分光光度法测定食品中亚硝酸盐的不确定度评定.doc

分光光度法测定食品中亚硝酸盐的不确定度评定1、目的 对用分光光度法测定结果的不确定度进行分析，找出影响不确定度的因素，对不确定度进行评定，给出不确定度。2、测量方法 样品经沉淀脂肪和蛋白质后，进行过滤。加入N-1-萘基-乙二胺二盐，使其显紫红色，然后用分光光度计在538nm波长下测其吸光度。将测得的吸光度与亚硝酸钠标准系列溶液的吸光度进行比较就可以计算出样品的亚硝酸盐含量。3、主要仪器与试剂 电子天平：AA-250型，美国丹法特仪器公司 分光光度计：UV755B 单标线吸管：20 mL，A级 容量瓶：100 mL，A级4、紫外分光光度法测定样品中亚硝酸盐含量的数学模型亚硝酸盐含量（以亚硝酸钠计），mg/kg= （1）5、不确定度来源分析 从检测过程和数学模型分析，样品中亚硝盐含量测定结果不确定度来源于：（1）测量重复性标准不确定度分量u1；（2）天平示值误差引起的不确定度分量u2；（3）V1容积误差引起的不确定度分量u3；（4）V2容积误差引起的不确定度分量u4； (5)由标准曲线求得亚硝酸钠含量m（分光光度测定）引起的不确定度分量u5。6、标准不确定度分量的计算6.1测量重复性标准不确定度分量u1 表1为同一批样品按照GB5009.33-2010重复测定6次的结果。表1项目 次数123456吸光度0.0360.0340.0330.0350.0340.0340.0360.0330.0330.0340.0340.0340.0370.0340.0330.0340.0350.035吸光度平均值0.0360.0340.0330.0340.0340.034相当于氮质量，g0.47250.44560.43220.44560.44560.4456称样量，g2.30812.13162.08132.16152.20322.1624亚硝酸盐含量含量（以亚硝酸钠计），mg/kg5.0395.1525.1175.0814.9845.079平均值（）5.08单次测量结果的标准偏差：=0.059mg/Kg则u1rel=0.038/5.17=0.00746.2天平示值误差引起的不确定度分量u2rel 实际使用的天平经有关部门校准，按均匀分布，其不确定度据电子天平检定证书，天平最大允许误差为1mg，四角误差为 2mg，重复性误差为 2mg，按正态分布考虑，则有：=9.99910-4(g)则相对不确定度：4.59810-46.3 v1容积误差引起的不确定度分量U3rel100mL容量瓶最大允许误差为0.10mL(A级)，按均匀分布，其不确定度为U3=0.10/= 0.0578 mL, 则相对不确定度：U3rel=6.4 v2容积误差引起的不确定度分量U4rel 20mL单表线吸管最大允许误差为0.030mL（A级），按均匀分布，不确定度为U4=0.030/=0.018mL, 则相对不确定度：=6.5由标准曲线求得亚硝酸钠含量C（分光光度测定）引起的不确定度分量u7rel C的不确定度又两个部分构成，一为由标准溶液的浓度吸光度拟和的直线求得C的量所产生的不确定度；二是由标准储备液配置成标准溶液时所产生对C的测量带来的不确定度。6.5.1 标准溶液的浓度吸光度拟和的直线求得C的量所产生的不确定度该实验是用紫外可见分光光度计测量一些列亚硝酸钠溶液，以试剂空白为参比，对个不同浓度亚硝酸钠标准溶液进行3次重复测定，其测量数据如表2所示。表2 不同浓度度亚硝酸钠标准溶液测定结果xi/(g/100mL)00.200.400.600.801.001.502.00yi(A)0.0000.0150.0310.0450.0620.0750.1120.1480.0000.0150.0310.0450.0610.0740.1140.1470.0000.0140.0300.0440.0620.0760.1130.1480.0000.0150.0310.0450.0620.0750.1130.148计算相关系数r值，若r值大于0.995则表明y与x之间成线性关系。（1） 算y对x的回归直线y=a+bxa) 斜率b b) 截距ac) 回归直线根据所求r值，可看出x和y成线性关系，其回归直线（即标准曲线）方程为 y=0.0745x0.0008（2） 计算回归直线的标准偏差（即y残差的标准偏差）Sy/x 式中 yij仪器的各点响应值； yi回归直线的计算值；n测量点的个数；m每个测量点重复测量的次数；mn-2自由度计算各个yi和yij yi值，如表2所示。表2 中间结果 xiyij(A) yi(A) yijyi(A)(yijyi)2(A2)00.0000.0000.0010.00030.00030.0003-0.0003-0.0003-0.0002910-8910-8410-80.20.0150.0150.0140.01470.01470.01470.00030.0003-0.0007910-8910-84910-80.40.0310.0310.0300.03070.03070.03070.00030.0003-0.0007910-8910-84910-80.60.0450.0450.0440.04470.04470.04470.00030.0003-0.0007 910-8910-84910-80.80.0620.0610.0620.06170.06170.06170.0003-0.00070.0003910-84910-8910-81.00.0750.0740.0760.07500.07500.07500.0013-0.00100.00100.01.010-6110-61.50.1120.1140.1140.11330.11330.1133-0.0013 0.00070.000716910-8491084910-82.00.1480.1470.1480.14770.14770.14770.0003-0.0007 0.0003 910-84910-8910-8g = 上式中，P为对样品进行分光光度测量的次数，n总为对标准系列测定的总次数。6.5.2 标准溶液配置成标准溶液时所产生对C的测量带来的不确定度。分光光度法的测定过程：取1.00mL标准溶液用水定容至100mL容量瓶中。从亚硝酸钠标准使用液中吸取一系列溶液50mL比色管中，配置标准系列溶液，在分光光度计上读取其吸光度，通过线性回归方程求出亚硝酸钠的质量与吸光度的关系式。6.5.2.1 标准使用液的不确定度u51（1）标准溶液的不确定度 按标准物质证书，扩展不确定度为k=2（%），则不确定为：，则相对不确定度为： （2）100mL容量瓶最大允许误差为0.10mL（A级），按均匀分布，其不确定度为:0.10/=0.0578mL。 则相对不确定度：0.0578/100=5.7810-4（3）1mL单标线吸管最大允许误差为0.007mL（A级），按均匀分布，其不确定度为:0.007/=0.0041mL。则相对不确定度：0.0041/1.00=4.110-3 则：Ucrel=1.010-27 合成标准不确定度表3为标准不确定度分量一览表表3标准不确定度一览表标准不确定分量不确定度来源分布类型标准不确定度测量重复性随机效应正态分布A0.0047样品称样量天平示值误差正态分布B4.6010-6V1容量瓶均匀分布B5.7810-4V2单标线吸管均匀分布B9.010-4标准溶液标准溶液均匀分布B1.0010-2由标准曲线求得亚硝酸钠含量m1标准溶液的浓度吸光度拟和的直线正态分布A0.9710-2合成相对标准不确定度 =（0.0074）2（4.6010-4）2(5.7810-4)2+(9.01