实验室的标准操作规程SOPPPT课件

1 实验室的标准操作规程 SOP 水产品和畜 禽肉中氯霉素残留量检验方法气相色谱法 质谱检测法1方法提要根据方法进行验证修改后 并依据欧盟指令建立了质谱测定条件 将某些关键步骤进行细化 本方法适用于水产品和畜 禽肉组织 肠衣中氯霉素残留确证检测 用乙酸乙酯提取 提取液用正己烷净化 硅烷化后用气相色谱配有负化学源的5973N质谱检测器检测 2 实验室的标准操作规程 SOP 气相色谱法 质谱检测法检测氯霉素 2实验室设备2 1仪器和设备2 1 1Agilent6890气相色谱仪 配有负化学源的5973N质谱检测器 2 1 2离心机 5810型 Eppendorf公司 2 1 3均质器 T25型 18G刀 IKA公司2 1 4旋转蒸发器 R 200 BUCHI公司 2 1 5移液枪 200 L 1000 L 5000 L Eppendorf公司 2 1 6具塞塑料离心管 15mL 50ML 2 1 7涡流混匀器 39760型 Thermolyne公司 3 实验室的标准操作规程 SOP 气相色谱法 质谱检测法检测氯霉素 2 2试剂所有试剂均为分析纯级 有机试剂需重蒸馏 水为去离子水 2 2 1乙酸乙酯 2 2 2甲醇 2 2 3正己烷 2 2 4氯化钠 2 2 5无水硫酸钠 经650 灼烧4h 置于干燥器内备用 2 2 6硅烷化试剂 SylonBFT 99 N O 双 三甲基硅烷 三氟乙酰胺 BSTFA 1 三甲基氯硅烷 TMCS 美国Supelco产品 货号33154 u 0 1mL ampul 4 实验室的标准操作规程 SOP 气相色谱法 质谱检测法检测氯霉素 2 3标准物质2 3 1氯霉素 chloramphenicol 纯度 99 Amresco分装 上海生工生物工程有限公司和Sigma公司 2 4标准溶液的配制2 4 1标准储备液的配制准确称取氯霉素标样50mg置50ml棕色容量瓶中 用甲醇溶解 并定容至刻度 混匀 浓度为1mg mL 4 保存6个月 2 4 2标准工作溶液配制 取1mL储备液用甲醇溶解定容到100Ml 此时浓度为1 g mL 取1 g mL1mL定容至10mL 浓度为0 1 g mL 取1 g mL0 5mL定容至10mL 浓度为0 05 g mL 5 实验室的标准操作规程 SOP 气相色谱法 质谱检测法检测氯霉素 3实验方法3 1试样制备从所取原始样品中取出部分有代表性样品 经充分混匀 用四分法缩分出不少于500g试样 混匀 均分成两份 装入清洁容器内 加封后 表明标记 3 2测定步骤3 2 1提取与净化称取5g 精确至0 01g 试样于50mL离心管中 加入25mL乙酸乙酯 用均质器均质提取2min 4000r min离心3min 将乙酸乙酯层移入50mL鸡心瓶中 试样再加入5mL乙酸乙酯 涡流混匀器混匀1min 合并乙酸乙酯提取液 于40 旋转蒸发至近干 加入1mL甲醇溶解残渣 再加入20mL4 氯化钠溶液和15mL正己烷 用涡流混匀器混合1min 4000r min离心3min 弃去正己烷层 水层加15mL正己烷 同上操作 弃去正己烷层 水层中加入15mL乙酸乙酯 用涡流混匀器混合2min 3000r min离心3min 吸取乙酸乙酯层 通过无水硫酸钠柱 5g 脱水于另一个50mL鸡心瓶中 用少量乙酸乙酯淋洗无水硫酸钠柱 于40 旋转蒸发至约1mL 6 实验室的标准操作规程 SOP 气相色谱法 质谱检测法检测氯霉素 3 2 2衍生化将浓缩液移入5mL离心管中 用1mL乙酸乙酯洗涤鸡心瓶 合并乙酸乙酯 于40 吹氮气蒸发至干 加入100 L正己烷和100 L硅烷化试剂 于70 烘箱中加热30min 吹氮气蒸发至干 加入0 50mL正己烷与环己烷混合液 6 4 混匀溶解 供气相色谱测定 3 2 3测定3 2 3 1气相色谱条件a 色谱柱 30m 0 25mm 0 25 m HP 5MS c PTV进样口温度 70 1 0min 700 min250 6 0min 700 min300 d 载气 氦气 恒压模式 柱头压10psi e 进样量 2uL 7 实验室的标准操作规程 SOP 气相色谱法 质谱检测法检测氯霉素 3 2 3 2质谱条件a 传输线温度 280 Cb 溶剂延迟 5minc 离子源温度 150 Cd 四极杆温度 100 Ce 反应气 甲烷 流量 2ml minf 选择离子监测目标物监测离子氯霉素466 468 470 376其中定量离子为466 定性离子为468 470 376g 离子停留时间 60毫秒 8 实验室的标准操作规程 SOP 气相色谱法 质谱检测法检测氯霉素 3 2 3 3标准溶液的衍生化取适量标准溶液 用氮气吹干 加入200 L正己烷和100 L硅烷化试剂 于80 烘箱中加热30min 吹氮气蒸发至干 加入0 50mL正己烷与环己烷混合液 6 4 混匀溶解 供气相色谱 质谱测定 在上述色谱条件下 氯霉素保留时间为11 65min 3 2 3 4样品测定分别注射等体积的标准工作液 试剂空白 阴性控制样品 待检样品 不超过10个 阴性控制和阳性控制样品 按上述色谱条件测定 峰面积定量 4 气相色谱 质谱定性 1 保留时间定性 在上述条件下 目标化合物的保留时间为11 65 0 1min 9 实验室的标准操作规程 SOP 气相色谱法 质谱检测法检测氯霉素 2 质谱确证在保留时间窗口内出现色谱峰后 获取其质谱图 扣除本底后如果以下判别标准全部符合 则可判定氯霉素存在 所有4个监测离子全部在质谱图中出现离子466为基峰和定量离子 其它3个离子与基峰丰度之比应符合如下标准质荷比标准丰度比 允许相对偏离范围 46876 2047018 3037620 25 10 实验室的标准操作规程 SOP 气相色谱法 质谱检测法检测氯霉素 5 质量控制每组实验除标准 样品 需同时进行溶剂空白实验 阴性控制样品实验和阳性控制样品实验 5 1溶剂空白不加试样 用与样品相同的方法进行处理 5 2阴性控制样品称取5 0克阴性控制样品 置于50mL离心管中 用与样品相同的方法进行处理 5 3阳性控制样品称取5 0克阴性控制样品 置于50mL离心管中 用微量注射器加入0 1 g mL的氯霉素标准工作液25 L 相当于样品浓度0 5ng g用与样品相同的方法进行处理 用相同浓度的标准进行定量 计算回收率 用来判断本组操作的可靠性 11 实验室的标准操作规程 SOP 气相色谱法 质谱检测法检测氯霉素 6结果计算6 1外标法定量用色谱数据处理机或按下列公式计算 式中 X 试样中氯霉素药物残留含量 mg kg A 样液中硅烷化氯霉素色谱峰面积 AS 标准工作溶液中硅烷化氯霉素色谱峰面积 c 标准工作溶液中氯霉素的浓度 g mL V 最终样液的定容体积 mL m 最终样液所代表试样量 g 计算结果需扣除空白值 12 实验室的标准操作规程 SOP 气相色谱法 质谱检测法检测氯霉素 7测定低限本方法氯霉素的测定低限为0 2 g kg 8可接受的检验结果在添加浓度0 5 g kg时 回收率 50 120 9检测报告按照SPSBA00024检验报告管理程序执行 10方法验证10 1取相当于1 g g的氯霉素衍生化物 在200 600M z范围 进行全扫描分析 确定定量离了和确证离子及其丰度比 见附录1 13 实验室的标准操作规程 SOP 气相色谱法 质谱检测法检测氯霉素 10 2标准工作曲线用注射器分别移取0 05 g mL 20 L 30 L 60 L 0 1 g mL 50 L 1 g mL 25 L 标准工作液置于6个5ML离心管中 氮气吹干 其系列分别相当于样品中0 2 0 3 0 4 1 5ng g的浓度 分别注射等体积的标准工作液按给定的色谱条件进行测定 用GC NCI MS测定 记录峰面积