高中生物专题2动物细胞工程2.4动物细胞融合与单克隆抗体课件新人教版选修3.ppt

2.4动物细胞融合与单克隆抗体,2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体,杂合的原生质体,杂种细胞,愈伤组织,杂种植株,温故知新:,植物体细胞杂交过程,材料1:1970年，有两位科学家做了一个人鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜的流动性。那么，如何实现人鼠细胞的融合，动物细胞融合后还有什么用途呢？,人-鼠(想像图),科幻电影对人-鼠杂交种的想像,合作探究：一、动物细胞融合,如何实现人鼠细胞的融合？阅读教材52页相关内容，思考下列问题：,1、动物细胞融合的概念是什么？2、动植物细胞在结构上有何区别？这对它们杂交或融合过程有什么影响？3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？那动物细胞融合呢？为什么可以使用灭活的病毒促进动物细胞融合？不灭活的病毒能作为诱导剂吗，为什么？,？,？,？,用灭活的病毒诱导动物细胞融合的过程,2.过程：,杂合的细胞,2个完整的杂交细胞AB,5、植物体细胞杂交可得到杂种植株，动物细胞融合后能象电影上一样形成杂种动物个体吗?为什么？,植物细胞A,植物细胞B,原生质体A,原生质体B,原生质体融合,杂合的原生质体,杂种细胞,愈伤组织,杂种植株,4、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？是什么原理？融合的过程一样吗？你能参照植物细胞杂交过程写出动物细胞融合过程吗？,6、动物细胞融合的意义？应用,意义：突破有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能。,应用：1、成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。,2、为制造单克隆抗体开辟了新途径。,鼠鸡、鼠兔、鼠猴、人鼠、人兔、人鸡、人蛙、酵母菌鸡、人胡萝卜等,获得杂种植株,细胞膜的流动性,细胞膜的流动性,结果,诱导方法,融合过程,融合的原理,动物细胞融合,植物体细胞杂交,比较项目,植物、动物细胞融合的比较,获得杂种细胞,小结7,去壁,诱融,生壁,组培,材料1：在基因工程中,采用抗原-抗体杂交法检测基因表达产物需用到纯度很高的抗体。材料2：传统获得抗体的方法：把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体。用这种方法获得的抗体，不仅产量低，而且抗体的特异性差，纯度低，反应不够灵敏。,思考：1、抗体由哪种细胞产生的？2、抗体的传统生产方法的缺陷是什么？3、能否通过相应效应B细胞体外培养的方式大量获得抗体?,不能：原因是在体外培养的条件下效应B细胞不能无限增殖。,合作探究：二、单克隆抗体的制备,材料3：效应B淋巴细胞在体内只能由B淋巴细胞增殖分化而来,不再进行分裂,在体外培养的条件下，也很难分裂。,提示：,1.什么细胞可以产生抗体？2.什么细胞可以无限增殖？,思考：用什么方法才能让B淋巴细胞在体外培养时既能产生抗体又能无限增殖?,B淋巴细胞与癌细胞融合,材料4：每一个效应B细胞只分泌一种特异性抗体材料5：1975年,米尔斯坦和柯勒首先将抗原注射入小鼠体内，然后从小鼠脾脏中获得能够产生抗体的B淋巴细胞，与小鼠骨髓瘤细胞融合，得到多种杂交细胞。在特定的选择性培养基中可筛选出杂交瘤细胞。经过再次筛选和抗体检测,得到能产生特定抗体的杂交瘤细胞。但纯度达不到100%。对单一杂交瘤细胞进行克隆培养,获得足够数量的细胞，在体外培养或注射到小鼠体内增殖。从细胞培养液或小鼠的腹水中，可提取出大量抗体。（由于产生抗体的细胞来自一个杂交瘤细胞,故产生的抗体称为单克隆抗体.）,请根据以上材料,讨论设计单克隆抗体制备过程图.,讨论：,注射抗原,效应B细胞,骨髓瘤细胞,融合,多种杂交瘤细胞,选择性培养基筛选1,抗原-抗体杂交法,克隆化培养,筛选2,效应B细胞,小鼠,注射抗原,骨髓瘤细胞,融合,多种杂交细胞,选择性培养基筛选1,多种杂交瘤细胞,能产生特定抗体的杂交瘤细胞,筛选2,克隆化培养抗体检测,体外培养,小鼠腹腔内增殖,单克隆抗体,杂交瘤细胞特点：既可以产生特异性抗体，又可以大量增殖,多种杂交细胞,克隆化培养抗体检测,B淋巴细胞,注射特定抗原蛋白,骨髓瘤细胞,培养骨髓瘤细胞,融合,多种杂交细胞,单克隆抗体的制备过程,思考以下问题：1、如何获得效应B细胞？融合细胞几种类型？2、本过程中进行了两次筛选，目的分别是什么？第1次筛选要淘汰哪些细胞？3、本过程利用的那些技术？4、杂交瘤细胞有何特点？5、如何培养杂交瘤细胞并提取单克隆抗体？,（6）拓展阅读：如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化养？融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞，但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔不超过一个细胞，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那么上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行34次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。,专一抗体检验阳性,2、原理：,细胞膜的流动性、细胞增殖,1.技术,动物细胞融合、动物细胞培养,4.杂交瘤细胞的特点,既可以产生特异性抗体，又可以大量增殖,3.两次筛选的目的,第一次选出杂交瘤细胞，第二次选出产生所需特异性抗体的杂交瘤细胞,小结：,单克隆抗体的应用信息,材料6：,诊断疾病（识别作用，如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等）优点：,单克隆抗体的应用,用于治疗疾病和运载药物（主要用于癌症治疗，如单克隆抗体+药物=“生物导弹”）优点：,准确、高效、简易、快速,位置准确、疗效高、副作用小,阅读教材P54相关内容，试说明单克隆抗体有何应用？优点是什么？,1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.经过免疫的B淋巴细胞B.没经过免疫的T淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞D.没经过免疫的淋巴细胞,A,巩固练习,2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）诱导融合的方法完全相同B.所用的技术手段基本相同C.操作步骤基本相同D.都能形成杂种细胞,D,3.单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是（）A.由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成C.由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成D.由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成,D,4.只能使动物细胞融合的常用诱导方法是（）APEGB灭活的病毒C电刺激D离心,B,5.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特