组培实验室的构建PPT课件

植物组织培养实验室构建 组织培养实验室设计常用设备和器材配置附 器皿的选择与清洗附 组培室的卫生与灭菌 组织培养实验室设计 主要内容 实验室的设计仪器设备和器皿用具配置 一 设计规模和原则1 设计规模 取决于工作的目的 以工厂化生产为目的 以科研为目的 2 设计原则 1 保证无菌操作 植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的 要做到无菌的条件 需要一定的环境 设备 器材和用具 2 工作方便 按组织培养程序来没计 避免某些环节倒排 引起日后工作混乱 3 培养条件 人工控制温度 光照 湿度等 一 实验室设计 二 组培实验室组成 标准组织培养室包括 药品区洗涤区制备区灭菌区储放区无菌操作区培养区 可以根据自己的实际条件进行合并 准备室 分区 药品区 洗涤区 制备区 灭菌区 储放区主要任务 1 药品的贮备 称量 溶解 配制 培养基分装 2 器具的洗涤 干燥 保存 培养基的灭菌等 主要设备 药品柜 防尘橱 放置培养容器 冰箱 天平 蒸馏水器 酸度计 水池 操作台 高压灭菌锅 干燥灭菌器 如烘箱 及常用的培养基配制用玻璃仪器 详见下图 酸度计 立式高压自动灭菌锅 主要任务 主要用于植物材料的消毒 接种 培养物的转移 试管苗的继代 原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序 主要设备 紫外光源 超净工作台 消毒器 酒精灯 接种器械 接种镊子 剪刀 解剖刀 接种针 等 无菌操作室 接种室 无菌操作室 超净工作台 接种室宜小不宜大 一般7 8平米 要求地面 天花板及四壁尽可能密闭光滑 易于清洁和消毒 配置拉动门 以减少开关门时的空气扰动 接种室要求干爽安静 清洁明亮 在适当位置吊装1 2盏紫外线灭菌灯 用以照射灭菌 最好安装一小型空调 使室温可控 这样可使门窗紧闭 减少与外界空气对流 接种室应设有缓冲间 面积1m2为宜 进入无菌操作室前在此更衣换鞋 以减少进出时带入接种室杂菌 缓冲间最好也安一盏紫外线灭菌灯 用以照射灭菌 培养室 是将接种的材料进行培养生长的场所 大小 根据需要培养架的大小 数目 及其他附属设备而定 其设计以充分利用空间和节省能源为原则 高度比培养架略高为宜 周围墙壁要求有绝热防火的性能 培养室 主要设备 培养架 控温控光控湿 摇床 培养箱 紫外光源等 培养材料放在由金属制成培养架上培养 培养架一般设5层 最低一层离地高约lOcm 其他每层间隔30cm左右 培养架高1 7m左右 其长度根据日光灯长度而设计 如采用40W日光灯 则长I 3m 30W的长lm 宽度一般为60cm 培养室最重要的因子是温度 一般保持在20 27 左右 具备产热装置 并安装窗式或立式空调机 实验室培养架 实验室培养架 恒温摇床 由于热带植物和寒带植物等不同种类要求不同温度 最好不同种类有不同的培养室 室内湿度也要求恒定 相对湿度以保持在70 80 为好 可安装加湿器 控制光照时间可安装定时开关钟 一般需要每天光照10 16h 也有的需要连续照明 现代组培实验室大多设计为采用天然太阳光照作为主要能源 这样不但可以节省能源 而且组培苗接受太阳光生长良好 驯化易成活 在阴雨天可用灯光作补充 细胞学实验室该室用于对培养物的观察分析与培养物的计数等 主要设备 双筒实体显微镜 显微镜 倒置显微镜等 小型仪器设备有 分注器 血球计数器 移液枪 过滤灭菌器 电炉等加热器具 磁力搅拌器 低速台式离心机等 显微镜 显微镜 第二节常用设备和器材 一 高压蒸汽灭菌锅 用于进行培养基和器械用具的灭菌 1 种类 小型手提式高压灭菌锅 大型立式的或卧式的高压灭菌锅2 使用方法和原理 小型手提式高压灭菌锅 把分装好的培养基及所需灭菌的各种用具 蒸馏水等 放入高压灭菌锅的消毒桶内 将外层锅内加水至水位线 盖好锅盖 上好螺丝 接通电源升温 待锅内温度达100 C 0 05kgf cm2或0 005MPa 左右时 打开排气阀排净锅内冷空气 然后关闭排气阀 继续加热至温度达到121 C 1 05kgf cm2或0 103MPa 时 维持20 30min即可切断电源 让锅内气压自然下降 当压力降到零点后 打开排气阀 排出剩余蒸汽 再打开锅盖取出培养基及灭菌物品 3 注意事项 1 灭菌时 锅内冷气必须排尽 否则会影响灭菌效果 当压力达到1 05kgf cm2或0 103MPa时 应注意维持时间 时间过长会破坏培养基的化学成分 时间短则达不到灭菌效果 2 锅内灭菌物品不能装得太满 要留有30 的空间 大型立式的高压灭菌锅 卧式灭菌锅 立式高压自动灭菌锅 二 净化工作台 工作原理 净化工作台一般由鼓风机 滤板 操作台 紫外光灯和照明灯等部分组成 根据风幕形成的方式 可分为垂直式和水平式两种 超净工作台的工作原理是 鼓风机送入的空气经过细菌过滤板除去微生物后 再流过工作台面 并在操作人员和操作台之间形成风障 使杂菌不能进入 形成一个无菌的工作面 优点 是操作方便自如 比较舒适 工作效率高 准备时间短 开机10分钟即可操作 可进行长时间使用 超净工作台 三 接种工具 常用的有双筒实体显微镜 镊子 剪刀 解剖刀 酒精灯等 四 培养设备 常用的有空调机 定时器 温度控制器 增湿和去湿机 培养瓶 培养架 摇床或旋转床 日光灯 光照培养箱等 五 化学实验及分析设备 天平 酸度计 蒸馏水器 烘箱 电炉 药品柜 冰箱 废污物桶等 六 培养物细胞学观察设备 主要包括显微观察设备 组织切片染色用设备 照相冲洗设备 七 微孔过滤器 细胞过滤器 激素用于灭菌 附1 玻璃器皿的选择与清洗 一 玻璃器皿的选择 培养用的玻璃器皿 试管 三角瓶 培养皿 果酱瓶等等 显微镜下观察用的 细胞微室 载玻片 培养皿等 二 玻璃器皿的清洗 1 洗涤剂 肥皂 洗洁精 洗衣粉和铬酸洗涤剂 一般用洗衣粉即可 2 新购置的玻璃器皿由于它们或多或少含有游离碱性物质 使用前先用1 稀盐酸内浸泡一夜 然后用肥皂水洗净 清水冲洗 最后用蒸馏水冲淋一便 干后备用 3 对已被霉菌等杂菌污染的玻璃器皿则必须现在121 高压蒸汽灭菌30分钟后再清洗 4 洗净的玻璃器皿应透明发亮 内外壁水膜均匀 不挂水珠 附2 组培室的卫生与灭菌 一 灭菌用品 用具 2 新洁尔灭 高锰酸钾 甲醛 70 酒精 喷雾器 水桶 工作服 口罩和手套二 灭菌方法1 打扫卫生 2 地面 墙壁和工作台的灭菌 1 配方 取新洁尔灭原液20ml 加水980m1 配成2 新洁尔灭溶液 2 方法 将配好的2 新洁尔灭溶液倒入塑料桶内 把喷雾器的主体插入溶液中 并加压 握着喷雾器的喷杆进行均匀地喷雾 在喷房顶时 要特别小心 防止药液雾滴掉入眼晴 3 无菌室和培养室的灭菌 用甲醛和高锰酸钾熏蒸 1 配方 每立方米空间用甲醛l0ml加高锰酸钾5g的配比液进行熏蒸 2 方法 首先房子要密封 然后在房子中间放一玻璃器皿 将称好的高锰酸钾放入玻璃器皿内 再把已称量的甲醛溶液慢慢倒入 完毕 人迅速离开 并关上门 密封3天 3 3天后 开启房间 搬走玻璃器皿废液 搞好地面卫生 4 在己经熏蒸的房间里 用70 酒精纱布擦洗培养架 玻璃台面及工作台 实验安排 07生物 1 双周星期二 14 21 00班长 电话 学习委员 电话 第一组 1 20组长 电话 第二组 21 40组长 电话 第三组 41 59组长 电话 07生物 2 单周星期二 14 21 00班长 电话 学习委员 电话 第一组 1 20组