江苏省启东市高中生物专题5多聚酶链式反应扩增DNA片段第2课时PCR原理基础知识练习.docx

基础知识：PCR原理1 DNA合成方向是（）A从子链的3端向5端延伸B从引物的5端开始延伸C从子链的5端向3端延伸D以上皆可2 下列有关“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，正确的是 ( )A利用DNA溶于酒精，而蛋白质不溶于酒精，可将DNA与蛋白质分离B利用高温能使蛋白质变性，却对DNA没有影响的特性，可将DNA与蛋白质分离C在溶有DNA的物质的量浓度为2 mol/L的氯化钠溶液中缓缓加入蒸馏水，轻轻搅拌后过滤，取滤液进行以后的实验D在DNA滤液中加入嫩肉粉，通过木瓜蛋白酶的作用，可将DNA与蛋白质分离3 酵母菌是一种真菌，与人们的日常生活密切相关，也是现代生物技术研究中常用的模式生物。果酒、面包的制作需要酵母菌，酵母菌可以用液体培养基(培养液)来培养，培养液中酵母菌种群的增长情况与发酵食品的制作有密切关系。(1)土壤中富含各种微生物，将土壤浸出液接种到特定培养基上，可得到酵母菌。这一过程叫做_；为提高果酒的品质，发酵时常采用人工培养的纯净菌种。实验室中获取纯净菌种的方法有_。(2)果汁发酵后是否有酒精产生，可以用_来检验，在酸性条件下，该物质与酒精反应呈_色。(3)突变菌往往带有一些特殊的基因。在获得这些基因的过程中，PCR技术相当重要。PCR扩增反应中加入引物的作用是_ _加入DNA聚合酶的作用是_。(4)酵母细胞固定化可大大提高生产效率。固定酵母细胞时首先需要将干酵母放入_中活化，若制得的凝胶珠颜色过浅，可能是因为_ _。4 有关PCR的描述下列哪项不确切（）APCR是pilymerase chain rdaction三个单词的首字母缩写B1993年，美国生物化学家穆里斯因发明PCR技术而获得度诺贝尔化学奖CPCR技术的突出优点是快速、高效、灵活和易于操作DPCR实验的原理十分复杂，操作也十分复杂5 DNA的复制需要引物，主要原因是（）A可加快DNA的复制速度B引物可与DNA母链通过碱基互补配对结合C引物的5端有助于DNA聚合酶的延伸DNA链DDNA聚合酶只能从3端延伸DNA链6 PCR技术中，如何设计引物（）APCR引物要根据需要扩增的目标DNA的碱基序列来设计BPCR引物要根据已知的DNA序列对应的RNA序列来设计CPCR引物要根据已知的DNA序列对应的tRNA的序列来设计D以上都不是正确方法7 变性作用是指核酸双螺旋结构被破坏，双链解开，但共价键并未断裂。引起变性的因素很多，升高温度、过酸、过碱以及加入变性剂等都能造成核酸变性。PCR的反应过程中，引起变性的因素是（）ApH 过高 BpH 过低C升高温度 D加入酒精8 PCR技术利用了DNA的什么原理来控制DNA的解旋与结合()A特异性B稳定性C热变性D多样性9 下列有关PCR技术的叙述不正确的是()A聚合酶链式反应，是用DNA聚合酶在体外扩增DNA片段的技术B在用PCR技术扩增DNA时，DNA的复制过程与细胞内DNA的复制类似CPCR反应需在一定的缓冲溶液中进行，只需提供：DNA模板以及四种脱氧核苷酸DPCR一般经历三十多次循环，每次循环分为变性、复性和延伸10 利用PCR技术可获得目的基因，下列相关叙述错误的是（）A用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列BPCR反应体系中需添加磷酸、脱氧核糖和含氮的碱基作为原料CPCR 体系中需要添加从受体细胞中提取的解旋酶和DNA聚合酶DPCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应参考答案：1 答案： C解析： DNA聚合酶能从引物的3端开始延伸DNA链，DNA的合成方向总是从子链的5端向3端延伸。2 答案： D解析： 利用DNA不溶于酒精，而蛋白质溶于酒精，可将DNA和蛋白质分开。温度过高也会影响DNA的特性，如PCR技术。在物质的量浓度为2 mol/L的氯化钠溶液中DNA溶解度最大，但加入蒸馏水后，DNA溶解度降低，DNA析出，过滤后应取其黏稠物进行以后的实验。蛋白酶能分解蛋白质，而不能分解DNA。3 答案： (1)酵母菌的分离平板划线法和稀释涂布平板法 (2)重铬酸钾灰绿(3)使DNA聚合酶能够从引物的3端开始连接脱氧核苷酸催化DNA子链的合成(4)蒸馏水 海藻酸钠浓度过低解析： 从近几年的高考看，在有限的题量中，命题往往以一个中心事例为切入点，综合考查几项技术的应用。本题以酵母菌为主线，综合考查了酵母菌的分离培养、酒精发酵、PCR技术、酵母细胞固定化技术等内容。第(1)小题考查了微生物的分离技术和接种方法。在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进需要的微生物的生长，目的是从众多微生物中分离出所需要的微生物。微生物的纯化培养(两种接种方法)是平板划线法和稀释涂布平板法。第(2)小题考查发酵后是否有酒精产生的鉴定方法。发酵后取样，可通过嗅味和品尝进行初步鉴定，用重铬酸钾检验酒精的存在，其基本原理是酒精可使重铬酸钾的浓硫酸溶液颜色由橙色变为灰绿色。第(3)小题考查PCR技术的基础知识。PCR技术中的引物可以是RNA或单链DNA分子片段，PCR技术需要设计两种引物，分别与模板DNA两条链相结合，使DNA聚合酶能够从引物的3端开始连接脱氧核苷酸。DNA聚合酶催化合成DNA子链。第(4)小题，在缺水的状态下，微生物会处于休眠状态。活化就是让处于休眠状态的微生物重新恢复正常的生活状态。刚形成的凝胶珠应在CaCl2溶液中浸泡一段时间，以便形成稳定的结构。观察凝胶珠的颜色和形状：如果制作的凝胶珠颜色过浅、呈白色，说明海藻酸钠的浓度偏低，固定的酵母细胞数目较少；如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，则说明海藻酸钠的浓度偏高，制作失败，需要再作尝试。4 答案： D解析： 5 答案： D解析： DNA聚合酶不能从5端开始合成DNA，而只能从3端延伸DNA链，因此，DNA复制需要引物。当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后，DNA聚合酶就能从引物的3端开始延伸DNA链，DNA的合成方向总是从子链的5端向3端延伸。6 答案： A解析： DNA复制需要引物，引物是一小段DNA或RNA，能与DNA母链的一段碱基序列互补配对，故引物的设计要根据目标DNA的碱基序列来确定。7 答案： C解析： 各选项的条件均能导致DNA分子变性，但在PCR反应中，变性后还要进行复性和延伸等过程，过酸、过碱、酒精等会导致反应过程中的酶变性失活，使DNA扩增不能进行，因此，在PCR反应中，选用升高温度使DNA变性。8 答案： C解析： DNA分子在80100 的温度范围内变性，双链解开成单链，当温度慢慢降低时，又能重新结合形成双链。9 答案： C解析： PCR反应需要在一定的缓冲溶液中进行，需提供DNA模板，分别与两条模板链相结合的两种引物，四种脱氧核苷酸，耐热的DNA聚合酶，同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行10 答案： A解析： A、用PCR方法扩增目的基因时，只要设计出目的