第九章 传染与免疫

上次教学回顾 教学回顾 8 1微生物在自然界的分布与菌种资源的开发 8 2微生物与生物环境间的关系 互生 共生 寄生 拮抗 捕食 微生物在自然界的分布 菌种资源的开发 第九章传染与免疫 一 教学目的和要求了解传染及决定传染的因素和可能结局 学习和掌握非特异性免疫和特异性免疫相关知识 理解和掌握抗原 抗体反应的一般规律及主要反应等内容 二 教学内容 1 传染2 非特异性免疫 3 特异性免疫 4 免疫学方法及其应用5 生物制品及其应用 第九章传染与免疫 研究内容 病原微生物与其宿主之间的相互关系 理论与实践意义 人类和动物传染病的防治 是微生物学发展的主要动力 免疫学是当前生命科学领域中发展最快 影响最大的学科之一 衍生出大量新的分支学科 边缘学科和应用学科 免疫学方法对生命科学的各个重要理论研究领域有极其重要的作用 免疫学方法和技术对各种疾病的临床诊断 法医检验 生化测定 医疗保健 生物制品的生产 肿瘤防治 定向药物的研制以及反细菌战等各项实际应用领域都有极其重要的作用 第一节传染 一 传染与传染病疾病 生物体在一定条件下 由体内外致病因素引起的一系列复杂且有特征性的病理状态 病原体 致病菌或病原菌 凡能引起传染病的各种微生物和其他生物 传染 感染或侵染 外源或内源的少量病原体突破其宿主的 三道防线 后 在宿主的一定部位定植 生长繁殖或 和 产生酶及毒素 并引起一系列病理生理过程 寄生物如果长期保持潜伏状态或亚临床的感染状态 不致发生传染病 如果环境条件有利于寄生物的大量繁殖 并随之产生大量的酶和毒素来损害其宿主 则宿主就患了传染病 第一节传染 一 传染与传染病传染病的种类 2007中华人民共和国传染病防治法规定 甲类传染病 鼠疫 霍乱 乙类传染病 传染性非典型肺炎 艾滋病 人体免疫缺损病毒 AIDS 病毒性肝炎 脊髓灰质炎 人感染高致病性禽流感 麻疹 流行性出血热 狂犬病 流行性乙型脑炎 登革热 炭疽 细菌性和阿米巴性痢疾 肺结核 伤寒和副伤寒 流行性脑脊髓膜炎 百日咳 白喉 新生儿破伤风 猩红热 布鲁氏菌病 淋病 梅毒 钩端螺旋体病 血吸虫病 疟疾 丙类传染病 流行性感冒 流行性腮腺炎 风疹 急性出血性结膜炎 麻风病 流行性和地方性斑疹伤寒 黑热病 包虫病 丝虫病 除霍乱 细菌性和阿米巴性痢疾 伤寒和副伤寒以外的感染性腹泻病 危害最大的是各种 人畜共患病 第一节传染 二 决定传染结局的三大因素一 病原菌病原菌数量 致病特性和侵入方式是决定传染病结局的最主要因素 细菌性病原菌 毒力 致病力 侵入数量 侵入门径 消化道 呼吸道 皮肤伤口 泌尿生殖道 其他 侵袭力 毒素 吸附和侵入能力 繁殖和扩散能力 对宿主防御功能的抵抗能力 内毒素 外毒素 病原体所具有的突破宿主防御功能 并在其中进行生长繁殖和实现蔓延扩散的能力 菌毛起着主要作用 菌毛蛋白 定居因子抗原 CFA 产生一些特殊酶 透明胶质酶 水解结缔组织 胶原酶 水解胶原蛋白 血浆凝固酶 免受吞噬细胞和抗体作用 链激酶 血纤维蛋白溶酶 胞浆素 卵磷脂酶 毒素 水解组织的细胞 溶血素 A蛋白等 G 的脂多糖 LPS 刺激宿主细胞释放内源性的热源质 作用于大脑控温中心而引起动物发高烧 具有生物毒性和极强的化学稳定性 现用鲎试剂法 鲎变形细胞溶解物试验法 检出 主要为G 的蛋白质 在病原菌生长过程中不断向外界环境分泌的一类毒性蛋白质 酶 酶原或毒蛋白 脱毒外毒素类毒素 极毒抗原 0 3 0 4 甲醛 无毒抗原 注射入免疫动物抗毒素 抗毒抗体 侵入数量差别很大 109 数个 幽门螺杆菌 Hp 乙型肝炎病毒 艾滋病 第一节传染 二 决定传染结局的三大因素二 宿主的免疫力免疫或免疫性 免疫力 是机体识别和排除抗原性异物的一种保护性功能 免疫功能包括 免疫防御 immunologic 免疫稳定 免疫监视 正常 防御病原体的侵害和中和其毒素 抗传染免疫 异常 反应过高时 引起变态反应或免疫缺陷症 宿主的免疫力包括 非特异性免疫和特异性免疫 特异性免疫又分为细胞免疫和体液免疫两种 正常 清除体内自然衰老或损伤的细胞 进行免疫调节异常 识别紊乱 导致自身免疫病的发生 正常 某些免疫细胞发现并清除突变的癌细胞异常 功能失调时 导致癌或持续性感染的发生 第一节传染 二 决定传染结局的三大因素三 环境因素 环境因素 宿主环境 外界环境 先天 遗传素质 年龄等 后天 营养 精神 内分泌状态 药物 针灸 电离辐射 体育锻炼等 注意 医院内感染 95 为条件致病菌 自然环境 气候 季节 温度 湿度 地理环境等 社会环境 社会制度 居住环境 医疗环境等 第一节传染 三 传染的3种可能结局1 隐性传染宿主免疫力很强而病原菌的毒力相对较弱 数量又较少 传染后只引起宿主的轻微损害 且很快将病原菌彻底消灭 基本上不出现临床症状者 2 带菌状态病原菌与宿主双方都有一定的优势 病原菌仅被除数限制于某一局部且无法大量繁殖 这种宿主称带菌者 伤害玛丽 3 显性传染 传染病 宿主免疫力较低或入侵病原菌的毒力较强 数量较多 病原菌很快在体内繁殖并产生大量有毒产物 出现一系列临床症状 分类急性传染与慢性传染 局部感染与全身感染 毒血症 菌血症 败血症和脓毒血症 白喉 破伤风 伤寒早期 铜绿假单胞菌 金黄葡萄球菌 第二节非特异性免疫 第一道防线 第二道防线 二 吞噬细胞及其吞噬作用 1 吞噬细胞是一类存在于血液 体液或组织中 能进行变形虫运动 并能吞噬 杀死和消化病原菌等异常抗原的白细胞 一类为多形核白细胞 PMN 中的嗜中性粒细胞 另一类为单核吞噬细胞 如巨噬细胞 M 一 表皮和屏障结构1 皮肤与粘膜 外部屏障2 屏障结构 内部屏障1 血脑屏障 软脑膜 脉络丛 脑血管及星状胶质细胞2 血胎屏障 母体子宫内膜的底蜕膜和胎儿的绒毛膜 也称先天免疫或自然免疫 在生物长期进化过程中形成 属于先天即有 相对稳定 无特殊针对性的对付病原体的天然抵抗能力 第二节非特异性免疫 二 吞噬细胞及其吞噬作用2 巨噬细胞的功能1 吞噬和杀菌作用在激活后的T细胞或其某些产物如巨噬细胞活化因子 MAF 作用下 可使M 激活 可产生抗病原菌活性 2 抗原递作用M 可通过吞噬 处理及传递 对外来抗原物质进行加工 以适应激活淋巴细胞的需要 3 免疫调节作用M 分泌多种可溶性生物活性物质 借此来调节免疫功能 4 抗癌作用M 通过非吞噬性的细胞毒作用 非特异性地抑制或杀伤癌细胞 也可协同特异性抗体或致敏T细胞抑制或杀伤癌细胞 第二节非特异性免疫 三 炎症反应炎症是机体对病原体的侵入或其他损伤的一种保护性反应 在相应部位出现红 肿 热 痛和功能障碍 白细胞 红细胞 血小板 组胺 HA 和5 羟色胺 5 HT 在发炎早期有着重要作用 炎症既是一个病理过程 又是一种防御病原体入侵的积极免疫反应 原因 聚集大量吞噬细胞 血流加速 死亡宿主细胞释放抗菌物质 氧浓度下降和乳酸浓度提高 体温升高 第二节非特异性免疫 四 正常体液或组织中的抗菌物质如补体 溶菌酶 乙型溶素 干扰素 吞噬细胞杀菌素 组蛋白 白细胞素 血小板素 正铁血红素 精素 精胺碱和乳铁蛋白等 它们一般不能直接杀灭病原体 而是配合免疫细胞 抗体或其他防御因子 使之发挥较强的免疫功能 第二节非特异性免疫 四 正常体液或组织中的抗菌物质1 补体即补体系统 是指存在于正常人体或高等动物血清中的一组非特异性血清蛋白 主要是 球蛋白 补体的本质是一类酶原 能被任何抗原 抗体的复合物激活 激活后的补体就能参与破坏或清除已被抗体结合的抗原或细胞 发挥其溶胞作用 病毒灭活 促进吞噬细胞的吞噬和释放组胺等免疫功能 补体的性质不很稳定 只要在室温下放上几天或在56 下放置10min左右即可失活 第二节非特异性免疫 四 正常体液或组织中的抗菌物质2 干扰素 IFNs 概念是高等动物细胞在病毒或dsRNA等诱生剂的剌激下 所产生的一种具有高活性 广谱抗病毒等功能的特异性糖蛋白 功能能抑制病毒在细胞中增殖 免疫调节 包括增强M 的吞噬作用 增强NK细胞和T细胞的活力 和对癌细胞的杀伤作用等 类型IFN 白细胞干扰素 IFN 成纤维细胞干扰素 IFN 免疫干扰素 IFN 病毒或RNA 受宿主种属特异性的限制 第二节非特异性免疫 四 正常体液或组织中的抗菌物质2 干扰素 IFNs 干扰素诱生剂病毒 灭活病毒 病毒RNA 人工合成的dsDNA 可在细胞内繁殖的微生物 微生物产物 LPS 真菌多糖等 多聚化合物 植物血凝素 PHA 伴刀豆球蛋白A ConA 葡萄球菌肠毒素A和卡那霉素等 干扰素是一类与一般免疫系统有分工的特殊免疫系统 临床应用从相关细胞中提取的外源性干扰素具有毒性低 同种间无抗原性 反复注射而无耐受现象及起效速度快等优点 很快应用于临床 干扰素的作用机制 干扰素的作用机制 宿主细胞 A 病毒或干扰素诱生剂 干扰素mRNA 干扰素 转译 宿主细胞 A等 AVPmRNA 休止的AVP 病毒的dsRNA 激活的AVP 任何病毒感染后的宿主细胞 A等 病毒的mRNA 钝化的mRNA 病毒蛋白无法合成 转译 转译 与膜上受体结合 本次教学回顾及作业 教学回顾第一节传染传染与传染病决定传染结局的三大因素传染的3种可能结局第二节非特异性免疫表皮和屏障结构吞噬细胞及其吞噬作用炎症反应正常体液或组织中的抗菌物质作业P3362 8 10 上次教学回顾 第九章第一节传染第二节非特异性免疫 传染与传染病决定传染结局的三大因素传染的3种可能结局 表皮和屏障结构 吞噬细胞及其吞噬作用炎症反应正常体液或组织中的抗菌物质 第三节特异性免疫 特异性免疫概念 也称获得性免疫或适应性免疫 其主要功能是识别非自身和自身的抗原物质 并对它产生免疫应答 从而保证机体内环境的稳定状态 特点 获得性 特异性 体液免疫和细胞免疫 细胞介导免疫系统 个体差异性获得方式 特异性免疫 自动获得 被动获得 天然的 经临床或亚临床感染后获得 人工的 接种死 活疫苗或类毒素后获得 天然的 通过胎盘或初乳自母体中获得 人工的 注入免疫血清 抗毒素 丙种球蛋白或淋巴细胞后获得 第三节特异性免疫 免疫应答概念 活生物体内的免疫刺激 抗原识别 抗原特异性淋巴细胞发生活化 增殖和分化 表现出体液免疫或细胞免疫效应过程 特点 识别异己 特异性 记忆性具体类型和反应过程 P297图9 4 免疫应答的类型和过程示意图 成熟的辅助细胞 TH 活化的辅助细胞 TH 抗原 TDAPC抗原辅佐细胞TI抗原 抗原呈递 成熟的TC TD成熟的B细胞 效应性TC TD淋巴因子 记忆性T细胞记忆性B细胞浆细胞 细胞免疫功能 抗体 体液免疫功能 感应阶段增殖和分化阶段效应阶段活化阶段 刺激 在抗原刺激下 依赖于胸腺的一类小淋巴细胞 T细胞 发生增殖 分化 进而直接参与攻击靶细胞或间接地释放一些淋因子的免疫作用 在抗原刺激下 来源于骨髓的一类小淋巴细胞 B细胞 进行增殖并分化为浆细胞 由它合成抗体并释放到体液中以发挥其免疫作用 即胸腺依赖性抗原 包括血细胞 血清成分和细菌细胞等在内的多数抗原 它需要抗原递呈细胞 APC 又称辅佐细胞 AC 递呈抗原 能与任何TD抗原结合 经摄取 加工后递呈给特种T淋巴细胞并使之激活的免疫细胞 包括单核细胞 巨噬细胞 树突细胞 朗氏细胞 枯否氏细胞和B细胞等 直接刺激 即非胸腺依赖性抗原 包括一些多糖类 脂类和核酸类抗原 它不需要T细胞辅助或是对T细胞依赖程度很低 仅引起体液免疫中的初次应答 第三节特异性免疫 一 免疫器官1 中枢免疫器官又称一级淋巴器官 是免疫细胞发生 分化和成熟的部位 1 骨髓 免疫细胞形成部位 B细胞 人类 成熟部位 2 胸腺 T细胞成熟部位 3 法氏囊 B细胞 鸟类 成熟部位 2 外周免疫器官脾脏 是贮存淋巴细胞的场所淋巴结与淋巴管 构成淋巴细胞贮存运输系统 几种主要免疫应答细胞的起源 人体主要免疫器官 第三节特异性免疫 二 免疫细胞及其在细胞免疫中的作用免疫细胞 immunocyte 包括各类淋巴细胞 T B NK NS K和N细胞等 单核细胞 巨噬细胞和粒细胞等一切与免疫有关的细胞 免疫活性细胞 immunologicallycompetentcell 特指能特异地识别抗原 即能接受抗原的刺激 并随后进行分化 增殖和产生抗体或淋巴因子 以发挥特异性免疫应答的一类细胞群 种类 T淋巴细胞 B淋巴细胞 K细胞 NK细胞 N细胞 D细胞和单核细胞 吞噬细胞 在非特异性和特异性免疫中都发挥作用 T和B淋巴细胞的来源及其功能 第三节特异性免疫 二 免疫细胞及其在细胞免疫中的作用1 T细胞 T淋巴细胞 胸腺依赖型淋巴细胞 一种参与特异性免疫应答的小淋巴细胞 主要执行细胞免疫功能 包括细胞介导的细胞毒作用和迟发型超敏反应 也参与抗体的形成和炎症反应等 T细胞表面有其独特的表面标志 表面受体和表面抗原 T细胞主要亚群 由TD抗原刺激B细胞产抗体时 必须有TH的参与 人的TH约占外周血T细胞的40 60 迟发型超敏T细胞 TDTH 在抗原刺激下 可被活化 增殖并释放多种淋巴因子 LK 在机体局部引起以单核细胞浸润为主的炎症 迟发性超敏反应 并以此来消除某些病原菌所引起的慢性感染或胞内感染 此外 它在肿瘤免疫 移植细胞排斥反应和自身免疫病中也有重要作用 细胞毒T细胞 杀伤性T细胞 它能特异地溶解带TC抗原的靶细胞 如肿瘤细胞 移植细胞或受病原体感染的宿主细胞等 第三节特异性免疫 二 免疫细胞及其在细胞免疫中的作用2 B细胞 B淋巴细胞 骨髓 囊 依赖型淋巴细胞 一种在细胞膜表面带有自己合成的免疫球蛋白 膜抗体 的淋巴细胞 B细胞的表面受体 膜表面免疫球蛋白 SmIg 和表面抗原 B细胞主要亚群B 1 T细胞不依赖性亚群 只有初级免疫应答反应 产IgM B 2 T细胞依赖性亚群 有次级免疫应答反应 产IgM和IgG SmIg主要成分是IgM和IgD 既是一个某相应抗原的特异性受体 又是一个具有免疫球蛋白抗原决定簇的表面抗原 第三节特异性免疫 二 免疫细胞及其在细胞免疫中的作用3 第三淋巴细胞1 NK细胞自然杀伤细胞 大颗粒淋巴细胞 其细胞核呈肾形 有显著的凹痕 细胞质内有几个大型线粒体 NK细胞起源于骨髓干细胞 然后分布于脾脏和外周血中 2 K细胞杀伤细胞 大颗粒淋巴细胞 能专一地但非特异地杀伤被IgG所覆盖的靶细胞 K细胞有很高的ADCC 抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用 效应 4 第四淋巴细胞NKT细胞 同时具备T细胞和NK细胞特征的淋巴细胞 它可抑制因自身免疫性的TDTH细胞引起的自身免疫病 抑制癌症转移 延缓人体衰老等 第三节特异性免疫 三 免疫分子及其在体液免疫中的作用免疫分子 抗原及抗体 免疫分子 膜表面免疫分子 体液免疫分子 膜表面抗原受体 主要组织相容性复合物 MHC 抗原 抗体 补体 白细胞分化抗原 CD 细胞因子 粘附因子 AM 第三节特异性免疫 三 免疫分子及其在体液免疫中的作用1 抗原 免疫原 概念 一类能诱导机体发生免疫应答并能与相应抗体或T淋巴细胞受体发生特异性免疫反应的大分子物质 特性 免疫原性 抗原性 和免疫反应性 反应原性 分类 完全抗原和半抗原 不完全抗原 其实质为一抗原决定簇 第三节特异性免疫 三 免疫分子及其在体液免疫中的作用1 抗原 免疫原 Ag 免疫原性的物质基础相对分子质量大 一般都 1 0 104 结构复杂 蛋白质 多糖 核酸 半抗原 类脂异物 己 性 种属关系越远 抗原免疫原性越强 凡在胚胎期淋巴细胞所接触过的物质 即被当作 自身 物质 否则就属 异己 物质 抗原决定簇又称抗原表位 指位于抗原表面可决定抗原特异性的特定化学基团 一般由5 8个氨基酸残基 短寡糖残基 核苷酸残基组成 凡能与抗体相结合的抗原决定簇总数 称为抗原结合价 第三节特异性免疫 三 免疫分子及其在体液免疫中的作用1 抗原 免疫原 Ag 两类半抗原复合半抗原 无免疫原性但具有免疫反应性 能在试管中与相应抗体发生特异性结合并产生可见沉淀反应 分子量较大 有多个抗原决定基簇简单半抗原 阻抑半抗原 既无免疫原性 也无反应原性 不能与相应的抗体发生可见的反应 但能中和相应的抗体 阻止了抗体在相应的完全抗原或复合半抗原发生可见的反应 分子量较小 只有一个抗原决定簇 第三节特异性免疫 三 免疫分子及其在体液免疫中的作用1 抗原 免疫原 Ag 细菌的抗原 菌体抗原 O抗原 肠道G 表面的脂多糖 蛋白抗原 鞭毛抗原 鞭毛蛋白抗原 H抗原 菌毛抗原 菌毛蛋白抗原外毒素和类毒素外毒素 抗原性很强的蛋白质类毒素 是外毒素经甲醛脱毒后对动物无毒 但仍保留强免疫原性的蛋白质 荚膜抗原 荚膜抗原或K抗原 Vi抗原 表面抗原 主要是荚膜或微荚膜抗原 第三节特异性免疫 三 免疫分子及其在体液免疫中的作用1 抗原 免疫原 Ag 共同抗原与交叉反应特异性抗原 在一个同时存在多种抗原的复杂抗原系统中 只有该系统自身特有的抗原 共同抗原 类属抗原或交叉反应抗原 为多种复杂抗原系统所共有的抗原 交叉反应 由共同抗原 或相同决定簇 刺激机体产生的抗体分子可以和不同生物间相同或相似的抗原决定簇结合 一种细菌的细胞通常同时含有上述两类抗原 故能刺激机体同时产生两类相应的抗体 利用交叉反应原理把某一多价特异抗血清与其共同抗原反应 再把此抗原 抗体复合物去除 就可去除其中的共同抗体 称吸收反应 若所用的共同抗原是颗粒状的 则称凝集反应 医学上指血清学试验中抗原与异源血清 针对其他类属抗原或异嗜抗原的血清 所发生的反应 血缘关系愈近 反应程度愈高 常用于血清型和亚型的鉴定 交叉反应 凝集吸收反应和单价特异抗血清的诊断试验 第三节特异性免疫 三 免疫分子及其在体液免疫中的作用2 抗体 Ig 概念 是高等动物体在抗原物质的刺激下 由浆细胞产生的一类能与相应抗原在体内外发生特异结合的免疫球蛋白 特点 仅由鱼类以上脊椎动物的浆细胞所产生 必须有相应抗原物质刺激免疫细胞后才能产生 能与相应的抗原发生特异性 非共价和可逆的结合 其化学本质是一类具有体液免疫功能的球蛋白 既具抗体功能 也可作抗原去刺激异种生物产生相应的抗体 抗抗体 第三节特异性免疫 三 免疫分子及其在体液免疫中的作用 重链 heavychain H链 450 550个氨基酸残基 分子量约55 75kD 轻链为重链的1 2 约由214个氨基酸组成 2 抗体 Ig 基本结构 所有Ig的基本单位都是四条肽链的对称结构 两条重链 H 和两条轻链 L 每条重链和轻链分为氨基端和羧基端 第三节特异性免疫 三 免疫分子及其在体液免疫中的作用2 抗体 Ig 根据Ig重链抗原性的差异 Ig可分为五类 即 IgG IgM IgA IgD IgE 相应H链为 及 链 CL CL CH1 VL VL VH CH2 CH3 C端 N端 稳定区 可变区 Fab段 铰链区 补体结合 Fc受体结合 抗原结合部位 第三节特异性免疫 三 免疫分子及其在体液免疫中的作用2 抗体 Ig IgG的酶解片段木瓜蛋白酶水解IgG 得到两个相同的Fab段和一个Fc段 胃蛋白酶裂解IgG 得到一个具有双价活性的F ab 2段和若干个小分子多肽碎片 pFc 产抗体细胞的激活和抗体的形成巨噬细胞的抗原递呈作用T细胞对B细胞的激活浆细胞产生抗体 第三节特异性免疫 三 免疫分子及其在体液免疫中的作用2 抗体 Ig 机体产抗体的两次应答规律初次免疫应答滴度低 维持时间短 很快会下降再次免疫应答滴度高 维持时间长抗体形成的机制抗体形成的克隆选择学说抗体多样性的分子生物学机制 本次教学回顾及作业 教学回顾第三节特异性免疫免疫器官免疫细胞及其在细胞免疫中的作用免疫分子及其在体液免疫中的作用作业P336 33711 12 18 上次教学回顾 第九章第三节特异性免疫 免疫器官免疫细胞及其在细胞免疫中的作用免疫分子及其在体液免疫中的作用 T细胞 TH TS TD TC B细胞第三淋巴细胞 NK K 第四淋巴细胞 NKT 抗原 特性 分类 免疫原性的物质基础 抗原决定簇 共同抗原和交叉反应 抗体 特性 分类 化学结构 IgG的酶解片段 第四节免疫学方法及其应用 血清学反应传统的免疫学方法仅局限于用体液免疫产生的抗体与各种抗原在体外进行反应 因所用抗体均采自免疫后的血清 故称作血清学反应 免疫诊断学和免疫学检测现代免疫学方法既包括体液免疫 又包括细胞免疫的各种方法 并发展出免疫诊断学和免疫学检测等分支技术学科 它们在疾病诊断 法医和基础理论等的研究和应用中 都有重要的作用 包括免疫标记技术 免疫定位分析 免疫亲和层析和免疫生物传感器技术等 第四节免疫学方法及其应用 一 抗原 抗体反应的一般规律1 特异性抗原决定簇和抗体分子V区间的各种分子引力 2 可逆性抗原抗体间的结合仅是一种物理结合 3 定比性抗原决定簇数目 多价 与抗体 双价 只有两者比例合适时 才会出现可见反应 4 阶段性第一阶段 时间短 一般仅数秒 不可见 第二阶段 时间长 从数分钟至数小时或数天 可见 其出现受多种因子影响 如抗原抗体的比例 pH 温度 电解质和补体等 两个阶段无严格的界限 5 条件依赖性最佳条件一般为pH 6 8 温度为37 45 适当振荡 以及用生理盐水作电解质等 第四节免疫学方法及其应用 二 抗原 抗体间的主要反应 一 凝集反应 二 沉淀反应 precipitation 三 补体结合试验 complementfixationtest CFT 四 中和试验 neutralzationtest 第四节免疫学方法及其应用 二 抗原 抗体间的主要反应 一 凝集反应 或直接凝集反应 概念 颗粒性抗原 细菌 血细胞等 与相应抗体在适量电解质环境中相互作用 经过一定时间出现肉眼可见凝集现象 用于此反应中的抗原又称凝集原 抗体则称凝集素 一般都应稀释抗体 抗血清 以使其与抗原有一合适比例 方法 直接法 玻片凝集法和试管定量法 肥达氏试验等 间接法 间接凝集反应 或被动凝集反应 可溶性抗原 或抗体 吸附于免疫学反应无关的颗粒 称为载体 表面上 当这些致敏的颗粒与相应的抗体 或抗原 相遇时 就会产生特异性的结合 在电解质参与下 这些颗粒就会发生凝集现象 第四节免疫学方法及其应用 二 抗原 抗体间的主要反应 二 沉淀反应概念 当可溶性抗原与相应抗体在电解质存在的适当条件下相遇 经过一定时间出现肉眼可见的沉淀现象 用于此反应中的抗原又称沉淀原 抗体则称沉淀素 一般都应稀释抗原 以使其与抗原有一合适比例 方法 当反应于试管内进行时 称环状沉淀实验 可溶性抗原与抗体在含电解质的凝胶介质 通常用半固体琼脂 起支持作用 内自由扩散 若比例适当可出现白色沉淀线 称琼脂扩散试验 若使抗原抗体的移动在电场中进行 可以缩短反应时间提高灵敏度 是琼脂扩散与电泳技术的结合 称免疫电泳 第四节免疫学方法及其应用 二 抗原 抗体间的主要反应 三 补体结合试验 CFT 概念 一种有补体参与 并以绵羊红细胞和溶血素 红细胞的特异抗体 是否发生溶血反应作指示的一种高灵敏度的抗原与抗体结合反应 其中共有2个系统和5种成分参与反应 补体结合试验 待检系统 补体 已知的抗原或抗体 待检的抗原或抗体 绵羊红细胞 溶血素 绵羊红细胞的特异抗体 指示系统 取自豚鼠的新鲜血清 第四节免疫学方法及其应用 二 抗原 抗体间的主要反应 三 补体结合试验 CFT 基本原理 补体可与任何抗原和抗体的复合物相结合 指示系统如遇还未被抗原和抗体复合物所结合的游离补体 就会出现肉眼易见的溶血反应 优点 既可测未知抗体 也可测未各抗原 既适合作沉淀反应 也适合作凝集反应 尤其适宜检出微量抗原与抗体间出现的肉眼看不见的反应 因此可提高一般血清学反应的灵敏度 缺点 操作复杂 影响因素较多 补体结合试验示意图 第四节免疫学方法及其应用 二 抗原 抗体间的主要反应 四 中和试验概念 由特异性抗体抑制相应抗原的生物学活性的反应 属于本试验中有生物学活性的抗原包括细菌外毒素的毒性 酶的催化活性和病毒的感染性等 在临床诊断中 测定风湿病患者体内是否存在抗链球菌O抗体的反应 就是利用中和试验来进行的 第四节免疫学方法及其应用 三 免疫标记技术概念 某些小分子物质结合到抗原或抗体上 不影响抗原抗体反应但使之更容易观察从而提高检测的灵敏度 称为免疫标记技术 与抗原或抗体结合的小分子物质称为标记剂 近年免疫标记技术发展很快 各类物质被试用作标记物 其中以荧光素 酶和放射性同位素最为成熟 合称三大标记技术 第四节免疫学方法及其应用 三 免疫标记技术 一 免疫荧光技术 荧光抗体法 FAT 一种将免疫反应的特异性与荧光标记分子的可见性结合起来的方法 在一定条件下 用化学方法将荧光物质 荧光素 与抗体结合 但不影响抗体与抗原结合的活性 与相应抗原结合后 在荧光显微镜下观察抗原的存在与部位 可定位 亦可用荧光计定量 常用荧光素有异硫氰酸荧光素 FITC 罗丹明 RB200 等 后来又发展为二氯三嗪基氨基荧光素 DTAF 等 本法可在亚细胞水平上直接观察鉴定抗原 除用于疾病的快速诊断外 也广泛用于各类生物学研究 第四节免疫学方法及其应用 三 免疫标记技术 二 免疫酶技术 酶免疫测定法 FAT 一种利用酶与抗原或抗体结合后 既不改变抗原或抗体的免疫学反应特异性 也不影响酶本身的活性 在特异抗原抗体反应后 在相应而合适的酶底物作用下 产生可见的不溶性有色产物 常用的为辣根过氧化物酶 HRP 碱性磷酸酶 脲酶等 可用于组织切片 细胞培养标本等组织细胞抗原的定性定位 也可用于可溶性抗原或抗体的测定 酶联免疫吸附测定法 ELISA 将可溶性抗体或抗原吸附到聚苯乙烯等固相载体上 再进行免疫酶反应 用分光光度计比色以定性或定量 酶标记免疫定位 第四节免疫学方法及其应用 三 免疫标记技术 三 放射免疫测定法 酶免疫测定法 FAT 一类以放射线同位素作为标记物 将同位素分析的灵敏性和抗原抗体反应的特异性这两大特点结合起来的测定技术 分为放射免疫分析法和放射免疫测定自显影法 放射免疫技术灵敏度极高 能测得10 9 10 12克的含量 广泛用于激素 核酸 病毒抗原 肿瘤抗原等微量物质测定 但需特殊仪器及防护措施 并受同位素半衰期的限制 四 免疫电镜技术一种采用电子致密物质标记的抗体与其相应抗原发生特异性结合后 借电镜检出这一标记复合物的技术 五 发光免疫测定法把化学发光或生物发光反应与免测定相结合 第五节生物制品及其应用 生物制品可作为预防 治疗和诊断用的来自生物体的各种制剂 两类人工免疫的比较 第五节生物制品及其应用 一 人工自动免疫类生物制品 一 常规疫苗1 疫苗 用于预防传染病的抗原制剂 广义上包括菌苗和疫苗 狭义上仅指用病毒 立克次氏体或螺旋体等微生物制成的生物制品 1 活疫苗 减毒活疫苗 用人工的方法使病原体减毒或从自然界筛选某病原体的无毒株或微毒株所制成的活微生物制剂 2 死疫苗用理 化因子杀死病原体 但仍保留原有免疫原性的疫苗 第五节生物制品及其应用 一 人工自动免疫类生物制品 一 常规疫苗2 类毒素 百 白 破 三联制剂 百日咳死菌苗 白喉类毒素 破伤风类毒素3 自身疫苗 自体疫苗 用从病人自身病灶中分离出来的病原体所制成的死疫苗 第五