(三)网织红细胞计数PPT课件

实验三网织红细胞计数 一 实验原理网织红细胞胞浆内残存有嗜碱性的RNA物质 经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后RNA中负电荷基团与带正电荷的有色基团结合 凝聚成颗粒呈浅蓝或蓝黑色的点状 丝状或网状结构 可在显微镜下识别 计数1000个红细胞中所有的网织红细胞数直接报告其百分比 或 红细胞计数结果报告其绝对值 网织红细胞 Ret 是晚幼红细胞脱核后到成熟红细胞间的过渡细胞 是尚未完全成熟的红细胞 其胞浆内残存有嗜碱性的RNA物质 嗜碱性物质与染料凝聚成蓝色颗粒 颗粒与颗粒连缀成线 线连接成网 故而得名 分型 丝球型 网型 破网型 点粒型 型 网织红细胞 计数方法 1 普通光学显微镜法 活体染色后推片镜检2 网织细胞计数仪法 荧光染色后用流式细胞术计数 二 试剂器材 1 试剂10g L煌焦油蓝酒精 水 溶液2 器材毛细血管采血用具 小试管 载玻片 推片 显微镜 香柏油 二甲苯及擦镜纸 Miller窥盘或直径约20mm 较目镜内径稍小 的圆形硬纸片 正中央开一边长为3mm的菱形或正方形小孔 置目镜光阑处 用于缩视野法计数 三 操作步骤 1 染色 于载玻片的一端加煌焦油蓝酒精溶液1滴 任其自然凉干后备用 取末梢血或抗凝血一滴 于已干燥的染料上 用推片角混匀后 将两玻片盖合 玻片法 试管法取染液2滴入试管 加血2滴混匀 封闭好 待15分钟以上时间 2 推片 取混合液1小滴于载玻片的一端 推制成薄而均匀的血膜 3 低倍镜浏览 选取红细胞分布均匀网织红细胞染色较好的部分 体尾交界处 滴香柏油转换至油镜 在Miller窥盘下计数小方格中的RBC数和大方格中的网织红细胞数 或数出整个视野中的RBC总数和其中的网织红细胞数 换一视野同法计数至几个视野RBC总数 1000为止 Miller窥盘 A 3 1 B 将Miller窥盘放在显微镜目镜中 通过窥盘中大小方格间的9比1比例关系计算RBC数和Ret数 四 计算 1 Miller窥盘法 网织红细胞 Retic 百分率 大方格内Retic总数 小方格内RBC总数 9 100 2 直接计数法 网织红细胞 Retic 百分率 多个视野内Retic总数 多个视野内RBC总数 100 五 注意事项 1 用酒精染液时 应待玻璃片上的酒精挥发干燥后 才能加血液 染色时应用推片角不停搅动 使染料和血液混合 防止凝固 2 染色时间一定要充足 混合后不能立即推片 室温低时染色时间应适当延长 应覆以另一玻片防止蒸发 3 染液与血液比例以1 1为宜 贫血适当加血量 4 涂片厚薄均匀适宜 弓形移动 多个区域计数5 试剂应定期重配 以免变质沉淀 6 与变性珠蛋白小体鉴别 六 参考值 成人 0 005 0 015 0 5 1 5 新生儿 0 02 0 06 2 6 儿童 0 005 0 075 0 5 7 5 成人绝对值 24 84 109 L 七 临床意义 1 评价骨髓增生能力 判断贫血类型再障时 明显降低 绝对值低于5 109 L可做为急性再障的辅助诊断指标 失血 多数溶血性贫血患者网织红细胞可明显高于正常 营养不良性贫血在治疗前网织红细胞可保持正常 轻度升高或降低 2 评价疗效网织红细胞反应 IDA或巨幼细胞贫血分别给予铁剂 维生素B12或叶酸治疗2 3d后 网织红细胞计数值开始上升 7 10d达到最高 10 左右 两周以后逐渐降至正常水平 红细胞 血红蛋白开始升高 骨髓移植 EPO治疗后 若骨髓开始恢复造血功能 RMI升高 网织红细胞计数值上升 3 放 化疗监测机体接受放 化疗后 如出现骨髓抑制 早期HFR和MFR降低 然后才检测到网织红细胞的降低 而停止放 化疗 骨髓功能恢复后 又见上述指标依次上升 可指导临床医师适时调整治疗方案 避免造成严重的骨髓抑制 RPI 病人网织红细胞 2 病人HCT 正常人HCT 男0 45 女0 40 临床应用 3提示溶血性贫血或急性失血性贫血 网织红生成指数 Reticulocyteproductionindex RPI 八 思考题 一溶血性贫血患者 红细胞计数2