黄色1号标准比色液（附录K A 第 一法）比较，不得更深。 照高效液相色谱法（附录V D)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅 胶 为填充剂；以0. 04%戊垸磺酸钠溶液（用冰醋酸调节p H值至3.0)-甲醇（85 ： 15)为流动相；检测波长为291nm。理论板数按维生素B6峰计算不低于4000。 测定法取本品，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制 成 每 lml 中约含 0 . lmg的溶液，精密量取10(J注人液相色谱仪，记录色谱图；另取维生素&对照品，同法测定。按外标法 以峰面积计弇，即得。 维生素类药维生素B12本品味 深 结晶 或结 晶性 粉末 ；无 臭 无 味；引湿性 强。本 品 在 水或 乙 醇 中 略 溶 ，在 三 烷 或 乙 醚 中不 溶 。（1)取 品 约 lm g,加 硫 酸 约 50mg，置中 烧 熔 融，放 冷 ，加 水 3ml，煮 沸使溶 解 加 酚 酞 指 示 液 1滴加 氧 试液至 显 淡 色 后 ，加 醋 酸 0.5g、稀醋酸0. 5 m l与 0. 2%1-亚硝基-2-萘酚-3 6-二 磺 酸 溶液 0. 5ml，即橙 色 ；加 酸 0. 5ml，煮 沸 1 钟 ，颜 色不消失。(2 )取含 量 测 定项下的 溶液，照紫 -可见 光 光度 法（附录IV A )测 定 ，在 278nm 361nm 550nm的波长处有最大吸收 。361nm波 长 处 的 吸 光 度 278mn波 长处的吸光度 的比值 1. 701. 88。361nm波 长 处 的 吸 光 度 550nm波长处的吸光度 的比值 3. 153. 45。(3 ) 品的 光吸收图谱 照的图谱（光 谱 449图）一 致 。溶 液 的 澄 清 度 取 品 20mg，加 水 10ml溶解后 ，溶液 澄清。避光操作。取 品 密 称 加水溶解并定 量 稀 释制 成每 lm l中 约 含 25网 的 溶 液 ，照紫 -可见 光光 度 法 （附 录 IV A ) ，在 361nm的 波 长 处 测 定 吸 光 度 按0 63仏8(：0凡40 14? 的吸收系数(： ) 207计 算 ，即得。维生素类药维生素C本品为白色结晶或结晶性粉末；无臭，味酸；久 置色渐变微黄；水溶液显酸性反应。 本品在水中易溶，在乙醇中略溶，在三氯甲烷或乙醚中 不溶。 熔点 本品的熔点（附录 W C)为190：192C,熔融时同时分解。 比旋度 取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每 lml中约含0.10g的溶液，依法测定（附录W E)，比旋度为+ 20. 5。至+ 21. 5 。（1)取本品0.2g ，加水10ml溶解后，分成二等份，在一份中加硝酸银试液0. 5ml ，即生成银的黑色沉淀；在另一份中，加二氯靛酚钠试液12滴，试液的颜色即消失。 (2)本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集450 图）一致。 溶液的澄清度与颜色取本品 3.0 g ，加水15ml，振摇使溶解，溶液应澄清无色；如显色，将溶液经4号垂 熔玻璃漏斗滤过，取滤液，照紫外-可见分光光度法（附录 IV A)，在420nm的波长处测定吸光度，不得过0.03。草酸 取本品 0 . 25g ，加水4. 5ml, 振摇使维生素 C 溶解，加氢氧化钠试液 0.5ml 、稀醋酸 lml 与氯化钙试 液0.5ml ，摇匀，放置1小时，作为供试品溶液；另精密称取草酸75mg，置500ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密 量取5ml，加稀醋酸lml与氯化钙试液0.5ml，摇匀，放置1 小时，作为对照溶液。供试品溶液产生的浑浊不得浓于对照 溶液（0. 3%).取本品约0. 2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液lml,立即用 碘滴定液（0. 05mol/L)滴定，至溶液显蓝色并在30秒钟内不褪，每 lml 碘滴定液（ 0 . 05mol/L) 相当于 8 . 806mg的C s H 8 0 维生素类药维生素D2本品为无色针状结晶或白色结晶性粉末；无臭， 无味；遇光或空气均易变质。 本品在三氯甲烷中极易溶解，在乙醇、丙酮或乙醚中易 溶，在植物油中略溶，在水中不溶。 比旋度取本品，精密称定，加无水乙醇溶解并定量稀释 制成每lml中约含40mg的溶液，依法测定（附录W E)，比旋度 为 + 102. 5 至+ 107. 5(应于容器开启后30分钟内取样，并在溶液配制后30分钟内测定）。吸.收系数取本品，精密称定，加无水乙醇溶解并定量稀 释制成每 lml 中约含 l(Vg 的溶液，照紫外-可见分光光度 法 (附录IV A)，在265nm的波长处测定吸光度，吸收系数为460490。 （1)取本品约0.5mg，加三氯甲垸5ml溶解后， 加醋酐0.3ml与硫酸0. lml，振摇，初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色，最后成绿色。 (2) 在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。 (3) 本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集452图）一致。麦角甾醇取本品lOmg，加90%乙醇2ml溶解 后，加洋地黄皂苷溶液（取洋地黄皂苷20mg ，加90%乙醇2ml,加热溶解制成）2ml ，混合，放置18小时，不得发生浑浊或沉淀取本品，照维生素D测定法（附录VI K 第一法）测定，即得。 维生素类药维生素D3本品为无色针状结晶或白色结晶性粉末；无臭， 无味；遇光或空气均易变质。 本品在乙醇、丙酮、三氯甲烷或乙醚中极易溶解，在植物 油中略溶，在水中不溶。 比旋度取本品，精密称定，加无水乙醇溶解并定量稀释 制成每lml中约含5mg的溶液，依法测定（附录VI E),比旋度为 + 105至+ 112(应于容器开启后30分钟内取样，并在溶液配制后30分钟内测定）。 吸收系数取本品，精密称定，加无水乙醇溶解并定量稀 释制成每lml中约含lOpg的溶液，照紫外-可见分光光度法 (附录IV A),在265nm的波长处测定吸光度，吸收系数（Ei=)为465495。 （1)取本品约0.5mg，加三氯甲烷5ml溶解后， 加醋酑0. 3ml与硫酸0. lml振摇，初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色、蓝绿色，最后变为绿色。 (2) 本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集453图）一致。 (3) 在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。 有关物质取本品约25mg，置100ml棕色量瓶 中，加异辛垸80ml，避免加热，超声处理1分钟使完全溶解，放 冷，用异辛烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取 .ml ，置100ml棕色量瓶中，用异辛烷稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱条件，取对照溶液lOOfxl 注人液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约 为满量程的 20% ，再精密量取供试品溶液与对照溶液 各100(ul，分别注人液相色谱仪，记录色谱图至维生素D3峰保留 时间的2倍。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，除前维生 素 D3 峰外，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积 的 0. 5倍（0. 5%),各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（1.0% )。 取本品，照维生素D测定法（附录W K 第一法）测定，即得。 维生素类药维生素E本品为微黄色至黄色或黄绿色澄清的黏稠 液 体；几乎无臭；遇光色渐变深。天然型放置会固化，251：左右 熔化。 本品在无水乙醇、丙,、乙醚或植物油中易溶，在水中 不溶 比旋度避光操作。取本品约 0.4 g ，精密称定，置150ml具塞岡底烧瓶中，加无水乙醇25ml使溶解，加硫酸乙 醇溶液（1 7)20ml,置水浴上回流3小时，放冷，用硫酸乙醇溶液（1 72)定量转移至200ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀。精密量取100ml ，置分液漏斗中，加水200ml,用乙醚提取2次（75ml，25ml)，合并乙醚液，加铁氰化钾氢氧化钠溶液取 铁氰化钾 5 0g ，加氢氧化钠溶液（1 125) 溶解并稀释 至500ml50ml,振摇3分钟；取乙醚层，用水洗涤4次，每次 50ml,弃去洗漆液，乙醚液经无水硫酸钠脱水后，置水浴上减 压或在氮气流下蒸干至 78ml 时，停止加热，继续挥干 乙 醚，残渣立即加异辛烷溶解并定量转移至25ml量瓶中，用异 辛垸稀释至刻度，摇匀，依法测定（附录VI E),比旋度（按d-生育酚计，即测得结果除以换算系数 0 . 911) 不得低 于+ 24 (天然型）。折光率 本品的折光率（附录 M F)为1.4941.499。吸收系数取本品，精密称定，加无水乙醇溶解并定量稀 释制成每 lml 中约含 0. lmg的溶液，照紫外-可见分光光度法(附录IV A)，在284nm的波长处测定吸光度，吸收系数为41. 045. 0。（1)取本品约30mg，加无水乙醇10ml溶解后， 加硝酸2ml,摇匀，在75C加热约15分钟，溶液显橙红色。 (2) 本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集1206图）一致。 (3) 在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。 酸度取乙醇与乙醚各 15m l ，置锥形瓶中，加酚酞指示液0. 5ml，滴加氢氧化钠滴定液（0. lmol/L)至微显粉红色，加本品l.Og，溶解后，用氢氧化钠滴定液（0. lmol/L)滴定，消耗的氢氧化钠滴定液（0. lmol/L)不得过0. 5ml。生育酚（天然型）取本品0. 10g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈滴定液（0. Olmol/L)滴定，消耗的硫酸铈滴定液（0. Olmol/L)不得过1. 0ml。照气相色谱法（附录V E)测定。色谱条件与系统适用性试验用硅酮（ OV-17) 为 固 定 液，涂布浓度为2%的填充柱，或用100%二甲基聚硅氧烷为 固定液的毛细管柱；柱温为265C：。理论板数按维生素E峰 计算不低于500(填充柱）或5000(毛细管柱），维生素E峰与 内标物质峰的分离度应符合要求。 校正因子的测定 取正三十二烷适量，加正己烷溶解 并 稀释成每 lml 中 含 1 . Omg的溶液，作为内标溶液。另取维生素E对照品约20mg，精密称定，置棕色具塞瓶中，精密加内标 溶液10ml ，密塞，振摇使溶解，取131注人气相色谱仪，计算校正因子。 测定法取本品约20mg,精密称定，置棕色具塞瓶中，精 密加内标溶液10ml,密塞，振摇使溶解；取131注人气相色 谱仪，测定，计算，即得。 维生素类药维生素K本品为黄色至橙色澄清的黏稠液体；无臭或几 乎无臭；遇光易分解。本品在三氯甲烷、乙醚或植物油中易溶，在乙醇中略溶， 在水中不溶。 折光率本品的折光率（附录W F)为1.5251. 528。 （1)取本品1滴，加甲醇10ml与5%氢氧化钾的 甲醇溶液l