干细胞的标记

干细胞的标记 摘要 干细胞是一类具有多向分化潜能的特殊细胞 伴随着对其研究的深入 干细胞的临床应用前景也越来越广阔 但干细胞移植后 如何从宿主辨别移植细胞 并观察其在体内的生存和转归情况 一直是让人困扰的问题 采用有效的技术来标记和示踪干细胞移植治疗的效果将对其在动物实验研究和l临床应用上起到促进作用 本实验通过对注入小鼠体内由SPIO标记的干细胞磁共振成像的研究进展了以综述 关键词 干细胞 细胞示踪 磁共振成像 1 SPI 特异性靶向作用所谓磁标记探针是指将顺磁性粒子以某种方因结合转入细胞内 由顺磁性物质在细胞内的蓄积与所连接的物质数量成正比 因此 顺磁性物质引起的MR信号分布代表了受体 抗体或基因的分布 而通过顺磁性标记的配体 在受体介导下 产生特异性浓集 达到选择性强化进成像的目的 因此SPIO特异性靶分子或靶细胞结合的关键技术就是SPIO表面预处理 与特异性单克隆抗体或受体结合后标记某种靶细胞 带正电荷的转染剂 transfectionagent TA 如多聚赖氨酸 PI I 硫酸鱼精蛋白 繁脂质体等转染剂直接或间接连接在SPIO包衣上 使其能够对某一靶物质具有特异性靶向的 并能够进行体内或 和体外示踪 对SPIO表面处理不仅可增强其对靶物质的亲和力 还有助于SPl0进入细胞内 对其进行特异性标记或示踪 标记干细胞及示踪 采用氧化铁颗粒标记干细胞在神经系统中应用最早 对干细胞进行广泛的磁共振 MRI 活体示踪研究 用于辨别干细胞移植后在受体中的迁徙 增殖情况 以解决由于常规MRI不能区别移植干细胞和受体细胞的问题 8 Frank等 91用单纯SPIO颗粒和SPIO与转染剂结合后标记干细胞结果表面 单纯SPIO标记效率低且浓度高 同时增加了其毒性 为增加标记的效能 Zhu等 3在场强4 7T的MR扫描仪上研究体内外PI I 一SPIO标记的神经干细胞 结果显示PI I 一SPIO标记率为i00 且在TzWl和T WI低信号持续7天 证明了此方法标记神经干细胞的有效性 Daldruplink等 1 用脂质体包裹表面带负电荷的P7228 以阴离子右旋糖苷衍生物包被的USPIOs 标记造血干细胞注射入正常鼠体内后14 24和48h 1 5TMR观察到肝脏和脾脏有明显的信号减低 骨髓则在24和48h后见信号减低 HoehnLl纠用转染剂包裹SPIO标记了小鼠胚胎神经干细胞 并且动态的观察到了移植后的磁性标记细胞在脑内迁徙的过程 因此SPIO在于细胞标记及示踪方面以显示出其独特的优势 实验流程1 我们先称取了10mg的鱼精蛋白溶于10ml的蒸馏水中 2 用枪吸取0 3ml的SPIO溶于20ml的无血清的培养基中 3 取1中已配制的溶液100ul加入2中溶液中 使硫酸鱼精蛋白浓度为5ug ml 4 往3中的溶液加入等体积的双倍血清培养基 使最终SPIO的浓度为50ugFe ml 即所需溶液 干细胞买来之后用我们预先配制好的混合液给细胞换液 孵育过夜 接下第二天 观察磁珠标记的情况 并拍照 大多数细胞均被标记 为了得到更高的标记效率 第三天我们又进行了富集纯化 富集过程如下 1 用胰酶消化细胞 加入3ml的培养基 并将细胞转移到15ml的玻璃离心管中 15000rpm离心5min 弃上清 2 加入新的培养基打匀细胞 用强力磁石富集 弃上清 重复2次 3 加入2 5m