药理学实验方案

元胡止痛片对小鼠镇痛抗炎镇痛活性研究药理实验设计设计人：2011级药学一班张礼杰信 盼陈茂琴何朵朵药学四班 杨 森冯 禹王同月元胡止痛片中抗炎和镇痛作用研究1.实验目的：探讨元胡止痛片的镇痛和抗炎作用2.实验原理：（1）元胡止痛片收载于元胡止痛片收载于中国药典是由元胡、白芷两味药组成的中药复方制剂为行气活血止痛剂临床用于治疗气滞血瘀胃痛、胁痛、头痛及月经痛等症疗效确切。本实验是为验证元胡止痛片的镇痛和抗炎作用进行验证。实验对四川禾邦阳光制药厂家生产元胡止痛片不同剂量进行了药效学研究采用小鼠醋酸扭体法、小鼠热板法和耳肿胀法实验分别测定小鼠扭体反应抑制率、小鼠痛阂值提高率和肿胀率从而确定不同剂量的镇痛和抗炎作用效果。在基础医学研究中筛选镇痛药的常用致痛方法概括有物理法（热、电、机械）和化学法。动物的疼痛反应常表现出嘶叫、舔足、翘尾、蹦跳及皮肤、肌肉抽搐。化学法，即将某些化学物质，如强酸、强碱、钾离子、缓激肽等，涂布于动物的的某些敏感部位或腹腔注射。腹腔注射损伤物质引起受试动物腹痛，动物表现出“扭体反应”（即腹部内凹、躯干与后肢伸张、臀部高起）。3.实验方法 :使用小鼠热板法、醋酸扭体法、耳肿胀法 ,并分别建立小鼠疼痛和炎症模型 ,灌胃给予不同剂量元胡止痛片配成的溶液，观察对动物的镇痛和抗炎作用。4.实验过程：1.内容4.1 药品与试剂元胡止痛片：四川禾邦阳光制药股份有限公司，国药准字z，规格：片芯重0.25g,12片阿司匹林: 浙江金华市第三制药厂, 国药准字: H, 临用前用蒸馏水配制为适当浓度的混悬液。4.2动物：健康昆明种小白鼠，雌性，32只4.3 器材：数控超级恒温槽，烧杯、1ml注射器、电子秤4.4分组：空白对照组 (灌胃0.9%生理盐水 10 mL/kg)元胡止痛片高、低剂量组 (0.2，0.4mg10g)阳性药阿司匹林对照组 (灌胃阿司匹林 0. 4 g/kg)4.5人和动物剂量换算公式 小白鼠=/g2 方法（1）热板法1.动物筛选：致痛潜伏期 (痛阈值)为 530s 之间的合格雌性小鼠。32只，热板法镇痛试验筛选痛阈值合格的小鼠，取小鼠于给药前先用热板仪于55 0 5 分别测定每只小鼠的正常痛阈值将小鼠放于智能热板仪上至出现舔后足的所需时间作为痛阈值( s) ，连续 2 次，间隔30 s，测定平均值即为正常痛阈值。将舔后足时间 5 s 或30 s，或跳跃者不用于此实验 2.器材：数控超级恒温槽，烧杯、1ml注射器、电子秤、热板仪 3.分组：按体重随机分组，每组8只，各鼠给药前测定二次正常痛阈值 (二次测定间隔 1h)，以其平均值为给药前正常值，按4.4分组给药 4.测定痛阈值：（2）热板法小鼠的镇痛作用参照文献方法，取恒温水浴锅，调节恒温水浴，使水温恒定在5505,将500ml烧杯放入其中，使烧杯底部接触水面。取合格雌性小鼠，随机分组，按0.2mg/10g灌胃不同药液，测定给药后15、30、60、90分钟后各鼠痛阈值。 5.痛阈提高百分率按下式计算痛阈提高百分率表格1 药物对小鼠热板法影响记录给药15min：组别剂量样本舔足时间痛阈提高百分率生理盐水组阳性药物对照组试验药物1组高浓度试验药物1组低浓度给药30min：组别剂量样本舔足时间痛阈提高百分率生理盐水组阳性药物对照组试验药物1组高浓度试验药物1组低浓度给药60min：组别剂量样本舔足时间痛阈提高百分率生理盐水组阳性药物对照组试验药物1组高浓度试验药物1组低浓度给药90min：组别剂量样本舔足时间痛阈提高百分率生理盐水组阳性药物对照组试验药物1组高浓度试验药物1组低浓度（2）醋酸扭体法：本实验将0.7%醋酸直接腹腔注射，刺激腹膜引起持久的疼痛反应，致使小鼠出现“扭体反应”。镇痛药物可以抑制动物的“扭体反应”，本法敏感、简便、重复性好。 1.器材：1ml注射器、电子秤 2.药品：元胡止痛片：四川禾邦阳光制药股份有限公司，国药准字z，规格：片芯重0.25g阿司匹林: 浙江金华市第三制药厂, 国药准字: H, （临用前用蒸馏水配制为适当浓度的混悬液）醋酸溶液 3.动物：2025g雄性小白鼠 32只 4.随机分组、编号，每组8只，按4.4分组给药 5.给药1h后，给每只小鼠腹腔注射0. 6% 的醋酸( 临用前新鲜配制)每只 0. 2 L, 6.观察：5min后记录15分钟内各小鼠出现“扭体反应”的次数。表格2药物对小鼠醋酸扭体法影响记录组别剂量样本扭体次数生理盐水组阳性药物对照组试验药物组高浓度（混合药物）试验药物组正常浓度（混合药物) 7.注意事项（1）小鼠体重轻，“扭体反应”次数较低。（2）室温以20为宜，低温时，小白鼠扭体次数减少。（3）动物的疼痛反应个体差异较大，因此实验用动物数越多结果越可靠。（3）耳肿胀法 1.器材：注射器，电子秤，棉签，鼠耳打孔器，剪刀2.药品：元胡止痛片：四川禾邦阳光制药股份有限公司，国药准字z，规格：片芯重0.25g阿司匹林: 浙江金华市第三制药厂, 国药准字: H, （临用前用蒸馏水配制为适当浓度的混悬液）二甲苯 3.分组：取小鼠32只，随机分为4组，每组8只: 4.给药：分组与给药剂量与4.4相同 5.测量：给小鼠的右耳前后涂上二甲苯0.1ml/只，30分钟后处死小鼠，沿耳廓对称剪下两只耳壳，用6mm打孔器取耳片，以两耳重量差计算肿胀度。 6.计算肿胀率肿胀率（%）=右耳片重（mg)-左耳片重（mg)/左耳片重（mg)100肿胀抑制率% = ( 对照组耳肿率- 实验组耳肿率) / 对照组耳肿率*100%表格3药物对小鼠肿胀率影响记录组别剂量样本左耳重量右耳重量肿胀率生理盐水组阳性药物对照组试验药物组高浓度（混合药物）试验药物组正常浓度（混合药物)参考文献:1李见春,黄继汉,桂常青,郑青山.元胡止痛栓镇痛作用的实验研究J.中国临床药理学与治疗学,2004(04)2唐岚.元胡止痛分散片药学研究J.成都中医药大学,20023徐叔云(Au FY)，卞如濂(Ban RL)，陈修(Chen X)药理实验方法学第 3版 M 北京：人民卫生出版社，2002886，911，934，14084杨巧芳, 孟庆刚. 炎症动物模型探要 J.中华中医药学刊,2008,26(3):5165林定齐非甾体类抗炎药及解热镇痛药用药情况分析J当代医学 2012（02）6刘和莉，李月玲，薛永志; 不同温度和醋酸浓度对小鼠扭体疼痛模型的影响J 包头医学院学报 2012（02）清单：元胡止痛片：四川禾邦阳光制药股份有限公司，国药