安捷伦液相色谱仪

高效液相使用方法 太原市医达维科医药科技开发有限公司 使用方法 进样前准备 开机 仪器参数设定 打印数据报告 数据分析告 HPLC使用方法 关机 开机 打开电脑打开液相各模板电源 等待仪器自检 双击仪器一联机脱气 旋开冲气阀 设计流速 仪器参数设定 开始编辑完整方法泵参数设定自动进样器设定柱温箱 检测器设定 素据分析 双击仪器一脱机选择调用数据积分打印报告 关机 关机前 先关灯退出工作站 依次关其它模块电源关闭计算机 关于高效液相操作的相关知识 流动相1 流动相应选用色谱纯试剂 高纯水或双蒸水 酸碱液及缓冲液需经过滤后使用 过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围 2 水相流动相需经常更换 一般不超过2天 防止长菌变质 3 使用双泵时 A B C D四相中 若所用流动相中有含盐流动相 则A D 进液口位于混合器下方 放置含盐流动相 B C 进液口位于混合器上方 放置不含盐流动相 A B C D四个储液器中其中一个为棕色瓶 用于存放水相流动相 关于高效液相操作的相关知识 色谱柱 1 使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书 注意适用范围 如pH值范围 流动相类型等 2 使用符合要求的流动相 3 使用保护柱 4 如所用流动相为含盐流动相 反相色谱柱使用后 先用水或低浓度甲醇水 如5 甲醇水溶液 再用甲醇冲洗 5 色谱柱在不使用时 应用甲醇冲洗 取下后紧密封闭两端保存 6 不要高压冲洗柱子 7 不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱 关于高效液相操作的相关知识 反相色谱柱的清洗作为普通C18柱 尤其是硅胶基质的普通C18柱 对酸碱盐以及水 都是造成柱子的损坏的流动相构成 水不能过多 除了带AQ的纯水柱 一般各家品牌都有这款防水柱 一般认为只要超过80 的水的流动相 都会造成C18的寿命缩短 所以做高水相的流动相分析时请注意选合适的柱子 酸对柱子的损伤是不可逆的 一定要控制PH 一般认为PH在2以下的都会对柱子造成致命损伤 碱性条件是对于硅胶基质的C18的弱项 一般的硅胶基质的C18碱性条件都不太耐用 但现在也有碱性PH11的柱子 但比较贵 盐对色谱柱的影响主要是盐析造成的 而且是致命 关于高效液相操作的相关知识 冲洗方法根据使用的流动相和样品的不同冲洗方法要加以区分 一般不加酸碱盐 水相也不高的情况 如甲醇水60 40 无需太过冲洗 冲洗的目的就是为了把样品的杂质冲出即可 酸和碱的条件下 原则上是将酸碱冲出色谱柱 保存在甲醇水即可 如60 40比例可根据要使用的流动相 只要水相不高即可 盐的条件比较麻烦 处理不好 不仅仅色谱柱出问题而且仪器也比较麻烦 常用的就是高水相流动相甲醇 水 10 90 将盐冲出 注意压力 然后用纯甲醇冲洗 这一步是恢复高水相对色谱柱的损伤 最后保存在一般的甲醇水体系即可 关于高效液相操作可能出现情况分析 操作过程若发现压力很大 可能柱端过滤器堵塞 柱子塌陷 柱污染 分析生化 染料易污染样品等 操作过程若发现压力很小 则可能管件连接有漏 注意检查 泵压不稳或流量不准 可能为柱塞杆密封圈问题或sealwash垫圈问题 需更换 基线产生不规则噪声 可能原因为系统不稳定或没达到化学平衡及流动相被污染等 色谱峰比预计的小 可能原因为进样体积错误 检测器灯故障 进样问题 瓶号错 进样体积不合适 进样错误 针头堵塞 关于高效液相操作可能出现情况分析 柱效降低可能由于色谱柱老化 以及污染等原因峰发生分裂可能样品有异构体 物质降解 进样量大 色谱柱柱效等 基线有尖峰不规则漂移 色谱柱污染 检测器有气