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文档简介

.,动物细胞工程2.2.2.动物细胞融合与单克隆抗体,.,一、动物细胞融合：,2、原理：,细胞膜具有一定的流动性,1、概念：选修3P.52,动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。,.,物理法：,化学法：,生物法：,灭活的病毒（特有的方法）,3、过程：,（与植物细胞融合的基本原理相同）,离心、电激、振动,聚乙二醇,.,细胞完成融合的标志：,细胞核融合为一个核,融合后形成具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，成为杂交细胞,意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能,.,5、动物细胞融合的应用：,成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段制备单克隆抗体（重要应用）,.,主要用于制备,单克隆抗体,获得杂种植株,用途,物理、化学方法,（同左）,生物：灭活的病毒,物理（离心、振动、电刺激）,化学（聚乙二醇）,诱导方法,用胰蛋白酶处理使细胞分散后诱导细胞融合,酶解法去除细胞壁后诱导原生质体融合,细胞融合的方法,细胞膜的流动性,细胞膜的流动性、,植物细胞全能性,原理,动物细胞融合,植物体细胞杂交,比较项目,植物、动物细胞融合的比较,.,二、单克隆抗体：,其由何种细胞产生？主要分布在哪里？如何得到抗体？,关于抗体,.,抗原,动物体内,抗体,刺激,效应B细胞,不仅产量低、纯度低而且制备的抗体特异性差，灵敏度低,抗原不纯,抗体不纯,筛选单一的效应B细胞,（但不能在体外大量增殖产生大量的抗体）,抗原,动物体内,抗体,刺激,效应B细胞,.,B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的原因,1、每一个B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体，不同种类的B淋巴细胞分泌的抗体不同2、B淋巴细胞在体外培养时不能无限增值，骨髓瘤细胞能够无限增值,.,制备单克隆抗体,1、原理：B淋巴细胞能产生抗体，骨髓瘤细胞能无限增殖，杂交瘤细胞具有两个亲本的特性，即能迅速大量增殖，又能产生足够数量的单一抗体。,.,2、单克隆抗体的制备过程：,获得杂交瘤细胞,动物细胞培养,提取单克隆抗体,将抗原注入小鼠体内获得效应B淋巴细胞,效应B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,用特定培养基筛选出杂交瘤细胞,筛选能够产生所需抗体的细胞群,再在培养液或小鼠腹腔中培养,从培养液或小鼠腹水中提取,.,细胞融合后培养液中有几种细胞,B细胞、骨髓瘤细胞,B与B融合、瘤瘤融合,B细胞与骨髓瘤细胞融合,5种,.,在整个制备的过程中要经过几次筛选？,筛选得到杂交瘤细胞，筛选先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞下培养筛选出特异抗体的细胞群,.,3、单克隆制备过程中用到的生物技术手段,动物细胞融合动物细胞培养,.,4、单克隆抗体的应用:,应用:疾病的诊断、治疗和预防。优点:特异性强、灵敏度高，产量大实例:各种癌症、肝炎病毒、SARS病毒、细菌及血吸虫等数百种疾病的诊断；在疾病治疗方面，单克隆抗体犹如人体卫士,能识别“自己”与“异己”，一旦发现致病因
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