第十五章 甾体激素类药物的分析ppt课件

第十五章甾体激素类药物的分析 第一节基本结构和分类基本结构 A环 多数为脂环 有 4 3 酮 少数为苯环 C3 可能有酮基或烃基 C10 C13 多数均有角甲基少数C10上无角甲基 Cll 可能有酮基或羟基 C17 可能有羟基 酮基 甲酮基 醇酮基 甲基 乙炔基等 基本结构 环戊烷骈多氢菲 分类甾体激素肾上腺皮质激素雄性激素及蛋白同化激素性激素孕激素雌激素 一 肾上腺皮质激素 简称皮质激素 如氢化可的松 曲安西龙 醋酸地塞米松等 结构特点 具有21个C原子 A环 具有 4 3 酮基 C17 具有 醇酮基并多数有 羟基 C10 C13 具有角甲基 C11 具有羟基或酮基 具有紫外吸收 氢化可的松 肾上腺皮质激素 醋酸地塞米松 C1 C2和C4 C5之间双键 9 抗炎作用增强 16 羟基形成醋酸酯 肌注时可延长作用时间 二 雄性激素及蛋白同化激素雄性激素 睾酮的衍生物 如甲睾酮 丙酸睾酮 十一酸睾酮等蛋白同化激素有苯丙酸诺龙 结构特点 雄性激素母核有19个C原子蛋白同化激素母核有18个C原子 A环 具有 4 3 酮基 C17 无侧链 多数是一个 羟基 有些是由它形成的酯 具有紫外吸收 雄性激素 丙酸睾酮 蛋白同化激素 苯丙酸诺龙 Cl0上无角甲基 三 孕激素黄体激素或孕酮 典型药物为黄体酮 中国药典收载有 黄体酮 醋酸甲地孕酮原料及制剂等 结构特点 母核具有21个C原子 A环 具有 4 3 酮基 C17 具有甲酮基 有些具有 羟基 与醋酸 己酸等形成酯 黄体酮 醋酸甲地孕酮 四 雌激素 卵泡激素 收载有 雌二醇 炔雌醇 苯甲酸雌二醇等 结构特点 母核具有18个C原子 A环 为苯环 C3 具有酚羟基且有些形成了酯或醚 Cl0 无角甲基 C17 具有 羟基 有些烃基形成了酯 还有些具有乙炔基 炔雌醇 雌二醇 第二节鉴别试验一 物理常数的测定 熔点 比旋度 吸收系数等二 化学鉴别法 一 与强酸的呈色反应许多甾体激素 母核 能与硫酸 磷酸 高氯酸 盐酸等呈色 其中以与硫酸的呈色反应应用较广 甾体激素类药物 呈色 H2SO4H3PO4HClO4HCl 二 官能团的反应1 C17 醇酮基 肾上腺皮质激素药物 呈色 四氮唑盐OH 具还原性 氧化剂 此外还有斐林试液 多伦试液 甾酮类激素药物 腙 黄色 羰基试剂 2 酮基的呈色反应 C3 酮基和C20 酮基 常用的羰基试剂 2 4 二硝基苯肼 异烟肼 硫酸苯肼 具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物 呈色 亚硝基铁氰化钠 间二硝基酚 芳香醛 3 甲酮基的呈色反应 黄体酮 蓝紫色 亚硝基铁氰化钠 其他甾体 淡橙色或不显色 专属的鉴别反应 有机氟 F 有机破坏 有机氯 Cl 4 有机卤素的呈色反应 茜素氟蓝硝酸亚铈 硝酸 硝酸银 AgCl 呈色 5 酚羟基的呈色反应 雌激素类药物 红色偶氮染料 重氮苯磺酸 含炔基的甾体激素 银盐沉淀 硝酸银 6 乙炔基的沉淀反应 三 制备衍生物测定其熔点 与一些试剂反应生成酯 肟 缩氨脲 利用醇制碱液水解甾体酯类生成相应的母体 然后测定其熔点进行鉴别 本法虽繁琐费时 但专属性强 目前仍为一些国家药典采用 1 缩氨基脲的生成 m p 约182 分解 2 酯的水解 m p 为150 156 四 紫外分光光度法分子中有 不饱和酮 苯环和其他的共轭结构 在紫外光区有特征吸收 3 酮240nm 苯环280nm 曲安息龙 丙酸倍氯米松 溶剂 甲醇 乙醇 20 g ml 浓度 20 g ml 结果判断 在238nm处有最大吸收 在239nm处有最大吸收 A为0 57 0 60 在239nm与263nm处的吸收度比值为2 25 2 45 五 红外分光光度法甾体激素类药物结构复杂 红外吸收光谱是鉴别该类药物有效而可靠的方法中国药典载的甾体激素原料 其中大多采用该法鉴别 结构特征 酚羟基 C17 OHC17 乙炔基 炔雌醇 1505cm 1 3505cm 1 3300cm 1 1590cm 1 3610cm 1 酚羟基 醇羟基 1615cm 1 苯环的骨架振动 六 TLC法 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别 方法 对照品法要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同 炔诺酮TLC图注意点 供试品要作前处理 显色后要立即检视 七 高效液相色谱法在一定的色谱条件下 比较甾体激素样品与其对照品峰的保留时间进行鉴别 一般都规定在含量测定项下的高效液相色谱图中 供试品峰的保留时间应与对照品峰的保留时间一致 第三节特殊杂质检查一 其他甾体 1 定义与标示药物结构不同的甾体化合物都称为 其他甾体 其他甾体与甾体激素药物结构相似 也有一定的药理作用而又互不相同 2 来源原料 中间体 异构体 降解产物3 特点 1 可能存在多个甾体杂质 2 结构类似4 方法 具有一定分离能力 TLC法 主成分自身稀释对照法 HPLC法 不加校正因子的主成分自身稀释对照法 薄层色谱法 中国药典 1 薄层板 硅胶G板 硅胶 254或硅胶 254 2 供试液和对照液的制备 分别用溶剂 如氯仿 甲醇或甲醇或氯仿或丙酮 配成一定浓度的溶液 3 展开剂系统 各种不同比例的二氯甲烷 乙醚 甲醇 水混合溶剂用得较多 4 显色剂 碱性四氮唑蓝试液 硫酸 乙醇 2 8或1 1或3 7 20 硫酸 10 磷钼酸 乙醇液 5 检出法 碱性四氮唑蓝试液晾干 烘 分钟放冷 喷以碱性四氮挫蓝试液 立即检 硫酸 乙醇晾干后 先喷显色剂 再在 烘 分钟 20 硫酸晾干后 先喷显色剂 再在 烘 分钟 10 磷钼酸 醋酸晾干 喷显色剂 在1OO 加热10一l5min 6 判定法 按规定的斑点数目和颜色判断 2 高效液相色谱法中国药典 2005年版 所列的色谱条件如下 1 色谱柱填充剂 十八烷基硅烷键合硅胶 2 流动相 各种不同比例的甲醇 水混合溶剂 3 检测器 紫外吸收检测器 241nm 254nm 28nm 218nm 230nm 288nm等 视品种而定 4 供试液和对照液的制备 高浓度者为溶液 低浓度者为溶液 5 判定法 溶液 显示的杂质峰数不得超过1个或数个 各杂质峰面积或其总和不得大于溶液 主峰面积的一定分数 即按各药品项下规定的杂质峰的数目和面积的要求进行判定 例如 黄体酮中 其他甾体 的检查方法如下 取本品适量 精密称定 以甲醇为溶剂 配制成8mg lm1的溶液 与0 02mg lml的溶液 用含量测定项下的方法和溶液 取5u1注入液相色谱仪 调整仪器灵敏度 使主成分峰高度达记录仪的满标度 再分别取溶液 和 各10u1进样 记录色谱图至主成分峰保留时间的1 5倍 溶液 显示的杂质峰数不得超过1个 其面积不得大于溶液 主峰面积的3 4 图A中峰1面积的四分之三 二 硒的检查 来源合成中用二氧化硒 SeO2 脱氢 毒 方法 原理 三 甲醇和丙酮药典规定采用气相色谱法测定时不得出现甲醇峰 该法测定甲醇时检测限为3 1ng 甲醇 0 3 丙酮 5 0 内标法 校正因子 四 游离磷酸目的 地塞米松磷酸钠在生产和贮存过程中可能引入磷酸盐 需对游离磷酸盐进行检查 原理 方法 钼蓝 地塞米松磷酸钠检查游离磷酸精密称取本品20mg 置25ml量瓶中 加水15ml溶解 精密加钼酸铵硫酸试液2 5ml与1 氨基 2 萘酚 4 磺酸溶液1ml 加水至刻度 摇匀 在20 放置30 50分钟 照分光光度法 在740nm处测定吸收度 与对照液4 0ml同法处理的吸收度比较 不得更大 对照液0 0035 KH2PO4 第四节含量测定一 高效液相色谱法 48 以反相分配色谱用于甾体激素的含量测定最为广泛 固定相 十八烷基硅烷键合硅胶 流动相 甲醇和水组成的混合液 紫外检测器 具有 4 3 酮基和苯环 在240nm或280nm附近有吸收 示例 黄体酮的含量测定色谱条件 固定相ODS 流动相甲醇 水 65 35 检测波长254nm 内标物己烯雌酚系统适用性试验 n 1000 R符合规定 测定样品 黄体酮原料 注射液 定量方法 内标法 A 对照品 B 供试品 二 紫外分光光度法 30 分子中存在 4 3 酮基 苯环和其他共轭系统 因而在紫外光区有特征吸收 3 酮240nm 肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素 苯环280nm 雌激素 例 醋酸地塞米松片的含量均匀度检查 1 配制供试液 取10片分别进行测 2 测定 240nm 3 计算 规格 0 75mg 片吸收系数 357 计算每片以标示量为100 的含量X 求出平均值和标准差S 差值A A 1 80S 15 0合格A S 15 0不合格A 1 80S 15 0且A S 15 0复试 三 比色法 一 异烟肼比色法1 原理 肾上腺皮质激素 雄性激素和蛋白同化激素 孕激素 420nm 暗45 对照品法 2 测定方法例 醋酸地塞米松软膏的含量测定为例 对照品溶液的制备 精密称取醋酸地塞米松对照品25mg 置1OOml量瓶中 加无水乙醇适量使溶解并稀释至刻度 摇匀 精密量取5m1 用无水乙醇稀释至5Oml 摇匀 甚可得 供试品溶液的制备 取本品适量 约相当于醋酸地塞米松2 5mg 精密称定 置烧杯内 加无水乙醇约25m1 置水浴中加热 搅拌 使醋酸地塞米松溶解 再置冰浴中冷却 滤过 滤液置1OOml量瓶中 同法提取3次 滤液并入量瓶中 用无水乙醇稀释至刻度 摇匀 即得 测定方法 精密量取对照品溶液及供试品溶液各lOmI 分别置具塞容器中 置水浴中蒸去乙醇 残渣中加氯仿lOmI 振摇 使残渣溶解 各精密加0 1 异烟肼甲醇溶液lOml 取异烟肼0 5g 加盐酸0 63m1 加甲醇使溶解成5OOml 即得 摇匀 置55 暗处保温45min 取出 放冷至室温 用氯仿稀释至25ml 摇匀 在415nm分别测定吸收度 计算 即得 本法主要用于甾体激素制剂的测定 如倍他米松软膏 哈西奈德软膏 倍他米松磷酸钠及其注射液等的含量测定 3 讨论 1 溶剂的选择 异烟肼盐酸盐 甲醇 乙醇 无水乙醇 一般多选用无水乙醇 无水甲醇 稳定性好呈色强度高对植物油的溶解度较小 2 酸的种类和浓度以及异烟肼的浓度 酸 异烟肼 2 1酸度 异烟肼盐 酸度 A 异烟肼试液 0 5mg ml 0 00365mol L 盐酸浓度为0 0074mol L硫酸用0 0037mol L醋酸为25 V V 约4 4mol L 3 水分 温度 光线和氧的影响含水量 腙水解 A 不挥发溶剂 不吸收水分时 O2与光线无影响t 4 关于反应的专属性 具有 4 3 酮基的甾体激素在室温不到lh即可定量地与酸性异烟肼反应 其他甾酮化合物需在长时间放置或加热后方可反应完全 例如黄体酮 可的松等反应就很慢 C17 酮化合物也可发生反应并形腙 具有共轭双键的另一些甾酮化合物 如 5 7 酮醋酸胆甾醇 在相当长的时间内反应仍不能完全 Cll 酮在上述条件下不发生反应 C3 O C17 O C20 O C11 O不反应本法反应专属性C3 酮基 5 雌激素类药物不能用异烟肼比色法测定含量 A环为苯环 不具有 不饱和酮基 二 四氮唑比色法1 四氮唑盐的种类最常用的四氮唑盐有两种 第一种 2 3 5 三苯基氯化四氮唑 TTC 其还原产物为不溶于水的深红色三苯甲臢 m在480 49Onm 第二种 蓝四氮唑 BT 还原产物为暗蓝色的双甲臢 m在525nm左右 肾上腺皮质激素类 C17 醇酮基强还原性 2 原理 O OH 分子重排 三苯甲臢 深红 3 测定方法 对照品法 4 讨论 1 基团对反应速度的影响 C11 O C11 OH C21 OH C21 酯 2 溶剂 水分的影响 含水量 5 含水10 A 10 含水30 几无反应 无水乙醇 具有一定还原性 3 碱的种类及加入顺序 反应应在强碱性 pH13 75 条件下进行以氢氧化四甲基铵的结果最佳 加入顺序 4 O2与光线的影响 反应过程反应产物 怕光 避光 快速 O2影响颜色强度和稳定性 隔绝空气 快速 充N2 甲臢对空气中的氧敏感 5 温度与时间