酶抑制法检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留.doc

酶抑制法检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留以及对该检测方法的评价王志波（如皋市农产品质量检验测试中心 226500）摘要：在人们广泛关注食品质量安全的今天，作为监控农产品质量安全的最直接的有效手段，蔬菜农药残留速测技术得到迅速发展。蔬菜农药残留速测法主要有酶抑制法和化学试剂速测法两种。它们都具有快速、简便、灵敏、成本低等特点。在基层监督部门、蔬菜生产基地及市场得到广泛应用。本文根据行业标准NYT448-2001，利用酶抑制法和相关农残速测仪及配套试剂盒对我市主要批发市场、农贸市场、超市的蔬菜样品进行了检测。关键词：质量安全；农药残留；速测；酶抑制Abstract：The increasing concern on the food security has stimulated the development of methods for rapid detection of pesticide residues which is the most direct and most effective means of quality-safety monitoring of agricultural products. The methods of rapid detection of pesticide residues on vegetables, including enzyme inhibition method and chemical method, have been widely used in primary regulation departments、vegetable production bases and markets due to their simple, rapid, sensitive and low costing characters. Vegetable samples collected from wholesale markets、farmer markets、supermarkets were detected by enzyme inhibition method using pesticide residues detector coupled with reagent set according to standard (NYT448-2001) in this paper.Key words: agricultural products security; Pesticide residues; rapid test; enzyme inhibition1仪器与试剂1.1检测仪器RP410速测仪，T200型电子天平，电热恒温培养箱，可调移液枪（10100微升；1-5毫升），配套玻璃仪器及其它配件。1.2试剂配置 PH=8的缓冲液，乙酰胆碱酯酶、底物、显色剂粉末分别加10毫升缓冲液配置成溶液，待用。2检测方法2.1检测原理根据有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酶的活性，造成神经传导乙酰胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒致死，根据这一昆虫毒理学原理，而用在对农药残留的检测中。如蔬菜的提取液中不含有机磷或氨基甲酸酯类的农药残留或残留量较低，酶的活性就不会被抑制，试验中加入的基质就被酶水解或少部分水解，水解产物与加入的显色剂反应产生颜色。反之，如果蔬菜的提取液中含有一定量的有机磷和氨基甲酸酯类农药，酶的活性就被抑制，试验中加入的基质就不能被酶水解，从而不显色或颜色变化很小，用分光光度计来测定反应前后吸光度的变化，计算出抑制率，就可以判断蔬菜中含有机磷和氨基甲酸酯类农药的残毒情况。2.2检测步骤取2g样品（非叶菜类取4g）切碎，放入提取瓶中，加入20毫升缓冲液，振荡23分钟，倒出提取液，静止5分钟，用移液枪移取3毫升提取液上清液于小试管中，加入50微升酶，50微升显色剂，混匀后于3741下培养30min，再分别加入50微升底物，混合后倒入比色皿中，于412nm波长下比色。对照测试：取3毫升缓冲液，其他步骤同样品测定，得出空白试验。2.3结果计算抑制率（） (Ac-As)/AsxlO0%式中Ac：对照组3min后与3min前吸光度之差；As：样本3min后与3min前吸光度之差。3结果与分析3.1检测结果判定抑制率70%，基本上不存在农药残留；抑制率70%，肯定存在有机磷或氨基甲酸酯类农药。抑制率一般在10110%之间，一旦检测结果超出此范围，即说明操作过程中有失误的地方，需要重新检测。3.2检测结果分别对抽取生产基地和市场的青菜、大白菜、生菜、菠菜、花菜、包菜、刀豆、豇豆、紫茄进行检测。检测结果见下表。3.2检测结果分析从检测结果来看，大白菜的抑制率为97.7，大于70，所以判定大白菜中肯定存在有机磷或氨基甲酸酯类农药。其余样品均为合格样品。本次检测的总体合格率为88.9，总体情况较好。4评价酶抑制检测法操作简便、快速、灵敏、经济。该方法的研究和应用，对市场上含有机磷、氨基甲酸酯类农药的蔬菜进行初筛选，防止中毒事故发生，净化蔬菜市场，加强批发市场上上市蔬菜的管理，威慑不法商贩和菜农滥用农药，对大量抽检样本快速进行初筛，减少实验室仪器分析的工作量起到了较大作用，同时该方法一定程度上可让老百姓吃上相对安全的蔬菜。为此农业部还专门对蔬菜上农药残留快速检测法制定了行标，代号为NYT4482001，适用于叶菜类（除韭菜）、果菜类、豆菜类、瓜菜类、根菜类（除胡萝卜、茭白等）中甲胺磷、氧化乐果、对硫磷、甲拌磷、久效磷、杀扑磷、敌敌畏、克白威等近20种高、中毒有机磷、氨基甲酸酯类农残速测。但酶抑制检测法也有它的局限性，此方法只能检测有机磷和氨基甲酸酯类农药，不适合其他农药残毒检测，且不能定量检测，所以，当用此方法检测出有残毒问题的蔬菜时，如果要作为仲裁处理，应送到有关部门进一步用气相色谱等仪器进行定量和定性分析，其结果方可作为最终结论性数据。参考文献1 李顺，纪淑娟，孙焕.酶抑制法快速检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的研究现状及展望J.食品与药品，2006，8（07）：29-30.2 NYT448.2001无公害蔬菜、水果农药残留检测标准.3 裘正军，陆江峰，