1油镜使用、细菌简单染色

教学计划 农学院15学时5个实验生科院30学时9个实验 课堂纪律 严格遵守实验室规章制度严肃课堂纪律不允许无故旷课 早退 迟到 不准大声喧哗实验服 实验室安全和卫生 安全实验室严禁吸烟 注意用水 防电和防火 正确使用化学试剂 菌种和仪器 卫生每次实验需留下6位同学值日 保持实验室清洁 负责关门窗 水电 微生物的个体微小 必须借助显微镜才能观察到 因此 显微镜就成为微生物学研究工作者不可缺少的基本工具 所以 了解显微镜的种类 结构 功能和正确地掌握不同显微镜的使用方法是很有必要的 实验一油镜的使用 细菌的简单染色 显微镜的使用 1 普通光学显微镜的构造 1 机械装置 2 光学系统 2 光学显微镜的工作原理最小分辨距离 D 2N A n 介质折射率 光线入射角半数 2 1 光波长度 数值口径 nsin 在物镜上 有镜口率 N A 的标志 它反应该镜头分辨力的大小 其数字越大 表示分辨率越高 各物镜的镜口率如下表 物镜镜口率 N A 工作距离 mm 10 0 257 040 0 650 65100 1 300 15 与其他物镜不同 油镜需在载玻片与镜头之间加滴镜油 原因有二 1 增加照明亮度油镜的放大倍数可达100 x 焦距很短 直径很小 但所需要的光照强度却最大 为了不使通过的光线有所损失 必须加入与玻璃的折射率 n 1 55 相仿的镜油 通常用香柏油 n 1 52 2 增加显微镜的分辨率油镜的分辨率可达到0 2 m左右 1 不准擅自拆卸显微镜的任何部件 以免损坏 2 镜面只能用擦镜纸擦 不能用手指或粗布 以保证光洁度3 观察标本时 必须依次用低 中 高倍镜 最后用油镜 当目视接目镜时 特别在使用油镜时 切不可使用粗调节器 以免压碎玻片或损伤镜面 4 拿显微镜时 一定要右手拿镜臂 左手托镜座 不可单手拿 更不可倾斜拿 5 显微镜用完后 将载物台降至最低 并将最低倍数物镜或物镜的空位正对载物台 显微镜保养和使用中的注意事项 单染色法是用一种染料使细菌着色以显示其形态 不能辨别细菌细胞的构造 通常采用碱性染料 如美蓝 结晶紫 碱性复红等 使其着色 当在中性 弱碱性 弱酸性溶液中 细菌细胞通常带负电荷 而碱性染料在电离时 其分子的染色部分带正电荷 因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色 染色前必须固定细菌 其目的是 一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上 二是增加其对染料的亲和力 常用的有加热和化学固定两种方法 固定时尽量维持细胞原有的形态 细菌的单染色 实验材料 单目普通光学显微镜番红 结晶紫牙签 染色缸 载玻片 接种环 酒精灯 香柏油 乙醇 乙醚混合液 3 7 生理盐水 擦镜纸 吸水纸等 1 染色1 取一干净载玻片 2 在载玻片中间滴一小滴生理盐水 3 用牙签取少量牙垢 涂在生理盐水中 混匀并涂成薄膜 4 自然干燥 5 火焰固定 6 染色 用结晶紫或番红染色一分钟 7 水洗 8 自然干燥 实验步骤 染色中注意事项 1 涂片不可太厚2 固定时不能在火上烤的时间太长 否则菌体收缩变形3 染色后必须晾干后才能用油镜镜检 2 镜检将制好的玻片在低倍镜下确定其位置然后再在高倍镜下观察最后滴上一滴香柏油放在油镜下观察侧视用粗调升载物台至最高 然后缓慢下降至清晰 仔细观察 并将其绘制下来 实验步骤 3 擦镜先用擦镜纸将油镜由里圈向外圈擦一遍然后再取一张擦镜纸 滴上乙醇 乙醚混液 将油镜由里圈向外圈擦一遍最后再用干净擦镜纸擦两遍即可4 整理实验器具 实验步骤 作业 1 绘制牙垢中的细菌形态 示例 16 1