螺旋体和支原体

螺旋体和支原体,螺旋体（Spirochete）,一类细长、柔软、弯曲呈螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物，生物学地位介于细菌与原虫之间。,分类与命名,分类依据：大小、螺旋数目、螺旋规则程度和螺旋间距,分类与命名,一目一科：螺旋体目 螺旋体科：分为8个属（-）(表18-1)疏螺旋体：3-10个稀疏不规则的螺旋，波纹状伯氏疏螺旋体 莱姆病 硬蜱回归热螺旋体流行性回归热 体虱赫姆疏螺旋体地方性回归热 软蜱奋森疏螺旋体 多种口腔感染 条件致病,分类与命名,钩端螺旋体：螺旋细密规则，一端或两端弯 曲呈钩状问号钩端螺旋体钩端螺旋体病 接触疫水密螺旋体：8-14个细密规则的螺旋，菌体硬直，两端尖梅毒螺旋体梅毒性传播雅司螺旋体雅司病皮肤损伤品他螺旋体品他病皮肤损伤地方性螺旋体地方性梅毒黏膜损伤,钩端螺旋体（Leptospira ）,螺旋细密而规则数目较多菌体一端或两端弯曲呈钩状,临床意义,典型人畜共患病 鼠和猪人类主要感染途径是接触污染疫水临床常见流感伤寒型黄疽出血型肺出血型脑膜脑炎型肾功能衰竭型,微生物特性,形态结构 螺旋细密而规则,菌体一端或两端弯曲呈问号或C、S形 基本结构：外膜 内鞭毛（两根） 原生质圆柱体,微生物特性,抗原构造 属特异性抗原 只存在钩端螺旋体属中 血清学诊断，分类及抗原结构分析 群特异性抗原 菌体脂质多糖复合物 型特异性抗原 表面抗原，多糖蛋白复合物 血清群和血清型分类培养特性 营养要求较高，常用含10兔血清的Korthof 培养基 最适生长温度28-30 ，在人工培养基中生长缓慢,微生物特性,抵抗力对热抵抗力弱，对来苏、升汞、石碳酸等敏感，对青霉素敏感但是夏秋季酸碱度中性的湿土或水中可存活20天，甚至数月,微生物检验,检验程序: 图18-2标本采集 血液、CSF、尿液、疫水早期(1周内)血液阳性率高，1周后尿和脑脊液等的阳性率高。感染6-10天取血可检出抗体，第3-4周达最高水平。 尸检：肝、肾、脑、肺等,微生物检验,直接检查 直接显微镜检查：差速离心，取沉淀涂片，暗视野检查或采用Fontana 镀银染色镜检 核酸检测,微生物检验,分离培养 取血液、尿液、CSF等接种Korthof 培养基鉴定 已知诊断血清鉴定血清群和血清型抗体检测 病初和发病3-4周采双份血清 显微镜凝集试验：1:300或双份血清效价增高4倍以上 间接凝集试验：单份血清标本活性碳凝集效价1：8，乳胶凝集效价1：2，双份血清效价增高4倍以上更有诊断价值 ELISA：被检血清OD值为阴性对照的2倍动物试验 分离钩端螺旋体的敏感方法 幼龄豚鼠或金地鼠腹腔接种,疏螺旋体,有310个稀疏而不规则的螺旋，呈波状，运动活泼,莱姆病的主要病原体，主要传播媒介是硬蜱,伯氏疏螺旋体,分类,DNA同源性分析莱姆病菌株伯氏疏螺旋体：美国和欧洲伽氏疏螺旋体：欧洲和日本埃氏疏螺旋体：欧洲和日本 分类尚未统一，一般以伯氏疏螺旋体作为莱姆病病原体的统称。,生物学特性,形态结构：长10-40um,宽0.1-0.3um，两端稍尖，运动活泼。革兰染色阴性，但不易着色。姬氏或瑞氏染色效果好。培养特性：营养要求高，微需氧，适宜温度35 。生长慢，需培养2-3周才可观察到生长情况。抵抗力：抵抗力弱，对青霉素、红霉素等敏感。,微生物检验,标本采集：病损皮肤组织、淋巴结抽出液、血液、关节滑膜液、脑脊液、尿液等标本直接检查 直接显微镜检查：暗视野显微镜观察形态和运动，简便直观但检出率极低 核酸检查：PCR 快速，敏感性高分离培养：BSK复合培养基 2-3周可观察生长，甚至需培养12周,抗体检测间接免疫荧光法（IFA）：操作简便实用，但类风湿关节炎及其他螺旋体病可出现假阳性。ELISA：方便快捷，但全菌体ELISA特异性差，仅用作筛选。免疫印迹技术：有助于排除ELISA的假阳性。动物实验 经典方法，但烦琐，有生物危害，一般实验室很少使用。,回归热疏螺旋体：人类回归热病原体虱传回归热(流行性回归热):病原体为回归热疏螺旋体，通过体虱传播。蜱传回归热(地方性回归热):病原体为杜通疏螺旋体等15种，软蜱传播，储存宿主为啮齿类动物。反复发作的发热与缓解螺旋体外膜蛋白的变异。取外周血用暗视野显微镜观察；直接涂片染色；培养；动物实验抗原易自发变异，血清学诊断困难。,奋森疏螺旋体 专性厌氧，常与梭形梭杆菌寄生于人类口腔牙龈部，条件致病菌，奋森咽峡炎、牙龈炎、口颊坏疽、溃疡性口腔炎；革兰染色镜检或直接暗视野观察,密螺旋体,螺旋细密、规则、两端尖，数目多,致病性,苍白螺旋体苍白亚种 梅毒性传播地方亚种 地方性梅毒污染餐具极细亚种 雅司病直接接触皮肤品他螺旋体 品他病皮肤损伤,梅毒螺旋体,临床意义梅毒的病原体，人是唯一传染源 传播途径 母婴传播 性传播 输血传播获得性梅毒，临床上分为三期：初期、中期、晚期先天性梅毒,微生物学特性,形态与染色8-14个致密而规则小螺旋，两端尖直，运动活泼Fontana 镀银染色染成棕褐色暗视野观察形态和运动方式培养特性不能在无活细胞人工培养基中生长繁殖抵抗力抵抗力极弱，对温度和干燥特别敏感 ，4 3天死亡对青霉素，四环素，红霉素，庆大霉素或砷剂敏感,微生物检验,检验程序：图18-5标本采集 下疳分泌物、皮疹渗出液、淋巴结穿刺液、组织块（制成组织悬液） 标本要及时检查,微生物检验,标本直接检查 直接显微镜检查：暗视野显微镜检查 （适用、期梅毒） Fontana 镀银染色镜检 直接荧光检测法,暗视野显微镜检查,镀银染色,微生物检验,标本直接检查 核酸检测 采用PCR检测标本中梅毒螺旋体的特异性DNA 片段体外培养 迄今仍未解决,抗体检测,非密螺旋体抗原试验 多用牛心肌的心脂质作为抗原，测定血清中的反应素;可定性和半定量，半定量可用来评价疗效和判断是否有再感染等 性病研究实验室（Venereal Disease Research Laboratory, VDRL）玻片试验 快速血浆反应素环状卡片试验（Rapid Plasma Reagin circle card, RPR），可进行半定量，进行疗效评价和判断是否有再感染。注意：假阳性、假阴性问题,抗体检测,密螺旋体抗原试验 不能区别不同种的密螺旋体及所致疾病 荧光密螺旋体吸收试验(FTAABS)：具高度特异性和敏感性，适用于早期梅毒的诊断，可持续数年至终身。 梅毒螺旋体荧光抗体双染色试验(FTA-ABS-DS)：对早期和晚期梅毒均有很高敏感性和特异性，且阳性出现时间早，但技术要求高，费时费钱。 抗梅毒螺旋体抗体的微量血凝分析(MHA-TP)：最简易的方法，效价在1：80以上可判为阳性。 ELISA：价廉、保存时间久且稳定，是目前梅毒血清学诊断试验的首选方法。 TPPA：用于筛选试验阳性标本的确证试验。,MHA-TP,TPPA,血清学试验的选择先天梅毒的诊断,支原体(Mycoplasma),一类缺细胞壁、形态多样、能通过除菌滤器，在无生命培养基中能生长繁殖的最小原核细胞型微生物。,分类与命名,支原体目、支原体科(支原体属和脲原体属)对人致病的主要有肺炎支原体(M. pneumoniae)人型支原体(M. hominis)生殖器支原体(M. genitalium)穿通支原体(M. penetraus)溶脲脲原体(U. urealyticum),肺炎支原体(M. pneumoniae ),临床意义 呼吸道感染病原体，经飞沫传染 间质性肺炎，原发性非典型性肺炎 肺炎支原体是青少年急性呼吸道感染的主要病原体之一，表现为上呼吸道感染综合症，也可引起其他系统的肺外并发症。,流行特点：间歇性，长时期缓慢播散，可持续数月至一年 感染呈全球性分布，平时散在发病，3-5年出现一次地区性流行,微生物学特性,形态结构：短细丝状，长2-5um，近细胞丝状体尖端有一球状的特殊结构。典型的肺炎支原体类似酒瓶状，没有细胞壁，仅有细胞膜。革兰染色阴性，Giemsa 染色呈淡紫色。,抗原构造：细胞膜中的糖脂抗原和蛋白质抗原。糖脂抗原抗原性强、特异性较差。 170k的DPI膜蛋白和43kD的菌体蛋白特异性强。支原体PI膜蛋白是其主要型特异性抗原，其抗原性常用生长抑制试验(growth inhibition test, GIT)与代谢抑制试验(metabolism inhibition test, MIT)鉴定。,微生物学特性,培养特性 营养要求高，需加入10-20动物血清，还需添加酵母液、组织液、核酸提取物和辅酶等，形成“荷包蛋”状菌落 与细菌L型生物学性状的区别（表19-1）生化反应：利用葡萄糖、精氨酸（-）、尿素（-）、吸附红细胞 （表19-2）,“荷包蛋”状菌落,抵抗力,支原体耐冷对热和干燥敏感对-内酰胺类抗生素不敏感对红霉素、多西环素、螺旋霉素等抗生素敏感,微生物检验,检验程序（图19-3）标本采集：咽试子、痰、支气管分泌物、鼻咽洗液等；快速接种、转运培养基标本直接检查 涂片检查：G染色不易着色 电子显微镜观察无细胞壁 核酸检测：PCR检测肺炎支原体DNA,微生物检验,培养与鉴定： 培养基：牛心浸液+20小牛血清+新鲜酵母浸液+美兰、醋酸陀、青霉素 初次培养：液体培养基中增菌；生长后转种固体培养基，观察菌落(致密圆形菌落或油煎蛋样菌落) 生化反应 血清学鉴定：GIT和MIT 将支原体分成若干血清型,抗体检测,ELISA：敏感、特异性高、快速经济。补体结合试验：常用血清学方法。双份血清效价4倍以上增长或单份血清=1:64-1:128，老年病人阴性不能排除。敏感性和特异性90%左右。检测IgM，初次感染阳性，再次感染常不出现阳性。间接血凝试验：操作简便，敏感性略高于CF试验，主要检测IgM，特异性尚不理想。冷凝集试验：冷凝集素是支原体感染后机体产生的一类IgM型自身抗体，非特异试验。效价=1:64为阳性,效价越高或双份血清4倍以上升高，近期感染的可能性越大。,溶脲脲原体,Ureaplasma urealyticum ,Uu 非淋病尿道炎患者的尿道分泌物中分离得到寄居于人泌尿生殖道，男性尿道、阴茎包皮和女性阴道，偶可自呼吸道分离出。临床意义性传播疾病，亦可通过母婴传播致非淋菌性尿道炎（NGU）、男性不育前列腺炎或附睾炎，阴道炎、宫颈炎，可致流产致病机制：侵袭酶、毒性产物有关,微生物特性,形态结构: 液体培养基中以球形为主，能通过微孔滤膜；没有细胞壁，革兰染色阴性，Giemsa 染色呈紫蓝色。培养特性营养要求高培养基：牛心浸液+胆固醇+酵母+尿素等温度：35-37，PH：5.5-6.5 气体环境: 95N2和5CO2 很小“荷包蛋”样菌落水解尿素产氨，不分解葡萄糖和精氨酸,微生物特性,抗原构造 多糖抗原和蛋白质抗原 脲酶抗原种特异性抗原抵抗力 对渗透作用敏感，对热敏感, 对作用细胞壁的抗生素不敏感，对影响胞浆蛋白合成的抗菌药物敏感。,微生物检验,检验程序：图19-5标本采集：尿液、前列腺液、精液、分泌物、羊水、血液等直接检查 核酸检测：敏感、稳定可靠、快速简便，将成为临床快速诊断的重要试验手段。 ELISA：可测定血清型别及IgG类型，敏感、特异性强，有早期诊断意义。 免疫斑点试验：敏感、特异性强，快速，不需特殊仪器。,微生物检验,培养与鉴定 增菌：液体培养基(含酚红和尿素) 阳性转种新的液体培养基和固体培养基（尿素和MSO4 ） 涂片作G染色、姬娒萨染色和细胞壁染色观察菌体形态，根据形态和生化反应作出初步鉴定，MIT和GIT作进一步鉴定。抗体检测：意义不大,人型支原体Mycoplasma hominis,寄居于生殖道，女性多见性接触传播形态结构与溶脲脲原体相似；固体培养基上呈典型“油煎蛋状”菌落；分解精氨酸，不分解尿素和葡萄糖。四环素与林可霉素敏感微生物检验与溶脲脲原体相似,穿通支原体M. penetrans,临床