抗核抗体ANA检测与临床应用

抗核抗体ANA检测与临床应用 自身免疫抗体检测及临床意义 抗核抗体ANA检测与临床应用 抗核抗体 ANA 检测与临床应用 抗核抗体ANA检测与临床应用 ANA的靶抗原分布 细胞核 整个细胞 包括细胞核 细胞浆 细胞骨架 细胞分裂周期蛋白等 ENA 抗可提取核抗原 包括RNP Sm Sm SS A SS B Scl 70和Jo 1等六种靶抗原 抗核抗体的定义传统定义 针对细胞核成分的自身抗体的总称 广义定义 针对细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称 对ANA的理解不再局限于核成分 而是指核酸和核蛋白抗体的总称 抗核抗体ANA检测与临床应用 ANA可见于多种疾病 特别是结缔组织疾病 常作为结缔组织病的诊断 病情判断和疗效观察的指标 高滴度ANA则高度提示自身免疫性疾病 在非结缔组织病中也可出现阳性 正常人中 特别是老年人 也可出现阳 性 但滴度低 目前 ANA检测已成为临床上的一个极重要的自身免疫病的筛查实验 ANA检测的临床意义 抗核抗体ANA检测与临床应用 ANA检测的临床意义系统性红斑狼疮 活动期非活动期药物诱导的红斑狼疮混合性结缔组织病 MCTD Sharp综合征 类风湿性关节炎进行性系统性硬化症多发性肌炎及皮肌炎干燥综合征慢性活动性肝炎溃疡性结肠炎其它风湿病正常人 95 10080 10010010020 4020 5085 9530 5070 8030 40265 10 抗核抗体ANA检测与临床应用 美国风湿学会 ACR 立场声明 HEp 2细胞包含大约100至150种自身抗原 其它初筛方法仅具有少量自身抗原 大约35 SLE患者和IFT ANA阳性患者在其它初筛实验中为阴性结果 建议 IIFT ANA仍然为ANA检测的金标准 医院或商业诊断所应用其它ANA检测方法时 必须要求为临床大夫提供足够的数据证明其它ANA检测方法与IFT比较具有同样或更高的敏感度和特异性 实验室在ANA报告当中必须注明ANA检测方法 抗核抗体ANA检测与临床应用 EUROIMMUN ANA筛查 间接免疫荧光法 IFT 抗原谱完整 细胞核 细胞浆 检测ANA的金标准 具有很高的敏感性和特异性 基质组合 HEp 2细胞 灵长类肝 抗核抗体ANA检测与临床应用 HEp 2细胞 筛查不同的自身抗体 均质型核膜型 核点型核糖体P蛋白 着丝点型AMA 核仁型高尔基体 Scl 70溶酶体 Sm RNP肌动蛋白 SS A SS B波形蛋白 抗核抗体ANA检测与临床应用 系统性红斑狼疮 SLE ANCA相关性血管炎 慢性炎症性结缔组织病 CICTD 干燥综合征 SS SystemischerLupusErythematodes SLE dsDNA系统性硬化症 SSc Scl 70andCenpB SS AandSS B慢性炎症性结缔组织病 CICTD 多肌炎 皮肌炎 PM DM MyositisProfile 夏普综合征 MCTD RNPRheumatoideArthritis RA EUROIMMUN 抗核抗体ANA检测与临床应用 系统性红斑狼疮 SLE 红斑狼疮的特点 临床医生 容易误诊的一类致死性疾病 免疫学家 所有免疫系统的要件均参与致病机理产生过程 临床发病特点 发病率 40 100 000 北欧 200 100 000 黑人 250 000 美国 患者寿命 4年 50 1950 15 80 当前 20岁诊断 35岁死亡几率1 6 抗核抗体ANA检测与临床应用 以上受累 96 EUROIMMUN SLE 各器官的表现 关节炎 至少2个关节 血液系统受累 贫血等 60 狼疮肾炎 51 浆膜炎 胸膜炎 心包炎 77 神经系统受累 30 皮肤 蝴蝶状皮疹 盘状狼疮 74 抗核抗体ANA检测与临床应用 系统性红斑狼疮 SLE 代表性的抗体 抗dsDNA抗体抗核小体抗体抗Sm抗体抗核糖体P蛋白抗体 30 90 50 95 5 10 5 15 EUROIMMUN 抗核抗体ANA检测与临床应用 EUROIMMUN 核均质型HEp 2细胞 猴肝 HEp 2细胞 猴肝 抗核抗体ANA检测与临床应用 抗dsDNA抗体 检测方法 IIFT Farr 法 RIA ELISAorBlotIIFTdsDNA HEp 2细胞 绿蝇短膜虫 抗核抗体ANA检测与临床应用 高度特异性抗体 70 患者阳性 0 5 正常人或RA患者阳性 滴度与疾病活动性相关 但不适用于所有患者 抗体滴度上升但临床症状不明显的患者 抗体检测后5年内 80 患者进入活动期 抗dsDNA抗体与SLE 抗核抗体ANA检测与临床应用 最新版 Autoantibodies 描述 不同实验方法的结果并无可比性 1 抗原来源不同 2 抗原展现形式不同 3 实验体系反应条件不同 抗核抗体ANA检测与临床应用 核均质 抗核小体抗体 ANuA 靶抗原 dsDNA 组蛋白 复合物的构象决定簇 方法 IIFA ELISA Blot 临床意义 SLE 阳性率50 95 特异性100 抗核抗体ANA检测与临床应用 EUROIMMUN 抗核小体ELISA 敏感性 特异性 疾病活动度 ANuA与疾病的活动性相关性强 SLEDAIscore 分组SLE干燥综合症皮肌炎 多肌炎系统性硬化症类风湿 骨关节炎强直性脊柱炎健康对照组特异性 n233414033602031225 抗核小体阳性144 61 8 1 2 4 1 2 5 1 3 0 1 1 7 0098 2 Suetal ClinImmunol122 115 120 2007 抗核抗体ANA检测与临床应用 LNTP LN CON ANuAAnti dsDNA 7943 1841 933 LNTP lupusnephritisrequiringrenaltransplantation 狼疮肾炎需要肾移植 LN biopsyprovenlupusnephritis 肾活检确诊为狼疮肾炎 CON SLEpatientswithoutnephritis 无肾炎SLE患者 伴有狼疮肾炎的严重SLE的生物标记物 ANuA与狼疮性肾炎Stintonetal Lupus15 394 400 2007 狼疮肾炎是SLE的一种潜在的严重并发症 高达50 1 2 需要进行肾移植的患者有狼疮肾炎 抗核抗体ANA检测与临床应用 EUROIMMUN 抗U1 nRNP与Sm抗体 HEp 2细胞 猴肝 抗核抗体ANA检测与临床应用 HEp 2细胞 抗U1 nRNP与Sm抗体抗U1 nRNP Sm抗体抗Sm抗体SLE抗U1 nRNP抗体SLESharp综合征 MCTD EUROIMMUN 抗核抗体ANA检测与临床应用 抗U1 nRNP与Sm抗体 SLE 15 40 MCTD 95 100 SLE 5 30 EUROIMMUN 抗U1 RNP抗体抗Sm抗体Function Pre mRNAsplicing 抗核抗体ANA检测与临床应用 EUROLINE ANA谱 最多18种抗原 增加了RNP亚单位 自动化操作 全自动化结果判读 抗核抗体ANA检测与临床应用 EUROIMMUN 实验结果的解释 ANA谱 抗U1 nRNP Sm和Sm抗体 抗nRNP Sm抗体 抗Sm抗体 结果 解释 U1 nRNP Sm U1 nRNP Sm U1 nRNP Sm 结果不可靠 阴性SLESLE或MCTD无 抗核抗体ANA检测与临床应用 EUROIMMUN 抗核糖体P蛋白抗体 HEp 2细胞 猴肝 抗核抗体ANA检测与临床应用 40S亚单位 60S亚单位 P0 P2P2 accordingto Mahleretal JMolMed 2003 抗原 核糖体60S亚单位的3个蛋白 P0 P1 P2 在羧基末端有相同的免疫反应表位 核糖体P抗原的五聚体复合物 P1P1 核糖体P蛋白 抗核抗体ANA检测与临床应用 核糖体P蛋白ELISA 敏感性和特异性 1 群组SLE其他结缔组织病 健康献血员 n36079206 抗核糖体P蛋白阳性数34 9 4 0 0 系统性硬化症 干燥综合症 皮肌炎 多肌炎 对SLE100 特异EUROIMMUN 抗核抗体ANA检测与临床应用 核糖体P蛋白ELISA 敏感性和特异性 2 群组SLEMCTDSSSScRAHD特异性 n18521556689100310 抗核糖体P蛋白阳性数10 5 4 00000100 EUROIMMUN 抗核抗体ANA检测与临床应用 EUROIMMUN HEp 2细胞 增殖型细胞核抗原 PCNA Hep 2细胞 猴肝 抗核抗体ANA检测与临床应用 增殖型细胞核抗原 PCNA 靶抗原 表达为细胞周期依赖性 S 期 三聚体 36kDa 是DNA多聚酶的辅因子并参与DNA修复调控 检测 IIFT Blot 临床意义 SLE高特异性 阳性率3 7 与肾脏和CNS及血小板减少相关 抗核抗体ANA检测与临床应用 系统性红斑狼疮 SLE ANCA相关性血管炎 慢性炎症性结缔组织病 CICTD 干燥综合症 SS SystemischerLupusErythematodes SLE dsDNA系统性硬化症 SSc Scl 70andCenpB SS AandSS B慢性炎症性结缔组织病 CICTD 多肌炎 皮肌炎 PM DM MyositisProfile 夏普综合症 MCTD RNPRheumatoideArthritis RA EUROIMMUN 抗核抗体ANA检测与临床应用 干燥综合征 Sj gren sSyndrome 外分泌腺受累的自身免疫疾病 症状 口腔干燥 唾液及眼泪减少 腮腺肿胀 口腔干燥 胰腺外分泌腺分泌不足腮腺肿胀EUROIMMUN 抗核抗体ANA检测与临床应用 干燥综合征 SS A 60kDa SS B 47kDa 40 95 40 95 代表性抗体 抗核抗体ANA检测与临床应用 EUROIMMUN 抗SS A SS B抗体 HEp 2细胞 猴肝 抗核抗体ANA检测与临床应用 SS A抗原 Boireetal 1995 Ro 52抗体不与SS A抗原结合 纯化的SS A抗原不包含Ro 52 RNA SS A 60kDa Ro 52hY RNA RNA SS A 60kDa hY RNA 抗核抗体ANA检测与临床应用 SS A Ro 60 Ro 52andSS B 干燥综合症 40 95 SLE 20 60 新生儿狼疮 抗SS B抗体 干燥综合症 SLE 新生儿狼疮 40 95 10 20 78 抗Ro 52 52kDa 抗体非特异EUROIMMUN 功能 调控RNA翻译抗SS A 60kDa 抗体 功能 RNA聚合酶III辅助蛋白 96 X 抗核抗体ANA检测与临床应用 EUROIMMUN 抗Ro 52抗体 不同组别中均可出现 抗核抗体ANA检测与临床应用 抗Ro 52抗体 风湿性疾病中的阳性率 疾病干燥综合症系统性硬化症肌炎SLEMCTDRA n88812621021165 抗Ro 52抗体阳性81 28 31 38 19 5 抗Ro 52抗体在干燥综合症中阳性率较高 但没有疾病特异性Meyer Schlumbergeretal 4thAsianCongressonAutoimmunity Singapore Sept 2009EUROIMMUN 抗核抗体ANA检测与临床应用 Anti Ro52 肝脏疾病中的阳性率 疾病PBCAIHHBVHCV献血员 n10060505050 抗Ro 52抗体阳性27 35 10 22 0 抗Ro 52抗体没有疾病特异性Meyer Schlumbergeretal 4thAsianCongressonAutoimmunity Singapore Sept 2009 抗核抗体ANA检测与临床应用 系统性红斑狼疮 SLE ANCA相关性血管炎 慢性炎症性结缔组织病 CICTD 干燥综合症 SS SystemischerLupusErythematodes SLE dsDNA系统性硬化症 SSc Scl 70andCenpB SS AandSS B慢性炎症性结缔组织病 CICTD 多肌炎 皮肌炎 PM DM MyositisProfile 夏普综合症 MCTD RNPRheumatoideArthritis RA EUROIMMUN 抗核抗体ANA检测与临床应用 系统性硬化症 SSc 血管与结缔组织受累的自身免疫疾病 症状 指端硬化 thin scleroticfingers 爪型手 面具脸 嘴周边出现皱纹 嘴唇变薄 毛细血管扩张 表面血管永久性扩张 表皮钙质沉着 血管壁与皮肤钙化 指端硬化 爪型手 毛细血管扩张 面具脸 EUROIMMUN质沉着 皮肤钙 抗核抗体ANA检测与临床应用 EUROIMMUN 系统性硬化症 实验室结果和临床数据的联合分析 有助于降低疾病诊断的模糊性 同时为未来研究硬化症提供基础 抗核抗体ANA检测与临床应用 系统性硬化症 SSc 代表性抗体 抗着丝点抗体抗Scl 70抗体抗原纤维蛋白抗体抗RNA多聚酶抗体抗PM Scl抗体 12 43 18 30 6 8 2 23 1 16 EUROIMMUN 抗核抗体ANA检测与临床应用 EUROIMMUN 抗着丝点抗体HEp 2细胞 猴肝 HEp 2细胞 猴肝 抗核抗体ANA检测与临床应用 EUROIMMUN 抗着丝点抗体 靶抗原 着丝点 DNA联合蛋白 着丝点蛋白 A B C D 检测方法 IIFT ELISA Blot 临床意义 局限性硬皮病 CREST综合症 经常出现在 硬皮病 PBC 重叠综合症 抗核抗体ANA检测与临床应用 EUROIMMUN 抗Scl 70抗体HEp 2细胞 猴肝 HEp 2细胞 猴肝 抗核抗体ANA检测与临床应用 细胞核仁 抗Scl 70抗体 靶抗原 DNA 拓扑异构酶I 100kDa DNA双螺旋复制和转录 检测方法 IIFA ELISA Blot 临床意义 弥散性硬皮病的诊断标志 50 75 预后 较着丝点阳性的患者病情更严重 抗核抗体ANA检测与临床应用 抗着丝点B蛋白抗体与抗Scl 70抗体 系统性硬化症n 295 抗Scl 70抗体阳性阴性 抗着丝点B蛋白抗体 阳性阴性 166 106122 59 系统性硬化症患者分别出现抗着丝点抗体或抗Scl 70抗体阳性EUROIMMUN 抗核抗体ANA检测与临床应用 EUROIMMUN 抗RNA聚合酶I抗体HEp 2细胞 猴肝 HEp 2细胞 猴肝 抗核抗体ANA检测与临床应用 抗原纤维蛋白抗体HEp 2细胞 猴肝 HEp 2细胞 猴肝EUROIMMUN 抗核抗体ANA检测与临床应用 EUROIMMUN 抗PM Scl抗体HEp 2细胞 猴肝 HEp 2细胞 猴肝 抗核抗体ANA检测与临床应用 抗PM Scl抗体 靶抗原 PM Scl 11到16个多肽复合物 在rRNA和一些U snRNAs剪接中起作用 PM Scl 100 PM Scl 75 检测方法 IIFT ELISA Blot 临床意义 重叠综合症的诊断标志 表现为肌炎和硬皮病症状 阳性率50 70 抗核抗体ANA检测与临床应用 EUROLINE 系统性硬化症谱 一个实验膜条包括13种高特异性纯化抗原 系统性硬化症 SSc 血清学诊断 EUROBlotMaster自动化操作 EUROLineScan软件全自动结果判读 抗核抗体ANA检测与临床应用 患者血清 129份SSc血清和202份对照血清 50PM DM 50SLE 42RA 60 HD 所有抗原的血清命中率为 85 3 系统性硬化症相关抗体 Meyeretal 7thCongressonAutoimmunityinLjubljana May2010 抗核抗体ANA检测与临床应用 ArthritisResearch Therapy inpress 相关参考资料AntibodiesagainstPM Scl 75andPM Scl 100areindependentmarkersfordifferentsubsetsofsystemicsclerosispatients K Hanke C Br ckner C D hnrich D Huscher L Komorowski W Meyer A Janssen M Backhaus M Becker A Kill K Egerer G R Burmester F Hiepe W SchlumbergerandG RiemekastenArthritisResearch Therapy 2009 11Diagnosticvalueofanti topoisomeraseIantibodiesinalargemonocentriccohort HankeK D hnrichC Br cknerCS HuscherD BeckerM JansenA MeyerW EgererK HiepeF BurmesterG SchlumbergerW RiemekastenG 抗核抗体ANA检测与临床应用 系统性红斑狼疮 SLE ANCA相关性血管炎 慢性炎症性结缔组织病 CICTD 干燥综合症 SS SystemischerLupusErythematodes SLE dsDNA系统性硬化症 SSc Scl 70andCenpB SS AandSS B慢性炎症性结缔组织病 CICTD 多肌炎 皮肌炎 PM DM MyositisProfile 夏普综合症 MCTD RNPRheumatoideArthritis RA EUROIMMUN 抗核抗体ANA检测与临床应用 皮肤症状 红斑 膝盖 手指关节处皮肤异变 皮肤褪色 多肌炎 皮肌炎 PM DM 皮肤与肌肉受累的自身免疫疾病 症状 肌肉疼痛 肌无力 如 肩膀 骨盆 抗核抗体ANA检测与临床应用 多肌炎 皮肌炎 PM DM 代表性抗体 Jo 1Mi 2 esp inDM PM Scl PSS 重叠综合征 PL 7PL 12 25 35 15 30 8 3 6 3 抗核抗体ANA检测与临床应用 EUROIMMUN 抗Jo 1抗体HEp 2细胞 猴肝 HEp 2细胞 猴肝 抗核抗体ANA检测与临床应用 胞浆颗粒 抗Jo 1抗体 靶抗原 Jo 1 组胺酰 tRNA合成酶 检测方法 IIFA ELISA Blot 临床意义 对多肌炎具有高度特异性 阳性率25 35 Jo 1 病情严重的标志 常与肺纤维化有关 70 抗核抗体ANA检测与临床应用 EUROIMMUN 氨酰基 tRNA 合成酶 氨酰基 tRNA 合成酶 Jo 1 组氨酰l tRNA合成酶 PL 7 苏氨酰基 tRNA合成酶 PL 12 丙氨酰 tRNA 合成酶 OJ 异亮氨酸 tRNA合成酶 EJ 甘氨酰 tRNA合成酶 抗核抗体ANA检测与临床应用 EUROIMMUN 抗Mi 2抗体HEp 2细胞 猴肝 HEp 2细胞 猴肝 抗核抗体ANA检测与临床应用 细胞核颗粒 Anti Mi 2 靶抗原 多组分系统 与组蛋白乙酰基转移酶和核小体重塑活性有关的主要抗原 218kDa 临床意义 肌炎5 15 主要是皮肌炎 抗核抗体ANA检测与临床应用 EUROIMMUN 抗Ku抗体HEp 2细胞 猴肝 HEp 2细胞 猴肝 抗核抗体ANA检测与临床应用 细胞核颗粒 抗Ku抗体 p70 p80 靶抗原 DNA结合的非组蛋白和DNA依赖的蛋白酶异源二聚体 分析方法 IIFA Blot 临床意义 PM Scl 重叠综合症30 55 SLE5 10 抗核抗体ANA检测与临床应用 EUROIMMUN 其他与肌炎相关的抗体 Anti SRP Anti PL 12 HEp 2细胞 HEp 2细胞 抗核抗体ANA检测与临床应用 EUROLINE肌炎相关抗原 一个膜条上包括7或11种高度纯化抗原 新 PM Scl SRP EJ OJ DM和PM及原发性肌炎的血清学诊断 EUROBlotMaster自动化操作 EUROLineScan全自动化判读结果 抗核抗体ANA检测与临床应用 153份肌炎患者血清 50DM 89PM 4juvenileDM 10IBM 77份对照血清 26SjS 26SLE 25SSc Anti Mi 2KuPM Scl100Jo 1PL 7PL 12SRP Prevalence3 3 7 12 2 0 5 Specificity100 97 100 99 100 100 97 EUROLINE肌炎相关抗原患者血清 所有抗原的血清学命中率 26 R nnelidetal AutoimmunRev 2009EUROIMMUN 抗核抗体ANA检测与临床应用 患者血清 208份肌炎患者血清 214份对照血清 50HD 65SLE