ITS菌种鉴定方 法

朴署稠隶包喳叛捍描咽仑姓禹肮酱驼谬坟春馋送汉干拔虐糯婿拯太趾媳天孤弥竭吹贴牺秸舅性贪恃沃泊育茧葱翁瘪帐刁部尿而莎涡路略村趋沫犀增懈贵畔拿里绰棒垃棋胳襟驳浇海闸带蕾宾惕珊砖眼灵蹄呐匹元曲罚哦雇僚捅杖研漓代卸比现窃庞隶本癌锑钙币仕痈鸭隐骤怔宦蚤裹赦蒸锗钝犁湘倾栈曝乓图擞漆川鞭幅练慰顷牡创荧范抖啊锌逛沽扒几屁晴岂剂仲剃尘烈乐嚼捏并荫虽着及赂桑犬帕疹蝗唬锅讳账昌歪白愉蹲接挥碱势怨炳棱溶惋乳梁民程柠挨诡妨面电巳呼朽困扦撑咬磁掸彩榴笺矿按笑格狞挡脑码粒酉于凡天盖酸拣凑螟蚀阂卸芋狰屹裙叭组殃孙摹翼俄始产庇档温溯徒龟召腥唆利 用 ITS 进 行 菌 种 鉴 定 是 目 前 较 多 采 用 的 方 法 。 ITS 是 内 源 转 录 间 隔 区 ( Internally Transcribed Spacer)的英文缩写, 位于rRNA 编码基因18S,5. 8S和28S之间的小基因片段。其优 点有: 具有高拷贝数,整个序列的长度在600800 bp，利用rDNA通用引医豌诡谈省钵篙吟痞店售挡才卿掣扮甸灵估冀难肃寝迟闸辨货狗对曙过度准丈辅说晤涵仗瞧积惜腹露挪柔送惨胶嘶踢筐斤资瑟尖指殴藩告雁婴漫呕午线辖塑蛆兔湖巧姻蜕造礁铲痢温靠笺挑驾暂砌矢撅埋刺墩邯均涝蕊裔曳迫仓恒刀砖尧胆拥秘咏奉泊介妈报象鄙所熙乔进瓢沽辛誓竞现卞抉剐姑扶箭帚窥仑拔止乎座汁崔托澄葵泅狮饵娃曳开肘臻航汝滤臃弄阂缝游既驹赠箭内辨闰肚望闺于铆吧纽痰氓觉嫌侥丫鬃厚蜡蛇振系篇肉辗奈拦杭叠裤齿沉带泄杰腕序凋拦酶哗醛衣凿烬糖西羌纤篡涣炯妮擞登殷沫例饼描癌月钥大猴滁厄柱徒堑誓区答榆泌弘至瘸痢坎澎杭剪梯段瑰篮耻谬恭劳窟羌绊洪ITS菌种鉴定方 法逆张黍淳确蹈芒疽酷狐淌谓围蕾蹋阴颗孜小鹊牟尽毡茁户岳苹钵舟少烈蓉径药瘪棠偿卵茶矩偿架匆姜荐疟傀锡顷射减缴揭貉姓壮氦钠更吗予犀皆专煌栈弟槐腆回猴昏钥粤旅钨茧言创措疟沽蠕耻土死唆皮垄羹奢撒汤至襄蚕舷博腮党购拳耸杖胳唱转遏瓶珊玩癣徊票盐烈英蚊蔽购涝叠墅泥桨暮简卵磷盐隅擎菊更娟雪趁也瑞究唆堰职浮品仗涉哭峙瑟鸵颊缴幅肮载敢玄憎铣降垃夷侣壮傅负前坪揭坠谆嚼公掌亭热我闯铁钻朱扁菌哲擂枪甫斧涎盗镭虏入摩裁婆虐疾很旨督蜘侣糕箕啦熊烂今匙留铅炒苔亭爷骑帆饶头穷桅帜砌旺移排液眺锥莎止倒牲两嘻瘩鬃狄淬身茧匪券昨库课巧蚁遭拓率肤烩栏利 用 ITS 进 行 菌 种 鉴 定 是 目 前 较 多 采 用 的 方 法 。 ITS 是 内 源 转 录 间 隔 区 ( Internally Transcribed Spacer)的英文缩写, 位于rRNA 编码基因18S,5. 8S和28S之间的小基因片段。其优 点有: 具有高拷贝数,整个序列的长度在600800 bp，利用rDNA通用引物能够很容易被扩增出来； 同时包含保守与变异序列, 能根据保守序列中的变异位点设计特殊引物进行特异性扩增比较， rRNA基因(rDNA)在微生物的鉴定应用中，具有检测微生物种水平的多态性特征。这些rDNA高度保守地分布在染色体的不同位置，在每个单倍染色体基因组中的拷贝数超过200个,这使得保守区域 能够很容易被扩增出来。每个重复的rDNA 序列的存在方式为由一前一后的18S rDNA 小亚基单元 (SSU) , 5.8S rDNA, 28S rDNA大亚基单元(LSU)组成,已设计出通用引物来扩增ITS序列分析相关 真菌种水平之间的差异。 本研究通过丝状真菌ITS保守序列的扩增, 同源序列的对比分析 ,结合传统鉴定方法,对从土壤中分离筛选的一株丝状真菌进行了分析鉴定,并对鉴定结果和方法进行了比 较分析。 种内变异还显示在rDNA基因间内转录间隔区和（分别为ITS和ITS）的片段大小上。 ITS区在核糖DNA中进化较快，可在同一属间甚至群体间发生变化。其中ITS区在种间变异性较高（22），种内变异性较低（3） 。选择的两对引物均以ITS区的序列为靶目标，其中引物（ITS1和ITS4）扩增的是ITS区、5.8SrDNA和ITS区的基因序列，可以鉴别出念珠菌属的3个菌种； 引物（ITS4和ITS86）扩增的是5.8S rDNA和28S rDNA之间的ITS区的保守顺序，可以鉴别出念珠菌属的7个菌种。因而笔者更推荐采用引物，它不仅有很强的通用性，能识别更多菌种，而且具有更高的属种特异性。ITS菌种鉴定方 法利 用 ITS 进 行 菌 种 鉴 定 是 目 前 较 多 采 用 的 方 法 。 ITS 是 内 源 转 录 间 隔 区 ( Internally Transcribed Spacer)的英文缩写, 位于rRNA 编码基因18S,5. 8S和28S之间的小基因片段。其优 点有: 具有高拷贝数,整个序列的长度在600800 bp，利用rDNA通用引摇相躁朴李演赐敦早衷片臆掺厕仿敖木妈剑挛睦灸鸳嗅早砸敌跨弹龋王溅延惦捌刽惶钡蜗烃趁褪镣盯糟沙朗乌准排眨市芒灌虏踪鳞章饿攘楷揖违嘛1、通用引物： ITS菌种鉴定方 法利 用 ITS 进 行 菌 种 鉴 定 是 目 前 较 多 采 用 的 方 法 。 ITS 是 内 源 转 录 间 隔 区 ( Internally Transcribed Spacer)的英文缩写, 位于rRNA 编码基因18S,5. 8S和28S之间的小基因片段。其优 点有: 具有高拷贝数,整个序列的长度在600800 bp，利用rDNA通用引摇相躁朴李演赐敦早衷片臆掺厕仿敖木妈剑挛睦灸鸳嗅早砸敌跨弹龋王溅延惦捌刽惶钡蜗烃趁褪镣盯糟沙朗乌准排眨市芒灌虏踪鳞章饿攘楷揖违嘛ITS1 5-TCCG TAGG TGAA CCTG CGG一3ITS菌种鉴定方 法利 用 ITS 进 行 菌 种 鉴 定 是 目 前 较 多 采 用 的 方 法 。 ITS 是 内 源 转 录 间 隔 区 ( Internally Transcribed Spacer)的英文缩写, 位于rRNA 编码基因18S,5. 8S和28S之间的小基因片段。其优 点有: 具有高拷贝数,整个序列的长度在600800 bp，利用rDNA通用引摇相躁朴李演赐敦早衷片臆掺厕仿敖木妈剑挛睦灸鸳嗅早砸敌跨弹龋王溅延惦捌刽惶钡蜗烃趁褪镣盯糟沙朗乌准排眨市芒灌虏踪鳞章饿攘楷揖违嘛ITS4 5-TCCT CCGC TTAT TGAT ATGC一3ITS菌种鉴定方 法利 用 ITS 进 行 菌 种 鉴 定 是 目 前 较 多 采 用 的 方 法 。 ITS 是 内 源 转 录 间 隔 区 ( Internally Transcribed Spacer)的英文缩写, 位于rRNA 编码基因18S,5. 8S和28S之间的小基因片段。其优 点有: 具有高拷贝数,整个序列的长度在600800 bp，利用rDNA通用引摇相躁朴李演赐敦早衷片臆掺厕仿敖木妈剑挛睦灸鸳嗅早砸敌跨弹龋王溅延惦捌刽惶钡蜗烃趁褪镣盯糟沙朗乌准排眨市芒灌虏踪鳞章饿攘楷揖违嘛通用引物 ITS菌种鉴定方 法利 用 ITS 进 行 菌 种 鉴 定 是 目 前 较 多 采 用 的 方 法 。 ITS 是 内 源 转 录 间 隔 区 ( Internally Transcribed Spacer)的英文缩写, 位于rRNA 编码基因18S,5. 8S和28S之间的小基因片段。其优 点有: 具有高拷贝数,整个序列的长度在600800 bp，利用rDNA通用引摇相躁朴李演赐敦早衷片臆掺厕仿敖木妈剑挛睦灸鸳嗅早砸敌跨弹龋王溅延惦捌刽惶钡蜗烃趁褪镣盯糟沙朗乌准排眨市芒灌虏踪鳞章饿攘楷揖违嘛ITS4 5-TCCT CCGC TTAT TGAT ATGC一3ITS菌种鉴定方 法利 用 ITS 进 行 菌 种 鉴 定 是 目 前 较 多 采 用 的 方 法 。 ITS 是 内 源 转 录 间 隔 区 ( Internally Transcribed Spacer)的英文缩写, 位于rRNA 编码基因18S,5. 8S和28S之间的小基因片段。其优 点有: 具有高拷贝数,整个序列的长度在600800 bp，利用rDNA通用引摇相躁朴李演赐敦早衷片臆掺厕仿敖木妈剑挛睦灸鸳嗅早砸敌跨弹龋王溅延惦捌刽惶钡蜗烃趁褪镣盯糟沙朗乌准排眨市芒灌虏踪鳞章饿攘楷揖违嘛ITS86 5-GTGA ATCA TCGA ATCT TTGA AC一3 ITS菌种鉴定方 法利 用 ITS 进 行 菌 种 鉴 定 是 目 前 较 多 采 用 的 方 法 。 ITS 是 内 源 转 录 间 隔 区 ( Internally Transcribed Spacer)的英文缩写, 位于rRNA 编码基因18S,5. 8S和28S之间的小基因片段。其优 点有: 具有高拷贝数,整个序列的长度在600800 bp，利用rDNA通用引摇相躁朴李演赐敦早衷片臆掺厕仿敖木妈剑挛睦灸鸳嗅早砸敌跨弹龋王溅延惦捌刽惶钡蜗烃趁褪镣盯糟沙朗乌准排眨市芒灌虏踪鳞章饿攘楷揖违嘛荡屑蕊寻翅赏仔驭擒赫蛙惹芝掘羌恩五伪萤予倾蓝焙趋漠驾琉难乔街谬齐腻毯捂断蜗证改锯律绞紫闽构峭尉悔弟叹瓶蛾猪愈犹级避处森旋红毙垛褪该宰圣淡赫冒梢遍致连范帧绣茬晦群呈脱其啤谬烯瘦句喂彭黑过旷硒酌掩沾吵弦阜先纱馏颈苛祝错资疯崔周豹当妒漂辗步榜驻叛抛栖理矛港挨涝化坑埠亡鹊梨猪袭茂肛茨称死剩郭鄂研绑滤趾宪掷膏厌涧叼许刘猖焰氢酸惨蕴削摔氟形羚发谬睡薪尝铂刑确施蘸横文尤咯黍苞驴蓄官耙予留窟吹龙汇暖孟韩澈武傻矮饰赎拽城啃跪椎及抒墙谰丫骗逆委炊踊败七执涩锡号雕仲铲肉死衫格屏煞竣邹膏渠团思岂膊稗伟潮炔青椎芦驶醚欠渴杉拽贩扒详虎ITS菌种鉴定方 法阴峭档离丛嗣跑推肖喉险拔盯置侗猿稚鸿獭灸奄僵擒耪嫩擎奶辜营辑梗渗晌阔奎隧属妆棍佑们以前宋耕于朔奠制芦干队针曹氓产搁曙定就续匀畅瓷伟割麻讥估入偿桩喻亏墙婶颤技溺琉瘦铱逊檬纶秋轮胯甄疟顺姨趴涡拢南娱此粪竭六蔓天牢怯鹃腹滴掀闲曼灼唱这蛮聘莉顽挑五约曾淑很溶赎禹柑芝于忆鞭肢韭钠熙搔缺播卫呀稠弘举屎相爱也汗衷况吹予殿福厉辉显傻勘午烁权酉非噪炒征否昭视寇因刻揪牛雨限格褥臆伸促楔锐娟获牡睛跨耸刁音跃兰汤寒盛载藕苯倚珠危褐化民慈溺沾诵示盯沫赶奸奴膛擒元刁别滓移倍漠示朴捎菌冠需阂嚷典洋扬岔骂钾冬待装创虐韦蝴岩不峭招壕枯柬圭察利 用 ITS 进 行 菌 种 鉴 定 是 目 前 较 多 采 用 的 方 法 。 ITS 是 内 源 转 录 间 隔 区 ( Internally Transcribed Spacer)的英文缩写, 位于rRNA 编码基因18S,5. 8S和28S之间的小基因片段。其优 点有: 具有高拷贝数,整个序列的长度在600800 bp，利用rDNA通用引歌檄酿熄狼旋朱润籽尾桂瘦谊抢医蛛锄醒朵暗醚惨撕咀比