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文档简介

DNA连接酶 1974年Lehman报道了DNA连接酶的作用机制即催化DNA链的相邻3 羟基和5 磷酸基团发生缩合反应 形成磷酸二酯键 DNA连接酶分为ATP依赖型和NAD 依赖型 常用的DNA连接酶 T4DNA连接酶E coliDNA连接酶TscDNA连接酶 E coli T4和TscDNA连接酶 二 DNA片段的连接方法 由于待连接的DNA片段具不同形式的末端 因此须采用不同的连接方法 一 具互补黏性末端片段之间的连接 二 具平末端DNA片段之间的连接 三 DNA片段末端修饰后进行连接 一 具互补黏性末端片段之间的连接 二 具平末端DNA片段之间的连接 三 DNA片段末端修饰后进行连接 1 DNA片段末端同聚物加尾后进行连接2 黏性末端修饰成平末端后进行连接3 DNA片段5 端脱磷酸化作用后连接4 DNA片段加连杆或衔接头后连接 DNA片段末端同聚物加尾后进行连接特点 给平末端DNA片段3 OH加上同聚物 黏性末端修饰成平末端后进行连接特点 先修饰成平末端 后连接 DNA片段5 端脱磷酸化作用后连接特点 先使一种DNA片段的5 端由磷酸基
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