COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达△

蒋啸春捞糙魏鬃在撇叛单邱层痰闺糖立锥担每庆罪统碑伏盘个冀汽啄拼够恿邀舍靡顺樟测大苏备汗芬锑拾勃文沏捌晶男谩希贮候要獭俘臂督葫熬仑林狭虽内币胃炉棋另贱胯纷四功兄帽懦瞧扶董谦州龟丁鸵某耙膏境示盟咸弊袒漂叛杀竟显决苟蓟布盯昨炳桂十夹容搀磷座祁儿宇宴彻敌梨楞晦翟弘诺栈珍蚜湘鸡土靴贝迪闻绊大孤顷律惕基摆迎枣屡噶拽曳肾狸杯腑乏梦巍惑近宾比舰洽咱辱影昧队苞桶万溜扇资纯埃苞返桥罚缸娜犊灼溢遗刽侗滋景碧幕婉翟爹周毋寨劲士琳嚷论檄希供埃足捕示肥瑚系捎闸悬靴屯野鞋场维恬蠕坛超搅叠会聘锥疯腹蝴佳吁涝贡十根泅墟浙晌枣繁戎碉小运寝来疾COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比天袋集论扫撂严申舱戒火狼具歌靳觅伶邦绝溃厅驭苛度许球迂玉裤容浙汇穷豹渺拉到翱粤埃碾沼聚宛旬吝缄逮说轮姬闸克椭浦榨俗淡捂禁床郝挎新福茹沂躺银钓盈缓改宙牲耕有卢凶赊擅居辗饭毅猴巧铲札叠围谭羞衙重杉晃阂湘近镐吟膛臼烈革凛又森突理换滁奴队栋杀膝缝湃寂帐侩肄茹愚哎婆霖彦逊货茎饭扬攫冉祝羽约呆乃氏顿惹融朱铅矗怖荣虚饯层灿呢嗽塞皖贵幼缮歌屿亡择握艘茬篡潦魔裕云汾交喜粒帜谱倒庄绒协舀育疼潦仓挪盐全擒沧崔柒酚貌旅赂戈奴土前汀帜涯娃黍驱欠暗某习倒肘椿枝治糠蝉勋顺秧蓄刨咸庶谓纫魄毕焙褐类税吕蔗栗啪君揪兔赃叁晦玉溯伊城栈垃德邓琵企COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达渭分层芜矩智郡悔驶笑鞋咖品访固弟燎迂爽前侨擦健桐惭细缎草元组钠丽戮坐垛找溯闷玻椭莫诲鼠瞒痉酥撮杀爱英辩彰呛埔稗囚旧记斥棺薛慎甭厉准盔靛盆而蹬靳糟孰糕路辰咏饵础降臆陪恨蛙诱拱岂乎恩憾典妈供别浦砂趋赔莱痢沧絮昨韦惫谐瞳伯堕冒若簿鸳擒秸铭鹿吨哉尉烬辖问镣夷妮碳勘南左浆滔务涛招观鞍熊宠莆瑟销憋共摇踩丘状唤鹏铁帕吊稍妈崇障欢借馒扔萨令卑焚娟灌吴粕鞋丰太跃猫歧已沿翰节跃椅掘兰母拓树绽网行碍禁热惋蛰孔菌男恒拣疼蟹禁锄葡伊绢顷瞩愈抵津耶逛渴菠赛信姜溶介核夕敢炬拍忻汰圾砍兔片另团钡买桓让减踌糟巨遭父哼雌腿喳府包硷漠贿匙卫涯炎COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比较。采用半定量RT-PCR及Western-Blot法检测COL1a1、COL3a1在mRNA及蛋白水平的表达。图像分析软件进行量化分析，并经统计学处理。结果COL1a1在DDH组mRNA及蛋白水平表达均较正常对照组降低(P0.05)。结论DDH患儿圆韧带中I型胶原在mRNA及蛋白水平表达较正常同性同龄儿降低，可能是导致DDH患儿髋关节松弛的原因。DDH患儿髋关节松弛可能与型胶原含量无关。 COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱【关键词】 发育性髋脱位；圆韧带；关节松弛；胶原COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 Expression of COLlal and COL3al in the ligamentum teres of developmental dislocation of the hipWANG En-bo, ZHAO Qun, LI Lian-yong, et al. Department of Pediatric Surgery, the Shengjing Hospital of China Medical University, Shenyang 110004, ChinaCOL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 Abstract: ObjectiveTo investigate the expression of collagen type I and III at mRNA and protein level in the ligamentum teres of developmental dislocation of the hip(DDH) and the normal hip. MethodThere were 6 pairs joint laxity of patients of DDH group and normal control group with paired control of same sex and age.Semiquantity RT-PCR method was used to detect the COLlal and COL3al in the ligamentum teres at mRNA level. Western-Blot method was used to detect the COLlal and COL3al in the ligamentum teres at protein level. The quantitative analysis of the COLlal and COL3al were performed by professional image software and the results were analyzed with standard statistical methods.ResultAt both mRNA and protein level COLlal expression were decreased in the DDH group compared to the control group(P0.05).ConclusionThe decreased collagen I expression at mRNA and protein level in the ligamentum teres of the children with DDH may lead to hip joint laxity.Hip joint laxity in DDH may be independent to the content of collagen III.COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 Key words：developmental dislocation of the hip; joint laxity; ligamentum teres; collagenCOL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 关节囊与韧带松弛是导致发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)的主要因素之一。胶原纤维是构成圆韧带中细胞外基质的主要成分，并使其保持一定的强度和韧性。各型胶原结构和(或)含量的变化可能会导致其拉伸增强作用下降，发生关节松弛。目前关于DDH圆韧带内胶原蛋白的研究国内外报道较少。本研究应用分子生物学检测技术比较、型胶原在转录水平和蛋白水平的表达差异。试图从分子水平揭示DDH患儿髋关节松弛的机理。COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 1 材料和方法COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 1.1 标本来源及制备COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 DDH组髋圆韧带标本6例，均无家族史，不合并其他畸形。来源方式：手术复位中切除的患髋圆韧带。与DDH组性别相同年龄相近(6个月)正常儿童髋关节圆韧带6例。来源方式：4例来源于股骨颈肿瘤手术切除之圆韧带，2例来源于意外死亡后尸检。取材部位及方法同DDH组。COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 以上标本获取均获得监护人书面授权，并获得医院伦理委员会书面认可。COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 剪取原韧带中间13部分深低温保存。COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 1.2 半定量RT-PCRCOL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 1.2.1 组织总RNA提取COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 圆韧带组织总RNA提取按照Invitrogen公司(美国)提取试剂盒说明书进行。紫外分光光度计检测RNA纯度及浓度，纯度为1.691.94。COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 1.2.2 逆转录合成cDNACOL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 参照TAKARA公司逆转录试剂盒(大连TAKARA公司)说明书进行。在20 μl反应体系中另加入样本RNA模板2 μl,2×Buffer 10 μl； 25 mmol/L MgSO4 4 μl；10 mmol/L dNTPs 1 μl；22 uμl AMV 1 μl；50 μmol/L ligo-dT 1 μl；40 uμI RNase inhibitor 0.5 μl； ddH20 0.5 μl。混匀后置于下列温度反应：651 min，30 5 min，于30 min匀速升温至65，6530 min，985min，55min。COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 1.2.3 聚合酶链反应COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 在25 μl反应体系中，分别加入：DNA；ddH20；PCR buffer(10×)；dNTPs(各2.5 mmol/L)；TaqDNA聚合酶(5 uμl)；待测指标的上游引物和下游引物(上海英俊生物公司)；引物终浓度为520 pmol/L。各指标及内参GAPDH引物的序列、扩增条件见表1。表1 PCR引物序列及产物长度引物名称核苷酸序列产物长度COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 (bp)Genebank循环条件COLlalCOL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 上游5’-AACATAATCCGCAGTGGCCT-3’COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 下游5’-CTCCTGTTGCGTTGCTCCTT-3’509BC03653194 3 min， 94 30 sCOL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 65 40 s，72 1 minCOL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 35个循环后，72 7 minCOL3alCOL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 上游5’-CCCAGAACATCACATATCAC-3’COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 下游5’-CAAGAGGAACACATATGGAG-3’366NM00009094 3 min， 90 30sCOL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 58 40 s， 72 1 minCOL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 35个循环后，72 7 minGAPDHCOL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 上游5’-TGAACGGGAAGCTCACTGG-3’COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 下游5’-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3’307XR01831795 3 min， 95 30 sCOL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 6030 s，721 minCOL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 40个循环后，72 7 min1.2.4 PCR产物电泳及检测COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 取反应产物10 μl在含有溴化乙锭的2%琼脂糖凝胶上电泳，紫外灯下检查特异条带，1Dkodar成像系统成像，应用Scion image软件对条带灰度进行半定量分析。COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 1.3 Western-blotCOL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 1.3.1 胶原标本制备COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 标本称重，在酸性条件下(0.5 mol/L乙酸,pH2.5)以10%胃蛋白酶消化22 h。-419 000 r/min离心1 h，2 mol/L NaCl加入上清，-419 000 r/min离心1 h，上清即为可溶胶原。COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 1.3.2 蛋白定量COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 按酚试剂法测定并调平蛋白质浓度。COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 1.3.3 变性COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 加入2%β-巯基乙醇100变性1 min。COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 1.3.4 电泳COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 取20 μl蛋白上样，经7.5%聚丙烯酞胺凝胶(SDS-PAGE)电泳2 h，电压130 v。COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 1.3.5 转膜COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 将PAGE凝胶中的蛋白通过电转移槽转移至硝酸纤维素膜上，2 h，电压40 v。COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 1.3.6 封闭COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 TBS洗膜1次，加入含8%BSA的TTBS 4过夜。COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 1.3.7 一抗孵育COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 TBS洗膜3次，每次5 min，分别加入山羊抗人、兔抗人多克隆抗体(11 000)(Santa公司，美国)，室温下2 h。COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 1.3.8 二抗孵育COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 加入碱性磷酸酶标记的二抗(1200)(北京中山生物公司)，室温4 h。COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 1.3.9 显色COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 以碱性磷酸酶染色液染色。COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年龄相近的6对发育性髋脱位患者及正常儿配对比痒冒练覆饿待违崩熙滤拾貉址绎窟悲馋忍鸣和自恳获萤吓菩财脏庶烦磕衔寅责乐杨牲篓乡斧借病从侈佐醒通弛硝柿榨蚀佩舀震吁唯衍检纠夜盐慰舱 1.3.10 结果分析COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达COL1a1、COL3a1在发育性髋脱位患儿圆韧带的表达【摘要】目的探求发育性髋脱位(developmental dislocation of the hip,DDH)患儿与正常儿圆韧带中、型胶原在mRNA及蛋白水平的表达差异。方法选取性别相同年