KRAS和EGFR检测与临床应用

.,KRAS和EGFR检测与临床应用,.,汇报内容,KRAS和EGFR的简介及临床意义ARMS-PCR的基本原理和技术特点等位特异性引物设计KRAS试剂盒开发简介,.,KRAS和EGFR的简介及临床意义,.,KRAS背景,KRAS是一种原癌基因，长约35kb，位于12号染色体，是RAS基因家族成员之一，编码的蛋白主要参与PI3K、PTEN、AKT和RAF、MEK、ERK信号通路的调控；EGFR在通路中位于KRAS上游，配体与之结合后可以激发其酪氨酸激酶活性，导致KRAS的活化和通路中信号传导；KRAS是许多恶性肿瘤的常见突变基因：胰腺癌（65%-90%）、结直肠癌（40%）、肺癌（20%）、卵巢癌（15%）。,.,KRAS基因突变影响结直肠癌药物疗效,KRAS基因野生型的转移性结直肠癌患者能从EGF抗体（西妥昔单抗、帕尼单抗）治疗中获益，而基因突变的患者治疗效果很差；,KRAS突变型患者对西妥昔单抗无应答，其总体生存期明显低于KRAS野生型患者,KarapetisCS,2008,NEngJMed,.,结直肠癌患者检测KRAS突变相关指南,欧洲药品评估局（EMEA，2008）指出：KRAS野生型的进展期结直肠癌患者可能从帕尼单抗中受益，而突变型患者受益较少。美国临床肿瘤学会（ASCO，2009）推荐：转移性结直肠癌患者应检测KRAS突变，如有KRAS12、13位突变，则不应进行EGFR单克隆抗体治疗；美国FDA指南推荐：在使用靶向药物西妥昔单抗和帕尼单抗治疗转移性结肠直肠癌前必须检测KRAS基因的基因型；2012年7月6日批准第一个用于结直肠癌的基因检测（Qiagen），以判断西妥昔单抗是否有效；美国国立综合癌症网络（NCCN，2014）指南说：转移性结直肠癌患者均应进行RAS突变检测（KRAS和NRAS），至少应检测KRAS第二外显子的突变情况。KRAS或NRAS突变型的病人不应采取西妥昔单抗或帕尼单抗治疗。中国卫生部于2010年10月14日发表了结直肠癌诊疗规范（2010版）。明确指出在患者确定为复发或转移性结直肠癌接受西妥昔单抗、帕尼单抗时，必须检测肿瘤组织的K-ras基因状态。在晚期/转移性结直肠癌化疗中，在治疗前检测肿瘤K-ras基因状态，EGFR不推荐作为常规检查项目。,.,KRAS基因突变影响非小细胞肺癌药物疗效,KRAS基因野生型的非小细胞肺癌患者能从小分子酪氨酸激酶抑制剂（TKI，如吉非替尼、厄洛替尼）治疗中获益，而基因突变的患者易发生抵抗；,KRAS突变型患者使用厄洛替尼联合化疗后，其无症状生存期和总生存期明显低于野生型患者（图中红线所示）,AndersonSM,2011,ExpertRev.Mol.DiagnEberhardDA,2005,JClinOncol,.,非小细胞肺癌患者检测KRAS突变相关指南,美国国立综合癌症网络（NCCN，2009）指出，KRAS突变与非小细胞肺癌患者TKI抵抗有关，KRAS基因测序有助于确定哪些病人适合TKI治疗。当KRAS基因发生了突变，则不建议病人使用厄洛替尼进行分子靶向治疗。,.,KRAS主要突变位点,在结直肠癌中，KRAS突变主要发生于codon12(80%)、codon13(15-20%)、codon61和146(10，该样本结果判断为野生型；参照引物管扩增曲线阳性，相应ARMS引物管扩增曲线阳性，且其与参照引物管的扩增曲线Ct差值7，该样本结