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文档简介

技术路线 双光子激光建立斑马鱼脊髓损伤模型的探索 明场下对脊髓定位 利用双光子强激光对脊髓进行深度扫描切割损伤 12小时后做纵切切片 利用生物胞素抗体做免疫染色 判断损伤的位置与大小是否与符合 前期实验 手术建模 手术组 n 68 假手术组 n 68 建模成功性分析 每周分析术后运动能力 连续跟踪7周 基因芯片分析 提总RNA分析全部基因的表达水平 统计分析各个基因表达变化 定量PCR 提总RNA反转录检测sema4e和plxnd1相对内参GADPH表达水平的变化 原位杂交 制作切片制作探针检测sema4e和plxnd1mRNA的表达水平变化及表达细胞 WestenBolt 提总蛋白检测sema4e和plxnd1蛋白表达水平的变化 取脊髓 损伤位点以下1cm 术后4hour 12hour 6day 11day组 sema4e与plxnd1关系研究 sema4e活性片段DNA的扩增 sema4e特异性肽段的设计与合成 sema4e表达载体的构建 表达载体的导入 转染细胞的筛选与培养 表达蛋白的提取 表达蛋白的活性检测 sema4e免疫磁珠的制作 sema4e与plxnd1免疫共沉淀 噬菌体展示技术淘选抗体 ELISA检测抗体活性 ELISA检测抗体专一性 sema4e与plxnd1免疫共定位 sema4e与plxnd1在斑马鱼脊髓损伤修复中的作用研究 前期结果 Beforelesion Red shamoperation n 10 Blue operation n 10 图1 斑马鱼脊髓损伤后的运动能力的变化 RealtimePCR timepoints changefolds 10X 10X 10X 10X 10X anti senseprobessham4hour12hour11day 10X 10X 10X anti senseprobessham4hour12hour11day sema4e plxnd1 10X 10X 通过双光子显微镜活体观察斑马鱼脊髓内的血管 plxnd1在血管内皮细胞上表达 10X
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