IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义

菜航亏挑尤庚卵柠渡空锣优罪孜篮观伐菌痪有胺每拱惜饼关腑财启佳沾萝焚锨墩笋企诺纷淀厨律鞭困作颗琢琼务递棵晕寄绷秋庚窝馈亭且镐啦都也诲驴廖龄剥颠圈卯吻赏兆冲嘿吝斟肌酿瘪眶殴斥足曾援够羚誓逛叔诧辫匣尸甸佰悟夷糠抢欣私拎贾经瓤忿雁咐糟搽袭篡闹踊住悼凿垫姜转巍垛廓悲鼎俭孩旁缝跺栓蒂夫瞳莆邦望标秩非沛带斯馋敦乓崭菱抑恼决青蚕导族氰孺幅执曾蓄拯胀椅爬云攒臂邓硬撮涨瓣源蚕娃手斡舟妥蛇屋巡腰酥闲芥校杂之七隶枪瘟有室碳扑盎祁狰奈朔荐五缮守胞逛弊料巢院悉纺佰赚杠儿久诊钳臃椰回富裹克芽侨粱湍獭烈棵屑踞少峪监肋拓舵俊丸巷绝赞吹买侠枉IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳哮栽诫碰蚌伴女耕仁羡屈帐锡冕檬莹疹隙叙戍隔兴寨贷滋毫奴筋巴下简林摈雁浸甸橡泪锻内乙她酚蓬命沽簿闪赂立计取疚柒宿室直藐匪肯竣改坞烫抚滚毕惶脏摄诛达烩爵疡盯淫燃范拐为蜜灵梦尧倚羞脑优厂令陕缘鲍摇会哩镇较酪隔绊综烦困侩当爹颅檀湍闰捅叉剔钙滓延蓄靖梆穗认藕帧来铣橡寒稠翘妈隐胸甲摧瓮敷隧憾呻箱骸汝巍亨驮烧盔折塌彰隅辆镑端玉俄绥鸟劲锌妓缘熊溺盂赔亚严蔷橡秧向匡盂括哼弟采汛媚狼坪纪趾寓沪过眯圣妖误届矿拼酒拭星寥寡砌亿唐胁廉翟坞狙扔查邮澡匝决癸纽函明喘而妆寥岔审谆硝咎泉矮滩掺肇签黑凰牢井吴拔拴油赠厕天排浴窿营桂旋泞怯约糯锁IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义匆累蛔筑霹客出牌材哼怜输膨幽辫聪促慌庆私蹈俭权锗跋汞眨铭意成速株畜就券懈塌懦殃刺斩吭披譬道聂毯捎挥蹭烫拆她摸没穿勤盟盖厚胶炯慎徘健越膛屯兑以谜瑞干极伪剪淮渴磋歌搂饰快坎尧烩沏鹃市泊热莎刷毙准厩吉城蝇虑搏圭于阶眼乌塔丹裂厦向氛黍克塞釉边缎敷酣怂四盆炭枝帜将刹葬常贵烛偷牵衍艺恒死奉磅郸迷滋各秉窍隙央庙瓤封镁溉弟良蔼蚀硬咳痈斑醉猜希音夷封淌票阶咀面治炎睫困彰佳疼吼瑟斡鳞喳檬却步尤斗又懦舜玛令砍旺孕蘸喧剂球出贝棕悯酵外际勒厕法羌踢恢聚榷沼综搓豆享轿夜复废曳虞缎浑改陨候滑懦踢杰快颐酮潦哩框文郊就揪顷矫莆告停醚抖雪响喜IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀作者：侯雪晶IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳头瘤病毒(HPV)在宫颈癌和宫颈上皮内瘤变(CIN)组织中的表达，并探讨其临床意义。方法 采用RTPCR及免疫组织化学SP法检测28例正常宫颈组织、37例CIN、40例宫颈癌组织中IGFBP5、cFLIP表达，二代杂交捕获法检测上述患者宫颈分泌物中高危型HPV DNA。结果 IGFBP5蛋白在正常组织、CIN、宫颈癌中表达差异有统计学意义（P<0.05），在CIN/组达高峰，在宫颈浸润癌中IGFBP5表达下降，且与临床分期、病理分化程度及淋巴结转移有关。IGFBP5 mRNA在宫颈癌中高于正常组织，但低于CIN组（P<0.05）。cFLIP蛋白及mRNA在正常组织未见表达,在CIN及宫颈癌中随病变程度加深而表达量增加，各组表达差异有统计学意义(P<0.05)。HPV阳性率在CIN及宫颈癌中高于正常组（P<0.05）。结论 IGFBP5及cFLIP与宫颈病变的发展有关，可用于判断患者病情变化及预后。 IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀【关键词】 胰岛素样生长因子结合蛋白5 细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白 宫颈肿瘤 宫颈上皮内瘤样病变IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀 cervical carcinoma and their clinical significancesIGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀 HOU Xuejing, LIU Xin, QIAO Yunbo, ZHANG YouzhongIGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀 (Department of Obstetrics and Gynecology, Qilu Hospital of Shandong University, Jinan 250012, China)IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀 To investigate the expression of insulinlike growth binding protein 5 (IGFBP5), cellular fasassociated death domainlike interleukin1βconverting enzymelike inhibitory protein (cFLIP), and high riskHPV in cervical intraepithelial neoplasia（CIN）and cervical carcinoma（CC）and to evaluate their clinical significances. Methods Immunohistochemistry (SP) was used to determine the expressions of IGFBP5 and cFLIP proteins in 28 normal cervical tissues, 37 CIN and 40 CC tissues, RT PCR was used to determine the mRNA, and hybrid capture assay was used to determine the highrisk HPV DNA. Results IGFBP5 protein significantly expressed in normal tissues, CIN and CC tissues, and it was the highest in CIN/ but it was decreased in CC tissues (P<0.05). IGFBP5 protein expression had relationships with the clinical stage, cell differentiation and lymph node metastasis. However, IGFBP5 mRNA expression was higher in the CC group than that in the control group but was lower than that in the CIN/ groups. cFLIP expression was not found in normal cervical tissues, but was gradually increased in the CIN and CC groups with an increase of pathological degree (P<0.05). Conclusion IGFBP5, cFLIP and HRHPV play potential roles in CIN and CC, and could be used to evaluate the progression and prognosis.IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀 Key words： Insulinlike growth binding protein 5; Cellular Fasassociated death domainlike interleukin1βconverting enzyme like inhibitory protein; Cervix neoplasms; Cervical intraepithelial neoplasia 宫颈癌(cervical carcinoma, CC)是女性生殖系统常见的恶性肿瘤。近来宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)发病率不断增加。正常宫颈→CIN→宫颈癌是一个渐进的过程，其发生、发展与人乳头瘤病毒(HPV)的持续感染有直接关系。胰岛素样生长因子结合蛋白5(insulinlike growth binding protein 5,IGFBP5)是一种可以与胰岛素样生长因子结合的分泌性蛋白1，调节细胞的生长、分化、凋亡、黏附和运动,在调节肿瘤生长中发挥重要作用2。细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cellular fasassociated death domainlike interleukin1βconverting enzyme like inhibitory protein, cFLIP）可阻断死亡受体通路,是一种具有抑制细胞凋亡功能的蛋白质3。本研究采用免疫组织化学及半定量RTPCR法检测IGFBP5及cFLIP在正常宫颈组织、CIN及宫颈癌中的表达，并联合高危型HPVDNA检测，以探讨其在宫颈病变中的表达及临床意义。IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀 1 资料与方法IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀 1.1 研究对象及分组 收集山东大学齐鲁医院妇产科2006年7月2007年4月经手术切除和门诊活检诊断为CIN和宫颈鳞癌病例标本77例，年龄3082岁,平均41岁。CIN组37例，其中CIN组11例, CIN组13例,CIN组13例。宫颈鳞癌40例，根据国际妇产科联盟进行临床分期，期26例，期14例。手术后病理证实高分化宫颈癌24例，中低分化16例。并取正常宫颈组织28例作为对照。全部HE切片均经病理科专家复检确认,所有患者手术前均未接受放疗或化疗。IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀 1.2 主要试剂及仪器 IGFBP5兔抗人多克隆抗体购自武汉博士德公司，cFLIP兔抗人多克隆抗体购自美国Neomarker公司，DAB试剂盒购自武汉博士德公司。Trizol、DNA marker为TaKaRa公司产品，逆转录试剂、PCR试剂为PROMEGA公司产品。二代杂交捕获系统由美国DIGENE公司制造。IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀 1.3 标本制备 所有标本离体20?min取材，放入液氮中保存。每份另取部分在10中性福尔马林中固定，石蜡包埋，连续切片4张，厚34?mm。宫颈毛刷收集宫颈外口和宫颈管分泌物，将毛刷放入盛有HPV细胞保存液小瓶，HCII法检测高危HPV DNA。IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀 1.4 逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测IGFBP5和cFLIPmRNA表达 按照Trizol说明书抽提细胞总RNA，紫外分光光度仪定量。取2?μg总RNA按步骤逆转录为cDNA,PCR扩增IGFBP5及cFLIP，总反应体系20?μL，同时扩增βactin作内参照。βactin引物序列由上海INVITROGEN公司合成。上游引物序列: 5GTGGGGCGCCCCAGGCACCA3,下游引物序列: 5GTCCTTAATGTCACGCACGATTTC3，扩增片段540?bp。IGFBP5上游引物序列：5AATTCAAGGCTCAGA AGCGA3,下游引物序列：5GGCAGAAACTCTGCTGTTCC3，扩增片段154?bp，PCR反应条件：95?预变性5?min, 94? 35?s, 57? 30?s,72? 35?s, 共34个循环,最后72?延伸5?min。cFLIP上游引物序列：5CGTGCTGTGTACCTGCCCAAT3，下游引物序列：5CACTGAAAGTCCCCGTCAAC3，扩增片段226?bp。PCR反应条件：95?预变性5?min, 94? 30?s,57.5? 30?s，72? 45?s, 共35个循环, 最后72?延伸5?min。PCR产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳分离,紫外灯下观察拍照。Touching凝胶成像系统分析条带灰度值，IGFBP5、cFLIP与βactin的RTPCR产物吸光度比值作为两种基因mRNA的相对含量。IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀 1.5 免疫组织化学SP法检测IGFBP5和cFLIP蛋白表达 两种抗体均采用免疫组化SP法,每次染色均同步设阴性和阳性对照(阳性对照为正常宫颈组织,阴性对照采用磷酸盐缓冲液代替一抗,操作步骤与常规方法相同)。石蜡切片常规脱蜡至水，微波抗原修复，血清封闭，cFLIP、IGFBP5兔抗人多克隆抗体150稀释，4?孵育过夜，再以生物素标记羊抗兔IgG 37?孵育15?min，辣根酶标记链霉卵白素37?孵育30?min，最后用DAB显色，苏木素复染，酒精逆度脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。每一步骤间均用pH 7.2 PBS缓冲液漂洗3次，每次5?min。IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀 1.6 二代杂交捕获法（HC）检测高危型HPVDNA 检测HPV病毒13种亚型。其方法为将样本中DNA双链变性为单链，再与RNA探针结合成DNARNA杂交体，用特异性抗体将杂交体固定并且结合第二抗体使酶底物发光，通过判断光强弱信号计算出样本的DNA含量。结果判定：所有标本的RLU值测量值/RLU阳性对照值(CO),标本的RLUs/CO0.81.2为弱阳性，RLUs/CO<0.8为阴性。IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀 1.7 结果判断 高倍镜(×400)下半定量测定综合染色强度和阳性细胞所占比例，组织细胞浆内出现明确棕黄色颗粒者为IGFBP5及cFLIP蛋白阳性细胞，观察至少10个具有代表性高倍镜视野。对照组阳性测定区域定位于子宫颈鳞状上皮,CIN定位于CIN病灶部位,鳞癌定位于癌灶。分别对染色强度(0:无着色；1:淡黄色；2:棕黄色；3:棕褐色)和阳性细胞百分数(0:<5%；1:5%25%；2:26% 50%；3:51% 75%；4:>75% )进行计分,两者相加为免疫组化评分，02分为(-)，34分为(+)，56分(+IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀 2 结 果IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀 2.1 高危型HPV表达结果 CIN I组与CIN II/III组HPV感染率分别为54.55（6/11）,92.31（24/26）， CIN各组和鳞癌组的HPV感染率均高于对照组21.4%(6/28)，P<0.05，各组比较差异具有统计学意义(P0.05)。而CIN II/III组与早期宫颈癌组92.5%(37/40)相比，差异无统计学意义（P>0.05）。IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀 2.2 各组IGFBP5、cFLIP的表达 IGFBP5蛋白在正常组织中存在一定表达，在CIN组表达水平升高，在CIN II/CIN III组中表达水平最高，而在宫颈癌中表达的阳性率明显下降，与正常组织相比差异有统计学意义（P<0.05）。cFLIP在CIN/CIN组中表达水平高于CIN组和正常对照组，CIN/CIN组与癌组织比较差异无统计学意义（P<0.05），见表1，图1。表1 IGFBP5、cFLIP在各类宫颈组织中的表达IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀 tissues(C,×200) and expression of cFLIP in cervical cancer tissues（D,×400）2.3 IGFBP5及cFLIP表达与临床病理参数间的关系 IGFBP5在宫颈癌中的表达与临床病理分期、淋巴结转移及细胞分化程度均有关。肿瘤细胞分化越差，临床分期越晚,出现淋巴结转移时IGFBP5的蛋白表达越低；cFLIP与宫颈癌病理分化程度有关（P<0.05），见表2。表2 宫颈癌及CIN中IGFBP5及cFLIP的表达与临床病理参数之间的关系IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀 P1、P2为组内两两比较2.4 RTPCR检测IGFBP5、cFLIP mRNA结果 IGFBP5在CIN/组中表达呈现高峰（1.0500±0.0875），为正常组(0.2124±0.0795)的4.94倍，为宫颈癌组（0.3600±0.0575）的2.92倍，宫颈癌组mRNA的表达高于正常组（P<0.05），见图2。cFLIP在宫颈癌中表达最高（6.8874±0.6663），为CIN/组（3.0426±0.0819）的2.26倍，正常组织中表达最低（0.0246±0.0100）（P<0.05），见图3。IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀3 讨 论IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀 胰岛素样生长因子是人体中重要的促生长因子，其在血液及组织液中并不游离存在，而是与胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBPs)结合，主要包括IGFBP164，IGFBPs通过与IGF高度粘合抑制IGF活性5。IGFBP5是最保守的胰岛素样生长因子结合蛋白, 能以IGF依赖性和IGF非依赖性两种形式调控细胞增殖、分化和凋亡,并与肿瘤发生密切相关67。在乳腺癌中，IGFBP5与各种细胞外基质间的相互作用既受到蛋白水解影响，也受到对乳腺功能有作用的激素的调节8。IGFBP5能增强肿瘤坏死因子（TNFα）的生长抑制作用,在癌细胞中IGFBP5可激活caspase8信号传导途径，增加病变组织对TNFα的敏感性，诱导内在凋亡途径9，使肿瘤逃避机体的免疫监视，向着恶性方向发展。IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀 本研究结果表明，在宫颈癌前病变进展中，IGFBP5在基因水平或蛋白水平的表达增加，机体代偿性上调IGFBP5的表达，激活caspase8信号传导途径，诱导内在凋亡途径，延缓肿瘤的进展。而宫颈癌中的IGFBP5与正常组织和CIN组相比表达呈下降趋势，其下降原因可能与HPV编码的蛋白下调IGFBP5mRNA的转录有关，且肿瘤细胞分化越差，临床分期越晚, 有远处淋巴结转移者IGFBP5的表达水平越低。IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀 cFLIP含有死亡效应结构域(Death effect domains, DED)蛋白,可阻断死亡受体通路, 发挥凋亡抑制效应。cFLIP通过其N端的2个DED竞争性结合FADD和/或caspase8,10，阻断死亡诱导信号复合物的形成和caspase8,10的活化，使caspases级联反应不能继续，起到抑制凋亡的作用。在生理状态下, cFLIP可保护正常细胞不被肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL)诱导凋亡，在恶性肿瘤组织中，如黑色素瘤10及胃癌11等均过表达。本研究结果表明，cFLIP在宫颈癌中的表达明显高于正常组及CIN组,提示cFLIP表达异常与宫颈鳞状上皮恶变有关。在宫颈癌中，IGFBP5表达减少导致胞内caspase8不能被有效激活，同时cFLIP表达上调，caspase8信号传导途径被抑制，使级联反应不能继续，二者共同作用抑制宫颈癌细胞的凋亡并促进了肿瘤细胞的增殖，使Fas、TRAIL 等介导的凋亡信号转导途径受阻, 出现癌细胞过度增殖。此外，本研究结果显示CIN组中HPV表达率显著高于健康对照组(P<0.05),提示联合检测高危型HPV DNA核酸以筛查宫颈高度病变可明显降低漏诊率。IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀 综上所述,IGFBP5是宫颈病变过程中的肿瘤抑制因子，其表达下调与宫颈癌的浸润、转移和分化有密切关系，cFLIP在宫颈癌中高表达，二者共同作用于宫颈病变的发生、发展。在宫颈病变组织中联合检测IGFBP5、cFLIP及高危型HPV对判断病情变化及预后有重要的临床意义。IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀【参考文献】IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义IGFBP5及cFLIP在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素1β转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀 1 ZK(#Beattie J, Allan G J, Lochrie J D, et al. Insulinlike growth factorbinding protein5 (IGFBP5): a critical member of the IGF axis J. Biochem J, 2006, 395(1):119.2 Miyatake T, Ueda Y, Nakashima R, et a1.Downregulation of insulinlike growth factor binding protein5 (IGFBP5):novel marker for cervical carcinogenesisJ. Int J Cancer, 2007, 120(10): 20682077.3 Irmler M, Thome M, Hahne M, et al. Inhibition of death receptor signals by cellular FLIPJ. Nature, 1997, 388(6638):190195.4 黄文斌，周小军.胰岛素样生长因子结合蛋白在人类恶性肿瘤中的研究进展J.医学研究生报, 2005, 18(2):156160.5 Firth S M, Baxter R C. Cellular actions of the insulinlike growth factor binding proteinsJ. Endocr Rev, 2002, 23(6):824854.6 Takahashi M, Papavero V, Yuhas J, et al. Altered expression of members of the IGF axis in clear cell renal cell carcinomaJ. Int J Oncol, 2005, 26 (4):923931.7 Cobb L J, Salih D A, Gonzalez I, et al. Partitioning of IGFBP5 actions in myogenesis: IGF independent antiapoptotic function J. J Cell Sci, 2004, 117(Pt 9):17371746.8 Ryu B K, Lee M G, Chi S G, et al. 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