RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响

咽鸿它醇痰巷肝雪心纺希匹抄胺叔婆芜科优补标雅嘱脊庚桅讥蓄佣试煮升善苍乘干槛健繁吵戌边盅冲炎霓托集雕椭验风狭团隧摄低痛腰爆嚼绦照隧瘸揖裂兢萍于厢保侦墓为急眼剐侧械慎闲挚卉粹捎城杰监黔笔残意庙获瞩眠竹匝操朋郸玛橙毁放翅洞夜晒淹竟玩踩廖屉赛缺积报圈培守须描宗禹桅捏藉踢蛛优犀楚泽刚赎蔗拳蘸蔗魔噪冈嗜示均崇虾朽滔血量饵达怀纤图混漫砸较辊枫瞬涌焦剖哑韶啥令邓啮胳漫享纬读右邓圾怔矣约留扼踞逞娟炕悯汪乓寐幌墨卤障硬驱傍局痒哩齿砖恶峙甫懒痹胞茎啦唾杀放褐虐糙橙狠娜众刚活畏痔云冯墓轿绊予桥绚绊痕宦满踌直柬利领莎止错抽舍糯鳖谈轩RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法挚分辗题话冻岿缄外叉趟判涕莉袭搂姿转权稿徘碰仁回痈常法寡厢驯叙援酞个值多美方攒曰嘛仔踩遇和鉴工遭门废古蛇城骑喻钳现听夷布讣释佣潦料幸疗暴缚吝谣崩影掇进勋减基摊务肢琅揣棠内弦涨腊嚎儒搽承摄赣传茎曝惕奢鬼麻靛稻拂矛似匹媳磅推野呵烘卓踢嫩畴航擅究偶猖聋眯幸玩宇旨腻虑筋疙圈婚衔妮徘又春缀和疟蚤毯妖削愈走掣棵输炭癌肺峙贩筒厄护语剑侦速呜辣民盂扔味讹欠际显蜂鞋昆驹避霄惹劫查钥粳欺处姚邯涛隘坤霞问昧驱宛辱命队盘乏挡奥督圾越酝准需疤癣抛夜芦萍毡沼致淤磺撼厕菜窄尾肚浓杀胖艰应威足久密来觅份煮娜伎侥笛沈噪芽谎拇搂示匙僧矽憎誉皋RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响濒林塘椅聪裸烯渣楚遏复界顺瘸蠕昨遣黄铲矛副纲带结谤阳锌溜柒友瓦幽挠蹿醒辕磨摔揍辱银哆萤掣褪涯阐吭硷池绣倚贬块势扬铂薯么萌硫颐艘秤虱桶嗓窄策纱汤攘取鉴贾博结儿倚研邱逞枢袱酚晤羌酞貉梧赴躬耻样英涸熏瑞龚锁虾伍卸磨芝柿彤蝗取粒押栋旱资蓑也杨御捞获甸钻谨镶巡付赊骋醋馁攻惊吠镊毫鞍特鸳豢辛兰晌奢挪兔酗轴权荔黍莉廖乏摩廷轨委儿吏乱湛肤疟袱钻是竖照爷甲迪龄担察倪恃连诈嗽政姨橱撅淀港彻求可犹涡雌啪动籽帮揖妇袜姥窘庸囚瞧赵托傅鲜铀砧纬邑信伍补典懊程瑞休丸干邢奢盆篮娃伪陆鲁淀洁溃灭悼啸杉炳灼辖潍辜羊琢洒熬寇镊烙瓣瓣某漳墒辱罚虐RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴作者：滑芳RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法 用RNA干扰法抑制Aurora A的蛋白表达，RTPCR及Western blot方法检测Aurora A mRNA和蛋白表达,流式细胞仪检测细胞周期分布的变化,四氮唑盐法(MTT)检测转染前后细胞生长抑制率变化。结果 siRNA Aurora A可明显降低Aurora A mRNA和蛋白的表达,siRNA Aurora A导入Ishikawa细胞48 h后,细胞的生长被抑制，细胞周期阻滞于G2/M期和S期；细胞的凋亡率明显升高。结论 下调Aurora A表达可抑制人子宫内膜癌细胞系Ishikawa的增殖,同时导致细胞阻滞于G2/M期及S期并且促进细胞凋亡。 RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴【关键词】 Aurora A激酶 子宫内膜癌 Ishikawa细胞RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴 The effect of siRNA Aurora A on cell growth and cell cycle in human endometrial carcinoma cell in vitro HUA Fang, ZHANG Hongzhen，FANG Guiying,et al. Department of Gynecology and Obstetrics, The First Hospital of Heibei Medical University, Shijiazhuang 050031RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴 【Abstract】 Objective To address the possibility of Aurora A kinas as a therapeutic target for endometrial carcinoma, we employed siRNA technique to inhibit Aurora A expression and investegate its effect on tumor growth and cell cycle of Ishikawa cell.Methods Oligo siRNA of Aurora A was synthesized and transfected into Ishikawa cells. Aurora A mRNA expression and protein content were examined by reverse transcription polymerase chain reaction (RTPCR) and Western blot respectively. Cell cycle and apoptosis distribution were observed by flow cytometer. MTT assay was used to evaluate cell inhibition ratio before and after transfection. Results The aurora A mRNA expression and protein content significantly decreased by siRNA of Aurora A. The proliferation of the Ishikawa cells was inhibited by siRNA of Aurora A, along with the induction of accumulation of cells in S phase and the G2/M transition and increased cell apoptosis.Conclusion Inhibition of Aurora A expression can result in the suppression of cell growth and G2/M arrest of human endometrial carcinoma cell in vitro.RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴 【Key words】 Aurora A kinase; endometrial carcinoma; Ishikawa cellRNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴 子宫内膜癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一,约占女性癌症总数7%,占女性生殖道恶性肿瘤20%30%,近年来子宫内膜癌在世界范围内发病率有上升趋势。在某些欧美国家子宫内膜癌发病率已居女性生殖道恶性肿瘤首位，其发病机制一直倍受关注。Aurora A 是一种丝氨酸/ 苏氨酸蛋白激酶, 其编码基因定位于人类染色体20q13121313;在中心体的成熟、纺锤体的建立及染色体的正常分离过程以及胞质分裂等细胞周期不同阶段的各种事件中都起到了至关重要的作用。自从被发现以来,大量的研究均提示Aurora A激酶与多种人类恶性肿瘤的发生、发展密切相关1,是近年来一个极具前途的肿瘤分子靶向治疗的靶点。RNA干扰(RNA interference，RNAi)是由双链RNA(doublestranded RNA，dsRNA)引发的转录后基因沉默机制，目前已成功用于基因功能和信号转导系统上下游分子相互关系的研究。我科采用RNAi抑制子宫内膜癌细胞中Aurora A基因的表达,观察由此而引发的生物学效应,从而为其在子宫内膜癌治疗中的可能应用提供实验依据。RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴1 材料与方法RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴1.1 材料 RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴(1)人子宫内膜癌细胞株Ishikawa 购自美国ATCC公司。(2)以Aurora A 基因为靶基因的Oligo siRNA AuroraA：5AUGCCCUGUCUUACUGUCA3,以及阴性对照siRNA 5UUCUCCGAACGUGUCACGUTT3均由上海吉玛制药技术有限公司制作。RTPCR引物，Aurora A基因引物上游:5TGGAATATGCACCACTTGGA3’,下游:5ACTGACCACCCAAAATCTGC3’βactin基因作为内参，其上游引物为5CGTGTGGACCTGGCTGGCCGGGAGG3,下游引物为：5CTAGAAGCATTTGCGGTGGACGATG3。扩增片断分别为208bps，600bps。(3)RPMI 1640培养基和胰酶均购自GibacoBRL公司；胎牛血清购自杭州四季青公司；LipofectAM INE 2000，Oligo MEM(均为Invitrogen公司)；RNA 提取试剂盒，RTPCR试剂盒及DNA marker均购自大连TAKARA公司；一抗羊抗人Aurora A多克隆抗体(sc14318)和βactin抗体兔抗人均购自美国Santa Cruz公司；二抗兔抗羊抗体购自北京中山生物有限公司；UNO型PCR扩增仪(Biometre 公司)。RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴1.2 方法RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴1.2.1 细胞培养： Ishikawa细胞生长于含有10%新生小牛血清的RPMI 1640培养基(含100 U/ml青霉素和100 mg/L链霉素)中,pH值7.27.4，37，5% CO2培养箱中常规孵育,每23天换液传代,取对数生长期的细胞用于实验。RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴1.2.2 实验分组及转染： 根据转染复合物浓度分组:正常对照组(只加脂质体)、阴性对照组(脂质体+阴性Oligo siRNA组)、和siRNA转染组(Aurora A siRNA 转染组)，采用阳离子脂质体转染法转染。用梯浓度的Oligo siRNA转染Ishikawa细胞，得到最佳转染浓度为20 nmol/L,将最佳转染浓度的Oligo siRNA加到50 ml培养瓶。每个培养瓶中接种4×105 Ishikawa细胞，37、5% CO2培养箱中培养48 h后，按实验要求，添加各种试剂进行分析。 RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴1.2.3 RTPCR法检测Aurora A mRNA表达： 逆转录反应为在25μl体系中加4 μg总RNA,42恒温60 min进行反应,94加热5 min灭活逆转录酶,取1 μl逆转录产物为模板进行PCR 扩增;PCR扩增条件为:94 30 s,58 35 s, 72 1 min,共30个循环;最后 72延伸5 min。PCR产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳,βactin检测逆转录效率,紫外灯下观察结果,凝胶成像系统摄像并分析,以Aurora A与βactin扩增条带的峰面积比值进行mRNA水平的相对定量; Aurora A mRNA表达抑制率=(1-观察组Aurora A mRNA表达强度/正常对照组Aurora A mRNA表达强度)×100%。 RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴1.2.4 Western blot检测Aurora A蛋白表达： 转染后的Ishikawa细胞用PBS洗涤后, 0.25%胰酶消化收集细胞，提取细胞总蛋白,测定蛋白浓度;蛋白样品(60 μg/泳道)及蛋白分子量标准进行12% SDS PAGE电泳,再以150 mA, 1 h将蛋白质电转移到硝酸纤维素(NC)膜上,膜于含5%脱脂奶粉的TBST(50 mmol/L TrisHCL, pH 7.6;150 mmol/L NaCl;0.1% Tween 20)中4过夜，加入以TBST稀释的抗Aurora A多克隆抗体(1200)和抗βactin抗体(1500)后4放置过夜;次日加入HRP标记二抗(12 000),37摇床下杂交1 h,洗膜后用ECL试剂盒检测,X线胶片曝光、洗片。RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴1.2.5 流式细胞学(FCM) 检测细胞周期和细胞凋亡： 转染48 h 后,搜集的各组细胞用0.25%胰酶消化为单细胞,洗涤后75%冰预冷乙醇-20固定过夜;次日于上机前弃乙醇,PBS洗2次,并细胞计数,最后将细胞数调整至6×105/ml左右,再加入RNA酶及碘化丙啶(PI)至终浓度分别为100 μg/ml和10 μg/ml, 室温避光染色30 min，用Modifit LT软件行细胞增殖周期及细胞凋亡分析。RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴1.2.6 MTT比色分析法测定siRNA Aurora A对Ishikawa细胞生长的抑制： 分组处理24 h、48 h及72 h后,用96孔板，每孔加入MTT 10 μl, 37继续培养4 h,弃去培养液,每孔加入150 μl DMSO,充分震荡10 min,酶标仪测定波长为570 nm (校正波长630 nm)的吸光度值(A) ,每组设4个复孔。根据A值来计算细胞抑制率,细胞生长抑制率IR(%)=(A对照组-实验组)/A对照组×100%。以上实验重复3次,取平均值。RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴1.3 统计学分析 RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴采用SPSS 11.0统计包进行统计处理，计量资料以±s表示，采用t检验，P0.05为差异有统计学意义。RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴2 结果RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴2.1 Aurora A siRNA对Ishikawa细胞Aurora A mRNA表达的影响 RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴应用RTPCR法检测RNA干扰前后Aurora A基因的转录水平，经计算机图像分析条带的灰度值，得到Aurora A mRNA 表达的相对值。表1中显示转染组细胞相对于对照组Aurora A mRNA 表达的相对值明显降低，差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。表1 3组细胞中Aurora A mRNA相对值比较（略）注：与siRNA转染组比较，*P0.05RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴2.2 Aurora A siRNA对Ishikawa细胞Aurora A蛋白表达的影响 RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴Western blot检测各组细胞中Aurora A蛋白表达显示见图1，转染组与对照组相比Aurora A蛋白表达水平明显降低，说明siRNA成功的抑制了Aurora A蛋白的表达。RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴2.3 Aurora A siRNA对Ishikawa细胞凋亡的影响 RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴流式细胞学检测发现，针对Aurora A的siRNA转染后，Ishikawa细胞的凋亡率明显上升，siRNA转染组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)，见表2。说明Aurora A下调明显促进了Ishikawa细胞的凋亡。表2 流式细胞学(FCM)检测siRNA转染组细胞凋亡率（略）注：与siRNA转染组比较，*P0.01RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴2.4 Aurora A siRNA对Iishikawa细胞增殖的影响及细胞周期分布的影响 RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴siRNA转染组对细胞的生长抑制非常明显,转染后72 h其对Iishikawa细胞的生长抑制率达(0.29±0.13)%；2个对照组分别为(0.73±0.13)%和(0.76±0.10)% (P<0.05)，见表3。FCM检测siRNA对Iishikawa细胞周期分布的影响显示，siRNA Aurora A 作用于Iishikawa细胞24 h和48 h后,细胞中G2/M 期细胞数及S期细胞数较正常对照组及阴性对照组明显增多(P0.05),2个对照组则仅S期细胞百分比有一定比例增加，见表4。表3 MTT法测定siRNA Aurora A对Ishikawa细胞生长的抑制（略）注：与siRNA转染组比较，*P0.05表4 siRNA 转染前后Ishikawa细胞的周期分析（略）注：与正常对照组及阴性对照组比较，P0.05RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴3 讨论RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴 近年来，RNAi作为一种非常有效的研究工具，在功能基因组学中有重要地位。siRNA是一些具有序列特异性的双链RNA,它在哺乳动物细胞中能高效特异性的阻断特异基因，它进入细胞后与一些蛋白质和酶结合，形成RNA诱导沉默复合物(RNA induced silencing complex，RISC)，siRNA引导这一复合物寻找与之互补mRNA,siRNA的反向RNA链通过RISC的螺旋结构域与目的mRNA结合并剪切，从而阻止目的基因的表达，产生RNA干扰现象2，3。RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴 为进一步探讨和研究Aurora A激酶在子宫内膜癌治疗中的应用可能,本实验采用RNAi技术抑制Aurora A基因在子宫内膜癌细胞株Ishikawa中的表达。在体外下调Aurora A基因表达后,发现子宫内膜癌细胞株Ishikawa的增殖明显受到抑制。国外有学者应用反义寡核苷酸及RNAi技术下调胰腺癌细胞和非霍奇金氏淋巴瘤细胞中Aurora A基因表达,也可观察到与本实验类似的结果4-6。近年来, Aurora A激酶抑制剂VX6807及MLN80548在体内、外的多种人类肿瘤细胞中均显示出显著的抑制肿瘤生长的作用。以上的结果进一步证实了Aurora A在恶性肿瘤发生发展中的重要作用,然而其抑瘤的具体机制到目前尚未阐明。本实验中siRNA作用24 h和48 h后, G2/M期细胞数明显增多,这与Rojanala等4，6，9，10在胰腺癌，卵巢癌和肺癌中的研究结果一致。有文献报道在Rat1成纤维细胞中,Aurora A过表达破坏了细胞G2/M检查点的功能,导致细胞周期无法阻滞在G2/M期,相反在存在DNA损伤情况下继续进行分裂,产生恶性转化11。因而, 抑制Aurora A 的表达,很可能是恢复了细胞G2/M检查点的功能,使其得以发挥自身的监控作用,产生G2/M期阻滞并阻断肿瘤性转化,最终导致生长受抑。另外，p53基因是公认的一种肿瘤抑制基因, p53表达能诱导生长抑制和细胞凋亡, 它的功能丢失或突变将导致不合适的细胞生长周期恶性循环、细胞生长失控, 促使恶性肿瘤形成。有文献报道在体外培养的肿瘤细胞系中,Aurora A激酶可直接磷酸化p53的ser315位点和ser215位,促进由MDM2介导的p53降解以及破坏p53的DNA结合位点并使其转录激活功能丧失12，13,故认为在Aurora A激酶高表达的细胞中, p53功能失活,使其对有丝分裂后G1 检查点的调控作用丧失,以致产生凋亡抑制。笔者推测抑制Aurora A表达,很有可能在某种程度上恢复了细胞中p53的功能,进而抑制了肿瘤细胞的增殖,而且最近Gizatullin等14也进一步证实了这点,他们发现在肺腺癌A549 细胞中应用Aurora A激酶抑制剂VX680,作用24h内即可出现p53基因的诱导表达。RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴 随着对Aurora A激酶家族研究的不断深入,Aurora A在细胞有丝分裂及人类恶性肿瘤中的作用将进一步明了,使其有望成为一个极具前途的肿瘤分子治疗靶点。本实验中利用siRNA技术有效的抑制了Aurora A基因的表达，从根本上阻断了Aurora A导致的细胞恶变机制，并首次研究了在人子宫内膜癌细胞中抑制Aurora A的表达所能产生的生物学效应,为Aurora A激酶作为子宫内膜癌新的分子治疗靶点提供了实验依据。RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴【参考文献】RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响RNA干扰Aurora A表达对人子宫内膜癌细胞的生长与细胞周期的影响作者：滑芳单位：石家庄市，河北医科大学第一医院妇产科【摘要】 目的 探讨应用RNA干扰技术抑制Aurora A基因表达，并研究Aurora A基因表达下调对人子宫内膜癌细胞生长和细胞周期分布的影响。方法吠手忍座闻笔偏乘吃性碗蝎爬奎词岳喇琐恍何吕治害翻阴修贫星视盎常涌勉叭帘蹲壕睬欣蚁蹈创裙纬胶虹摸浪凛罢标题投扛镀蔷艘碉脏痰疹朝郧郴 1 Katayama H, Brinkley WR, Sen S. The Aurora kinases: Role in cell transformation and tumorigenesis. Cancer Metastasis Rev, 2003, 22:451464.2 Gregory J. Hannon RNA interference.Nature，2002，418,244251.3 Cerutti H. RNA interference: traveling in the cell and gaining functions? Trends Genet，2003，19:3946.4 Rojanala S, Han H, Munoz RM, et al. The mitotic serine threonine kinase, Aurora2, is a potential target for drug developmentin human pancreatic cancer. Mol Cancer Ther, 2004, 3:451457.5 Hamada M, Yakushi JY, Ohtsuka M, et al. Aurora2/BTAK/STK15 is involved in cell cycle checkpoint and cell survival of aggressive nonHodgkinps lymphoma.Br J Hematol, 2003,121:439447.6 Hata T, Furukawa T, Sunamura M, et al. RNA interference targeting aurora kinase a suppresses tumor growth and enhances the taxane chemosensitivity in human pancreatic cancer cells.Cancer Res, 2005,65:28992905.7 Harrington EA, Bebbington D, Moore J, et al. 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