螺旋藻的驯化及培养.doc

二一级本科毕业设计论文 第 13 页 共 12 页1 引言1.1螺旋藻的历史情况简介 螺旋藻( Spirulina)系蓝藻门(Cyanophyta)颤藻目(Oscilatoriales)颤藻科(Oscilatoriaceae)中的一个属。现在国内外生产的螺旋藻主要有两个品种:钝顶螺旋藻(S . plantensis)和极大螺旋藻( S . mexima)。十六世纪西班牙的航海家到达墨西哥时见到土著印第安人大量食用螺旋藻。1940年法国生物学家Creach到非洲探险时发现乍得湖周围土人用螺旋藻制成食品和调味料，Creach博士便将这一发现向欧洲林奈学会作了报告。经世界著名藻类学家Dangeard鉴定并命名为螺旋藻。1950年，联合国出于对世界人口不断增长而蛋白质供应不足的关注，开始对螺旋藻大规模养殖进行研究。1952年美国卡内基研究所发表论文总结了第二次世界大战有关螺旋藻的研究情况。1959年，法国著名人类学家Maxives Brandily发表著名论文指出“数个世纪以来，乍得的原始部落一直开发和利用着螺旋藻，这是未来食品-2000年的食品。1965年法国组织探险队再次到乍得湖及其邻近地区考察，考察报告发表后，引起世界的生物学家、营养学家、企业家以及政府部门的高度重视。1960年法国巴斯德研究院C.Zarrouk发表了他的博士论文“螺旋藻的培养研究”，为用培养基法培养螺旋藻打下基础。1967年法国科学家Genevive Clemen1s首次公布了螺旋藻养殖技术和结果，并全面介绍了螺旋藻的营养价值、培养方法及加工干燥技术。1.2螺旋藻的营养价值、保健作用及医药效用 螺旋藻在南美一些国家早已被作为食用藻类，日本已将螺旋藻作为保健药品投放市场。根据分析检测结果，表明螺旋藻具有高蛋白、高营养、高消化吸收率等特性。含有65%以上的优质蛋白，R-胡萝卜素的含量比胡萝卜高15倍，多种维生素和多种矿物质的含量都极为丰富。螺旋藻细胞壁是由粗蛋白组成的，很容易消化。每人每日吃15g干重螺旋藻就能保证必要的营养素来源。螺旋藻中所含有的8种必需氨基酸和9种非必需氨基酸的含量均符合联合国粮农组织的标准。螺旋藻还有安全性高、无毒性、风味良好等特点。1993年在摩纳哥举办了首次螺旋藻大会，与会科学家一致认为螺旋藻可以解决贫穷国家的营养不良19J螺旋藻作为人类食品的保健意义不仅在于含有优质高蛋白，最引人注目的是胡萝卜素含量4000 mg/ kg，维生素高达1320 mg/ kg, Ca .P .K .Fe .Ge .Se等含量也极为丰富。这些物质对儿童的生长发育、提高机体免疫功能和延缓细胞衰老都非常有意义，螺旋藻所含有的亚油酸亚麻酸等不饱和脂肪酸竟占总脂肪酸中的45，它可以有效地防止胆固醇和甘油三酷在肝脏、血管中大量堆积，防止损害心、血管的正常生理功能。此外，还含有海藻酸、水溶性多糖、藻蓝素等生物活性物质。这些成分具有降低血液粘滞度、提高机体免疫功能、升白、抗辐射、抗溃疡、抗贫血、抗癌、治疗糖尿病等作用，并已应用临床实践。 1996年5-6月间，我们进行了动物实验，实验结果表明:螺旋藻的降低胆固醇作用同于阿拉斯加鱼油，而降低甘油三脂作用强于阿拉斯加鱼油。 根据报导，美国、日本和墨西哥的科学家对螺旋藻的毒理学和药理学进行了系统研究，证明其有很高安全性和多种生物活性，可作为治疗多种疾病的药物和辅助药物。其功效有:增强机体免疫力，减慢细胞衰老速度，降低胆固醇，具有防癌、抗辐射作用;刺激前列腺素合成，调节机体生理功能;促进新陈代谢，加速伤口愈合，防止皮肤角质化;对贫血、肝炎、糖尿病、胃及十二指肠溃疡、视力衰退及肝病等疾病具有良好的疗效;对严重营养不良病人的调养、对病后虚弱者的恢复，对儿童增加营养和老人身体保健、延年益寿等均有特殊的效果。根据毒理学研究证明，螺旋藻是无毒的。经过长期食用观察，也未见出现异常现象。根据我们的实验，L DS。测不出大鼠长期毒性实验，动物外观、活动形态、脏器组织均未见异常。1.3我国螺旋藻的开发利用 我国对螺旋藻的研究是从70年代开始的，并数次从国外引进了钝顶螺旋藻种。中国科学院武汉水生生物所和南京大学生物系先后作了观察研究。中国科学院植物所对螺旋藻进行了整体细胞放氢的研究。1983年4月至1984年1月在江西成功地进行了繁殖试验，收获到一批干藻产品。张志恒 (1989)用螺旋藻做了小虾饲喂试验，证明该藻易于消化和吸收;中国科学院动物研究所和江西省农科院畜牧所分别用螺旋藻做成配合饲料对小白鼠试喂，结果比对照组增重50，效果十分显著。张景襄等 (1989)在国内首次进行了螺旋藻工厂化培养生产和食品添加剂螺旋藻粉的制作。何实银等 (1 990)进行了螺旋藻工厂化试验和最简易的生产方式，科学的原料配方，充分利用自然条件进行食品螺旋藻的培养，1988年通过鉴定；该研究掌握了螺旋藻的生产规律，春夏秋冬四季不同温度、不同光照条件对螺旋藻的产量和质量的影响解决了干燥粉碎、无菌处理等技术问题，生产工艺简单，易推广，成本低，利税一般可达25%以上。江西省农科院耕作栽培研究所 (1987)进行螺旋藻大规模生产及其产品锌、铁等微量元素强化处理。天津潘言明、郑世清 (1 990)研究了在自然条件下生产螺旋藻的配套技术和关键环节，并筛选出产量高、综合性能好的4号菌株，对传统培养基进行了改良，研究出以废气弃物为代用品的PS和OS简化培养基，降低了螺旋藻的生产成本。江西省畜牧兽医研究所戴荣衰等 (1992)研究了螺旋藻喂鸡技术及其营养机制，对螺旋藻粉促进鸡代谢和吸收能力进行了试验。北京农业大学商树田、李维炯(1989)研究了盐碱水培养螺旋藻，用盐碱水分别做Zarrouk、印度GFTR15简易培养液的添加成分(占1/3-2/3)，得出简易混合液培养螺旋藻，其OD是Zarrouk培养液的36 - 38，说明盐碱水作添加成分是具有一定的效果，可降低养藻成本。近10年来，我国已有不少学者进行了这个项目的研究，从实验室试验生产已发展到工厂化生产，而且从生产方式、原料配方、不同温度、光照条件下的培养以及干燥、粉碎、无菌处理等方面去探讨和研究，从低投资到高效益方面去研究螺旋藻的食品加工技术，均取得了可喜的成果。1.4螺旋藻保健食品开发利用 根据螺旋藻的高安全性、高营养性及多种生物活性和保健作用，我们研制成功了螺旋藻面食系列产品一圣普乐即食面、方便面、挂面等保健绿色食品。这些系列食品均含有适当比例的螺旋藻成分，颜色鲜绿，口感味美，煮、烫食用均极方便。成人每天食用1 -2两即可达到保健与防病治病目的。经过120名高血脂、高胆固醇、动脉硬化患者服食，经4周食用以后，检查结果表明:食用前后对比，经统计学处理结果，螺旋藻食品圣普乐系列面食具有明显的降低甘油三酷和胆固醇的作用，对于防治心脑血管病具有重要意义。我省生产的螺旋藻面，已得到良好的社会反应。 1.5 螺旋藻的培养 螺旋藻属蓝藻门蓝藻纲颤藻科螺旋藻属，其丝体呈螺旋状是螺旋藻属的特征。丝长约50-500pm，宽约1- 2pm，繁殖以细胞不断横分裂或藻丝断裂而增加藻丝长度和数量。1.5.1培养方式 螺旋藻的培养可分为实验室培养和商业化的大规模培养两大类。一般认为螺旋藻与大多数蓝藻一样，是一种专性光合自养生物，其实螺旋藻具有一定的异养能力。本文介绍的便是一种利用螺旋藻光合异养能力的实验室培养方式。 实验设备：容量10 L的玻璃缸1个 6900型气泵一套将玻璃缸置于日照充足的位置，加人培养液，加入藻种后开启气泵，并在缸口覆盖透明薄膜。1.5.2培养液的配制螺旋藻对矿质营养的要求并不苛刻，但它繁殖快，应及时补充各种养分，每十升培养液用矿质量如下表： 螺旋藻培养液简化配方 1营养成分 （克/升）CFTRI培养基简化CFTRI 培养基营养成分 （克/升）CFTRI培养基简化CFTRI 培养基 NaHCO3 4.5 4 NaCl 1 1 K2HPO4 0.50.5(过磷酸盐) MgSO4 0.2 0.2 NaNO3 1.51.0（尿素） CaCl2 0.04 K2SO4 1 1 FeSO4 0.01 将以上矿质按顺序逐一溶人水中(水为自来水，经日晒及紫外灯消毒后使用)溶解完全后即为培养液。1.5.3培养条件1.5 .3.1 pH值 加人各种矿质后，培养液pH值为7-8，在藻种生长过程中，培养液的pH值不断变大。PH值在8.5-10的范围内时，藻的生长最佳;当pH大于11.0，将不利于生长，此时需更换培养液。更换时可用200目筛滤出螺旋藻，再将废液换成新液，放人藻种，开启气泵。刚放入的藻抱结成团，约半小时后分散。 1.5.3.2温度 螺旋藻最适宜的生长温度为25-37,40和15为其最高与最低生长温度。当温度达到45时，短时间内藻丝未见解体(细胞壁破裂);而在5-10的低温环境下，藻丝仍可缓慢生长几个月，可见其具有一定的耐热耐寒性。 1.5.3.3光照 在营养和温度正常的情况下，光照成为影响螺旋藻生长的一个重要因素。本实验的主要光源是太阳光，在实验过程中可以发现，同样的生长条件下，光照充足时，藻的生长加快，藻液呈蓝绿色;长时间阴雨，光线弱时，藻长势慢，藻液呈黄绿色。1.6 螺旋藻的海水驯化螺旋藻属虽然有海产的种类，但目前养殖的钝顶螺旋藻和极大螺旋藻都是淡水产的。配制淡水培养基需要较多的营养成分，因此增加了成本。而海水中营养较丰富，用海水配制培养基可少用或减去一些营养盐。这样既降低成本，又能保证质量。经研究表明，螺旋藻经驯化能在含盐量达30的海水中生长。主要驯化步骤如下：1. 将原来生长在淡水培养基中的螺旋藻接种于最低一级浓度的氯化钠配制的培养液中培养，然后逐级过度到较高的氯化钠浓度的培养液。最后一级直到浓度为35。每一级浓度需经过异端时间培养并在显微镜下挑选正常螺旋藻的丝状体接种与高一级氯化钠浓度的培养液中2. 经过不同浓度氯化钠培养液逐步驯化而获得的正常丝状体，用海盐（食用粗盐）配制的培养液再作进一步驯化。方法步骤同上。3. 经海盐驯化的螺旋藻，再以上述同样的方法以自然海水盐度达35仍能正常生长，不在产生任何的凝聚现象，海水螺旋藻即驯化成功。 淡水螺旋藻能够从低浓度的NaCl培养液一直过渡到高达30盐度的NaCl培养液中生长繁殖。这种逐步适应高盐度的机制，认为是当淡水的螺旋藻移入较高盐度的NaCl 溶液后，其细胞自身能产生一种低分子的碳水化合物作为细胞渗透压的调节剂，从而使细胞所在的培养液中的NaCl的浓度有着直接的关系。极大螺旋藻从淡水培养基移至海水培养基中培养时，形态会发生明显的变化。其中变化最大的是螺径。在海水培养基中，螺旋变的扁平，螺径明显缩小，比在淡水培养的螺径缩小48%。其次变化的是螺距，比在淡水培养的缩小21%。螺旋藻形态的变化是适应环境条件的结果。由于海水中的渗透压与淡水培养基差别大，同时还存在着含量大大超过螺旋藻生长所需要的钙、镁等离子，螺旋藻除了具有适应高盐度的机制外，还会以适宜的形态变化来适应环境条件的改变。螺旋藻具有自然界中最佳的蛋白质，特别丰富的一胡萝卜素、维生素B12、铁和亚油酸等。该藻类光合作用中的光能转换效率高，是普通高等植物的三倍以上。色素能迅速吸收光能，将吸收的无机物质迅速转化为有机物质。螺旋藻所具有的这些特性，为我们开发利用该藻具有重要现实意义。2 材料与方法2.1 材料 2.1.1 藻种来源 受试为极大螺旋藻,采自欣园小河中、水体中的天然成分，经一系列方法提纯后，选择活性好的个体。2.1.2 培养液配置 培养液是按上述简易培养液配置比例自行配置好后备用。2.2 实验地点 学校实验室2.3 方法从欣园采集的水体中再含有螺旋藻的同时聚集了大量的轮虫和原生动物，此时应用化学的提存方法，加入0.15-0.25mg/ml的NH4HCO3可达到杀死轮虫和原生动物的目的，并且不会伤害到藻种。待藻种纯化后将藻种接种到三角烧瓶中加入已配好的培养液进行扩大培养（注意培养容器的消毒，烧瓶口用消毒过的纱布或纸张包好），放在适宜的光照和温度条件下培养。刚接种或当培养液比较稀疏时，宜置于弱光下培养。待扩大成熟后，即可按照引言中提到的方法进行驯化。2.3.1 极大螺旋藻的采集在温度适宜光照较好的天气里采集水样（一般气温要在30摄氏度左右为宜），利用一个200目的特制网筛采集水样，采集过程中应注意：网筛应完全没落水中，采集时间要足够的长（防止采集不够完全，一般以每次采集5-10分钟为宜），应多采集几次，倒入烧杯后带回实验室观察。2.3.2极大螺旋藻的分离 当发现水体中含有极大螺旋藻，同时含有大量的壶状臂轮虫和原生动物。壶状臂轮虫在螺旋藻生长季节由雌体进行孤雌生殖，雌体性成熟后产夏卵(非需精卵)，大小约为成体的1/4。卵产后1-2 d即可孵化，数小时后即可长大，几天内达到性成熟并继续孤雌生殖。 它也是养殖螺旋藻中危害之一。此时我们可加入0.15-0.25mg/ml的碳酸氢铵 ，可达到杀灭壶状臂轮虫和原生动物的目的。在实际使用时应视藻体的生长状况和天气情况而定，具体要点:一是如平时生产中氮肥用量较少，碳铵量可大一些。二是高温季节，碳铵易造成氨中毒，用量可适当低一些。三是杀虫时，碳铵应大面积同时施用以防止交叉污染和此后轮虫的此起彼伏。四是施用碳铵后应停施氮肥数天。五是要使杀虫效果更好，7d后可全部再施一次。使用上述方法0 .5-ld后，轮虫可全部杀灭，而藻体生长几乎不受任何影响。2.3.3 极大螺旋藻的培养当培养液配好，容器消毒灭菌后，即可接种或扩大培养。接种后培养液的量可以是原来的3-10倍。瓶口用消毒过的纱布或纸张（滤纸或牛皮纸）包好，放在合适的光照和温度条件下培养。刚接种或当培养液比较稀疏时，宜置于弱光下培养。在培养过程中要经常搅拌培养液。搅拌对螺旋藻的生长有益，可使培养液中的气体和营养成分得以充分交换，藻丝不易结块或下沉。搅拌的方式有几种。一是可直接窑洞三角瓶，每天一次。二是通气培养，通入空气或含一定浓度的CO2气体。此外，还可在摇床上培养（往复式摇床），这种培养方式一次可以培养许多瓶，省去手摇的麻烦。螺旋藻培养时可见藻液呈蓝绿色，密度小时呈淡绿色，肉眼可见细小的藻丝。当环境条件不利或衰亡时，藻丝发生解体，失去螺旋形，色泽变黄、变白，或在培养液中密集成黄、白、淡红色絮状小块沉于底部。钝顶螺旋藻和极大螺旋藻在培养时成不同状态。前者常密集在一起，相互缠绕成团块状或絮状悬于或沉于容器的底部，后者藻丝较大，细胞中气泡很多，常悬浮于培养液中，分散生长，不相互缠绕在一起。2.3.4 极大螺旋藻的驯化具体方法见引言1.6。2.3.5 螺旋藻生长的测定螺旋藻在培养过程的成长状况或速度可以用几种方法来测定，目前常用的有五种方法，下面介绍两种：（1）光密度法 这是最常用、也是最简便的一种方法。当培养的藻类生长迅速、藻细胞数目增加时，藻液颜色由浅变深。因此可以用分光光度计来测定光密度值（OD）来表示生长状况。测定时试样要充分摇匀，在560纳米波长下侧光密度值。以OD值表示生长率。生长率技术公式为： K = (lgN-lgN0)/t式中 N0-实验开始的光密度； N-实验结果时的光密度； t-培养时间。 通常每天测一次，每次重复3-5遍，取平均值。（2）细胞计数 用计数框或视野法直接在显微镜下计算细胞（藻丝）数目。相对生长常数K计算公式为： K= (logN-logN0)/t式中 t-培养时间； N0-t时开始时的细胞数； N-经过t时间的最后细胞数。 3 实验结果 本次实验中，在分离水体中的极大螺旋藻时，在经过一系列比较实验后得到加入碳酸氢铵的浓度为0.15-0.25mg/ml,下面是比较实验的表格： NH4HCO3加入量(g/100ml)10倍镜下一个视野可见轮虫和原生动物数10倍镜下一个视野可见极大螺旋藻数 1 25 1 5 13 3 10 7 4 15 1 8 20 0 9 25 0 9 30 0 2由上面表格可知，在15-25mg/100ml时，轮虫和原生动物量最低，而螺旋藻生长不受影响。故在分离螺旋藻是应选用0.15-0.25mg/ml的碳酸氢铵，可达到分离的作用。 在极大螺旋藻的放大培养和驯化过程中，在按照上述1.5.2图所配制的培养液中生长状况良好，经过驯化后的极大螺旋藻在海水中生长状况一般。有部分藻种还是不能再海水中正常生长，可能因为实验过程中没注意氯化钠浓度逐级过渡到高浓度时未在显微镜下挑选正常螺旋藻的丝状体接种于下一级氯化钠培养液中。从而使藻种有所污染。4 分析与讨论 螺旋藻虽然在地球上已生存35亿年之久(OrioCiferri ,1983 ; H . DurandChastel ,1980)，被非洲、南美洲当地一些居民食用也已有近千年的历史，但由于栽培、加工技术及商业利益等方面的限制，其作为优质食品和药物资源的价值一直未能得到广泛关注( Fox ,1993)。直到本世纪70年代，全球范围内的人口和粮食危机日益加剧，螺旋藻才又以其极高的营养价值和独特的医疗保健功能，逐渐受到世界许多国家和国际组织的重视：1972年第二次国际蛋白质会议上，螺旋藻被认定为“未来的超级营养品”；1974年联合国世界粮食会议确认其为“重要的蛋白质资源”;联合国粮农组织(FAO)誉之为“明天最理想的食品”；世界卫生组织(WHO)称螺旋藻为“21世纪最理想保健品”；1991年美国粮食及药物管理局(FAD)认为螺旋藻是“最安全的保健食品”；日本食品协会认为螺旋藻是“优质健康食品”；1993年在摩洛哥召开的首次世界螺旋藻大会上，螺旋藻被一致公认为“人类最佳保健食品”，故对螺旋藻培养和驯化的研究很有必要。 在本次实验中如后从复杂的欣园水体中将极大螺旋藻分离出来是本次实验成功的关键所在，如何正确的分离出螺旋藻而不能使螺旋藻藻种受到损害，首先应正确的观察水体中含有的各种生物的成份，再根据不同生物的特性不同，利用化学或物理等方法将其他杂质分离出来或杀死（要考虑到是否会损害极大螺旋藻）。在取样时也要考虑到气温是否合适，在3-4月份的取样中并未发现有极大螺旋藻的存在，等5月气温上升到30摄氏度以后才发现有极大螺旋藻的存在，同时水体中含有大量的壶状臂轮虫和原生动物。由于碳酸氢铵又可以作为营养盐又可以杀死轮虫和原生动物，故选用碳酸氢铵适宜浓度进行分离，待轮虫和原生动物被杀死后，即可放入三角瓶中加入已配好的培养液扩大培养。在培养过程中要注意经常摇动三角瓶，同时要注意外界污染。 最后在极大螺旋藻的驯化过程中，氯化钠浓度逐级过渡到高浓度时，要注意每次浓度的提升培养一段时间后，要在显微镜下挑选正常螺旋藻的丝状体接种于下一级氯化钠培养液中。防止藻种的污染。 结 论 螺旋藻是目前常用微藻(小球藻、绿藻、螺旋藻)中蛋白质含量最高、营养最全面、消化吸收及适口性最好、无毒无副作用(包括藻体和培养基)、安全性最高的藻种，它的蛋白质含量是小球藻的1.5倍。同时具有多种生物活性物质，是一切动物的良好医疗保健品。正是由于它的出色之处而被人们广泛重视，我国在极大螺旋藻的研究方面也投入了大量的精力。故本课题在研究连云港地区极大螺旋藻的分离和驯化，对我们了解本地螺旋藻的特征很有帮助。在本次实验的采样中，我发现在我校欣园水体中含有大量的极大螺旋藻活体，同时也含有不少的原生动物和轮虫，为此本次实验的成功关键在于：如何从复杂的水体里将极大螺旋藻分离出来，由于螺旋藻本身的生物习性喜高温高碱，而轮虫和原生动物对碳酸氢铵敏感，浓度在0.15-0.25mg/ml时即可致死。根据这样的特性的差异，我选择投入碳酸氢铵杀死轮虫和匀生动物。要想杀虫效果更好，7d后可再施碳酸氢铵1次。使用上述方法0.5-ld后，轮虫可全部杀灭，而藻体生长几乎不受任何影响。提存后接种培养时应注意三角瓶的消毒灭菌，瓶口应盖好消毒的棉球或牛皮纸，以防止在放大培养中染菌。在培养后期会得看到藻种呈蓝绿色，镜下会看到很多螺旋状的藻体，证明极大螺旋藻发育良好。配制淡水培养基需要较多的营养成分，因此增加了成本。而海水中营养较丰富，用海水配制培养基可少用或减去一些营养盐。这样既降低成本，又能保证质量。所以极大螺旋藻的海水驯化对螺旋藻的养殖业至关重要。驯化中在每升一级氯化钠浓度后，都会引起不少的藻种的蜕变死亡，这时应注意不能直接将上次放大的藻种直接放入下次的培养液中继续培养，应选择出正常的螺旋藻丝状体接种到下一级别，这也是驯化能否成功的关键。在经过上述一系列步骤后，最终得到了能在含盐量达30的海水中生长的极大螺旋藻藻种。致 谢本实验在指导老师吴建新的帮助下完成，吴老师在本论文的选题直至成稿过程中提出了许多宝贵的意见，对实验工作给予了大力支持，并为实验的顺利进行创造了良好的实验环境。在此，向吴老师表示衷心的感谢。在实验的进行中，还得到了李信书,罗刚等老师的大力支持和鼎力相助，表示感谢。在实验数据处理中，得到薛永刚老师的指导与帮助，在此一并表示感谢。在此，对在本次实验前后，提供帮助的任心洁,朱晓建等同学表示感谢。参 考 文 献1张以芳，杨志雷.螺旋藻的研究和开发进展J.海洋科学，1998,( 5) :68-70.2沈银武.螺旋藻大规模生产中轮虫的发生与防治技术初探J.螺旋藻产业，1996 ,(2) :7-9.3董育红，张振兰，封涛.螺旋藻培养基中碳、氮、磷最佳配比及效应J.西北农业学报，2001 ,10 (1) :75-78.4张加春，张灼，阮东义，等.云南程海螺旋藻养殖中细菌研究J.云南大学学报(自然科学版),2000 ,22(6) :465-467.5胡鸿钧，郑怡，陈启发等.螺旋藻养殖原理技术应用6韦成礼，李永建，计玲华等.国内外螺旋藻的研究和开发利用.广西农业大学学报。1994 （13，4）：3583647何连金。螺旋藻的培养方法和应用效果的初步探讨。福建水产。1988（2）：16238李志勇，郭祀远，李琳，等功能性螺旋藻保健的研制与开发J粮食与饲料工业，1997(10) :37 -399石清东螺旋藻的有效成分及其营养保健价值J中国野生植物资源11996(3):14-1610张以芳，刘旭川螺旋藻的营养价值及药用特性月云南农业大学学报12000,15(l):85-8711马贵武螺旋藻营养液的成分与保健功效分析J水产学报,1997,21(1) :108-11112汪志平，钱凯先螺旋藻遗传育种研究进展J微生物学通报,2000 ,27(4) :288-291 .13异开国，李祖秋，磨传真，等沼气池废液培养螺旋藻的研究及评估J水生生物学报,1995 ,19( 3) :283 - 28614王翠红，辛晓云，李日强等钝顶螺旋藻的培养及其生物学特性的研究J山西大学学报(自然科学版),2000 ,23(1):67-7015陈必链，施巧琴螺旋藻藻种选育研究进展月食品与发酵工业，2000,26(3):78- 8116王向阳螺旋藻荧光探针的研究C中国螺旋藻研讨会论文，1996 :27 - 5517陈峰，姜悦微藻生物技术M北京:中国轻工业出版社，199918周爱堂.钝顶螺旋藻( Spixulina platensis Geitlex)在水产养殖中应用的初步研究.淡水渔业，1987;(2) :519何连金.螺旋藻的培养方法和应用效果的初步探讨.福建水产，1988;(2) :1620张志恒.用螺旋藻饲喂对虾糠虾幼体的实验.水产科技情报11989;16(6):16921戴荣衰.螺旋藻喂鸡技术及其营养机制研究.中国技术成果大全，1992;(l):30722张景襄，曾昭琪.螺旋藻工厂化培养生产及食品添加剂的制作.中国技术成果大全，1989;(4) :3723何实银，曾昭琪螺旋藻工厂化试生产中国技术成果大全，1990;(5) :10124江西省农科院耕作栽培研究所.螺旋藻大规模生产及其产品锌、铁等微量元素强化处理技术.中国技术成果大全，1987-1988;(17) :10125潘言明，郑世清.螺旋藻的生产与应用技术研究.中国技术成果大全，1990;(20) :11126商树田，李维炯.盐碱水培养螺旋藻试验初报.北京农业大学学报.1989 :15( 4) :40327Garr，N. G，the Biology of Cyanobacteria，Blackwell ScientificPublications London ,1 982 :263一30528Grossman Shlomo. Eur .Pat . Appl . EP269 ,54529H. Durand Chastel，Algae Biomass，1