高中生物 第一部分《实验二 微生物的培养和利用》课件6 浙科版选修1.ppt

实验2分离以尿素为氮源的微生物 尿素又称脲 是蛋白质的降解产物 哺乳动物的尿液中含有 植物不能直接吸收尿素 因此 大量尿素的存在对环境造成污染 有些细菌可产生脲酶 以尿素为氮源 脲酶可将尿素分解为氨 被植物吸收 co nh2 2 h2oco2 2nh3 脲酶 一 实验原理 用选择培养基可分离出以尿素为氮源的微生物 这些微生物可产生脲酶 脲酶可将尿素分解为能被植物吸收的氨 因此这类微生物具有一定的生态学价值 稀释涂布平板法统计土壤样品中含有的这种微生物的数目 细菌尿素nh3中性碱性酚红颜色 黄色紫红色 稀释涂布平板法的原理 将菌液进行一系列的梯度稀释 然后将不同稀释程度的菌液分别涂布到固体培养基的表面 进行培养 以形成标准菌落 二 实验目的 使用以尿素为唯一氮源的培养基分离细菌 有脲酶 通过指示剂 酚红 颜色的变化检知培养基ph的变化 脲酶催化的化学反应 统计被检测的土壤中含有的以尿素为氮源的微生物的数量 三 实验中涉及到的一些问题 一 哪些土壤中含有这种以尿素为氮源的微生物多 选材的问题 二 此实验用到的选择培养基必需含有哪些物质 三 可用什么指标认定不同土壤中选择出的微生物对尿素分解能力的高低 四 统计微生物的数量可用哪些方法 没硬化 腐殖质丰富的土壤 碳源 尿素 无机盐 水 酚红 培养基红色的深浅 稀释涂布平板法 显微镜直接记数法 四 操作步骤 倒平板 制备一定浓度梯度的细菌悬液 g土壤 ml无菌水 振荡 为 稀释液 依次制备 的土壤稀释液 稀释涂布分离法分离细菌 制备无菌的 固体培养基和尿素固体培养基 培养观察 倒置 度 倒 个 培养基 个尿素固体培养基 无菌 0 1ml 玻璃刮刀 配制培养基 尿素培养基 1l 葡萄糖10gnacl4 8gk2hpo44 8g琼脂20g酚红0 01g尿素80g lb培养基 1l 蛋白胨 10g酵母粉 5gnacl 10g琼脂 20g 对照组 选择培养基 实验组 lb培养基是一种培养基的名称 生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种 使菌种成倍扩增 达到使用要求 倒平板 需要倒3个lb平板 9个尿素平板 每个稀释度1个lb对照平板3个尿素平板 平行重复组 接种 取100ul菌悬液 涂布分离 涂布分离 涂布前后三角刮刀需要灼烧吗 问题讨论 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行 结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求 想一想 第2步应如何进行无菌操作 应从操作的各个细节保证 无菌 例如 酒精灯与培养皿的距离要合适 吸管头不要接触任何其他物体 吸管要在酒精灯火焰周围等等 37 倒置培养 按浓度捆成一摞 恒温37 培养 防止冷凝水污染培养皿 防止其它细菌污染 五 操作步骤 学生做 倒平板 倒 个 培养基 个尿素固体培养基 制备一定浓度梯度的细菌悬液 g土壤 ml无菌水 振荡 为 稀释液 依次制备 ml无菌水 的土壤稀释液 稀释涂布分离法分离细菌 制备无菌的 固体培养基和尿素固体培养基 培养观察 倒置 度 10 4 10 3 10 2 1 为什么要用琼脂糖代替琼脂配置固体培养基 因为琼脂是未被纯化的混合物 内含一定量的含氮化合物 如果用琼脂固化培养基 会为细菌提供一定量的非尿素类氮源 这样会在尿素固体培养上产生大量以非尿素为氮源的细菌 不利于以尿素为氮源的细菌的筛选 故用纯化的琼脂糖而不用琼脂做固化剂 思考题 2 有脲酶的细菌在生态稳态上起什么作用 土壤中的尿素在较高温度下会被水解成氨 氨使土壤碱化 氨还与so42 等离子形成化合物 使土壤板结 而脲酶的细菌不仅使动植物尸体降解 而且利用了所形成的氨 有利于自然界中氮的循环 3 有脲酶的细菌菌落周围为什么有着色的环带出现 细菌向胞外分泌脲酶 使培养基中尿素水解 水解后产生氨 氨为碱性 酚酞在酸性环境里呈黄色 碱性里呈红色 培养基中酸碱指示剂产生颜色变化 变红 标