QTRAP用户会之二MRM定量PPT课件

MRM3定量:,三级四极杆传统定量方法是MRM典型的是单位质量分辨(0.7amuFWHH)(通常特异性足够)不幸的是，仍然会有干扰如果能早期发现，还能修改方法，如果已经确认，将花费大量的时间和资源克服这个问题,MRM3,在定量上增加选择性消除干扰;建立置信度!区别于3D离子阱的MS3,专用在定量方面,故称为MRM3,如何解决干扰问题,分辨率与灵敏度关系图解,70-75%Loss,0.06amuFWHH,FinniganpromotesHi-ResQuantitationat0.2FWHH,使用4000QTRAP进行定量分析，单位分辨率时MS3的特异性，相当于MS2FWHH=0.03,分辨率/传输率,MS2的前体离子选择的分辨率达到FWHH0.03amu时，灵敏度损失超过90%,干扰概率:MS,MS/MSandMS3vs.Resolution,100%,0.25%,0.03amu,要得到与单位分辨率时MS3相同水平的定量分析特异选择性，MS2的前体离子选择的分辨率需达到FWHH0.03amu,MS3实验:Q1分析Q2裂解LIT分离/裂解/贮存/扫描特异的定量通路消除干扰比提高Q1分辨率更通用,定量由,MRM3定量:,实验条件:3种化合物有相同的整数质量和碎片离子在快速色谱条件下可分析,流动相:A)95:5H2O:ACN5mMNH4OAc0.1%FormicB)95:5ACN:H2O5mMNH4OAc0.1%FormicGradientelutionover7minutes色谱柱:LunaC18(2)5(2.1x50mm)流速：350L/min,MRMon4000QTRAP(OptimalCE)Pamaquin(10pg)inpresenceofOxycodone(50ng)andClonazepam(2.5ng),MRMon4000QTRAP(CE45eV)Pamaquin(100pg)inpresenceofOxycodone(50ng)andClonazepam(2.5ng),MS3316/243/187,Summedionsof187and174,MRM3onthe4000QTRAPPamaquin(5pg)inpresenceofOxycodone(50ng)andClonazepam(2.5ng),MS3316/243/241,Summedionsof187and174,MS3316/243/187,MRM3onthe4000QTRAPPamaquin(10pg)inpresenceofOxycodone(50ng)andClonazepam(2.5ng),为什么复合型四极杆-线性离子阱是不同的?,第一级裂解是在单位分辨率下完成第一级裂解碎片丰富(碰撞室)第一级裂解快速(不需要分离时间)第二级裂解高效率(70-80%)第二级裂解有单位分辨率特性(单频率)MS3循环时间能在200-300msec完成(包括充满，分离，激发和扫描),MRM3定量:,通常定量可以做如下一项或多项:选择3种不同子离子每种离子对分配3种不同CE色谱Q1和Q3分辨率但是,MRM3定量能消除上述4点考虑!如果你什么干扰都不知道的话。MRM3将给你特异性和置信度。,MRM3Experiments:,MS3ofAlprazolam(309/281/205)4000amu/secCycletime=176msecLOQ=1.25pgoncolumn,实例：使用MRM模式定量分析AlprazolamMRM309/205500fgMS3309/281/2051.25pg可见，灵敏度只降低2.5倍，却可达到FWHH=0.03时的定量特异性，定量不确定性只有0.25%,使用4000QTRAP的MRM3进行定量，其单位分辨率的选择特异性，相当于FWHH=0.03amu（MS2），干扰概率只有0.25%，而其灵敏度相对于MS/MS定量,只降低2.5倍,MRM3QuantitationusingtheQTRAP5500system,10g/kginMatrix(MRM3:%CV5,accuracy90-110%),S/N=922,S/N=8,S/N=497,S/N=147,331/99/71,matrixinterference,MRM,331/127,MRM,331/99,MRM3,331/127/99,331/99/71,matrixinterference,MRM3,Calcitriolwith18min2-DChromatography,MRM,API5000systemStandardMRM2DChromatography,CalcitriolMRMvsMRM3,实例-克伦特罗,ClenbuterolanalysisfromUrinesampleCalibrationcurvespreparedfrompooledmatrixSubject1to18pooledtopreparestandardcalibrationcurveThismimicsapproachusedintypicalbioanalysisTotalof34subjectsamples(includingthe18pooledtogetherforcalibrationcurve)wereanalyzedasindividualsamplesat3levelsofclenbuterol0pg/uLofclenbuterol(unspikedblank)0.5pg/uLofclenbuterol(apporximate)Previoussamplediluted2fold(0.25pg/uL)AllSu