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1/7如何写医学开题报告模板一、立题依据恶性黑色素瘤是一种高度恶性且最具侵袭性的癌之一，多发生于皮肤，早期发生血行转移。对放、化疗不敏感，在世界范围内发病率增高，人们一直在期待着可以征服恶性黑素瘤的新的疗法的出现最近大量的数据表明恶性肿瘤的发展与T钙粘蛋白的表达变化相关T钙粘蛋白已在乳腺癌、前列腺癌、肝癌、肺癌13、胃癌、胰腺癌、卵巢癌49等多种恶性肿瘤中被检测到表达减少最近的研究表明T/H钙粘蛋白在乳腺癌中的重新表达能抑制肿瘤细胞的生长,降低体外培养的肿瘤细胞的侵袭潜能1T/H钙粘蛋白这个新型钙粘蛋白分子在人类许多癌细胞中表达都降低表明它或许在肿瘤细胞的侵袭和转移10及维持正常细胞的表型中起重要作用11T/H钙粘蛋白与肿瘤的发生、发展有着密切的联系,也许它会为肿瘤的诊断和治疗带来新的契机2/7T钙粘蛋白是否对恶性黑色素瘤也有作用，目前还没有相关研究的报道，所以本实验将进行相关方面的探讨性研究二、研究内容及预期成果研究内容第一部分正常表皮组织、痣细胞及黑色素瘤细胞中TCADHERIN表达情况第二部分TCADHERIN基因克隆和真核表达载体的构建第三部分TCADHERIN基因的真核表达及生物活性分析创新点首次将TCADHERIN基因转染黑素瘤细胞拟解决的关键问题通过RTPCR反应扩增出TCADHERIN的基因全长。3/7预期成果及提供形式观察T钙粘蛋白在正常皮肤组织细胞、痣细胞及黑色素瘤细胞中的表达情况进一步阐明T钙粘蛋白作用机制T钙粘蛋白基因转染入黑色素瘤细胞后观察对其增殖和转移活性的抑制情况，探索临床诊断和治疗黑色素瘤及其它肿瘤的方法三、研究方案研究方法第一部分正常表皮组织、痣细胞及黑色素瘤细胞中TCADHERIN表达情况免疫组织化学和免疫细胞化学1材料从正常人皮肤切取的痣组织，人黑色素瘤细胞株4/72主要试剂和溶液第一抗体兔抗人TCADHERIN抗体第二抗体生物素标记羊抗兔IGG“三抗”链亲和霉素标记HRP3设备4方法冷冻切片的免疫染色程序活细胞的免疫染色程序5荧光显微镜检注意为保证结果的可靠性应该同时设有对照阳性对照5/7阴性对照以证明抗体的特异性。第二部分TCADHERIN基因克隆和真核表达载体的构建1材料组织和细胞菌株与质粒工具酶试剂仪器2方法引物的设计6/7总RNA的提取异硫氰酸胍酚氯仿抽提一步法甲醛变性琼脂糖凝胶电泳分析其质量，观察所提RNA有无明显降解逆转录RT反应为了证实RT反应的成功设管家基因GAPDH为内对照PCR扩增利用上下游引物，在DNA聚合酶下对目的片段进行扩增，PCR过程设ACTIN为内对照PCR产物的回收、纯
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