二乙酰一肟氨基硫脲法检测游泳池水中尿素.doc

二乙酰一肟氨基硫脲法检测游泳池水中尿素 饶国强 武义县疾病预防控制中心 321200尿素含量是游泳池水质检验中一项重要的卫生指标，国标方法GB/T18204.29-2000中用的二乙酰一肟安替比林法存在显色后遇光褪色，线性范围窄的缺点。本人借鉴临床生化检验中的尿素氮测定方法，设计了二乙酰一肟氨基硫脲比色法，结果令人满意。1原理尿素在氨基硫脲存在下，与二乙酰一肟在强酸环境中加热，生成红色的二嗪衍生物。显色强度在一定范围内与尿素含量成正比。2材料与方法21 仪器 721-分光光度计22 试剂221 酸性试剂 浓硫酸200ml与磷酸300ml混匀，冷至室温。加氨基硫脲50mg，硫酸镉2.0g溶解，棕色瓶冷藏至少可保存一年。222 二乙酰一肟溶液 称取4.0g二乙酰一肟，溶解后加纯水至200ml，棕色瓶冷藏可保存半年。223 尿素标准贮存液 准确称取0.1000g尿素，加少量纯水溶解后，移至1000ml容量瓶中，加5滴三氯甲烷作防腐剂，用纯水定容至刻度。4保存，此溶液尿素浓度为0.1mg/ml。224 尿素标准使用液 临用时将尿素标准贮存液稀释10倍。此溶液尿素浓度10ug/ml。23 操作步骤231取水样10ml于具塞标准比色管中。另取比色管8只，分别加入10ug/ml的尿素标准使用液0、0.10、0.25、0.50、1.00、2.00、3.00、5.00ml，各加水至约10ml。232 每管各加酸性试剂5.0ml，2%的二乙酰一肟溶液2.0ml，加纯水至25ml。沸水浴12分钟，取出后用冷水冷却至室温。233 以空白管调零，在540nm处，用1cm比色皿测定各管吸光值。以浓度对照吸光值，制备标准曲线。以水样的吸光值在标准曲线上查出尿素含量。234 计算 CM1000V 试中：C水样中尿素浓度，mg/L；M从回归方程算得水样中尿素质量，ug ；V水样体积，ml。3结果与讨论31 加热时间 国标法中的加热时间为50分钟，而本法加热12分钟即可完全显色。32 显色稳定性 酸性试剂中的氨基硫脲与硫酸镉可促进尿素与双乙酰结合，提高灵敏度和显色后的 稳定性。国标法显色后的溶液遇光易褪色，本法溶液显色后至少可以稳定2h吸光值 无变化。33 最低检出限与线性范围 本法的最低检测量为1.0ug，若取10ml水样，最低检测限为0.1mg/L。在150ug范围内，有良好的线性关系。34 标准曲线及回归方程 标准曲线制备见表1，回归方程Y= -0.124+67.821X r0.9998表1 标准曲线制备Y标准含量（ug） xs变异系数（）1.00.0150.00126.72.50.0400.00266.55.00.0750.00445.810.00.1550.00513.220.00.2900.00943.230.00.4450.00861.950.00.7400.01251.735 回收率试验 各取4份含不同浓度尿素的游泳池水样10ml,分别加入10ug/ml的尿素标准使用液1.0ml测回收率，结果见表2。表2 回收率试验结果样品号原含量（ug）加入量（ug）测得量（ug）回收率（）18.81018.496.025.01014.595.036.31016.4101.046.71016.598.036本法操作简便，溶液显色稳定，线性范围宽，试剂稳定时间长，适合平时工作中