Coombs操作说明

2008-08-08,新生儿溶血症Coobms试验,Coobms试验,标本要求：婴儿父母，婴儿各1-2ml抗凝血。检测项目：ABO血型，Rh(D)，直抗，放散，游离试验。记费标准：200元。,一实验前准备：,11%标准A，B，O型红细胞悬液（三人以上混合，洗涤一次）。2.1%不完全抗体筛选细胞（O型红细胞）、，0.2M巯基乙醇应用液。3打开37Diana孵育器，56水浴箱，各离心机电源。,二新生儿及其父母血型卡、直抗试验1：,1离心抗凝血标本，取压积红细胞1ul加1ml生盐配成1%红细胞悬液（可不洗涤）。2血型卡上写好姓名，8孔中加入患者1%的红细胞悬液50ul。3不孵育，将卡放到Dianafuge离心机中离心。4观察血型、直抗试验结果。注：IgG：兔多克隆抗-IgGAHG：多克隆抗人球蛋白,二新生儿及其父母血型卡、直抗试验2：,姓名,离心,观察血型、直抗试验结果,患者1%的红悬50ul,三放散试验1：,1取新生儿压积红细胞200ul洗涤三次。2加200ul生盐混匀在56水浴箱10分钟（中间轻轻振荡几次），2500转/分离心3分钟。3Coombs卡上做好标记，取上述上清液50ul加到Coombs卡孔上。,三放散试验2：,4加入相应1%标准A，B，O型红细胞悬液50ul。原则：新生儿血型为A型，加标准A，O型红悬2孔；新生儿血型为B型，加标准B，O型红悬2孔；新生儿血型为AB型，加标准A，B，O型红悬3孔；新生儿血型为O型，加标准O型红悬1孔；5.37下孵育15分钟，离心。6.观察放散试验结果。,三放散试验：,上清50ul,四游离试验：,1Coombs卡上做好标记，加入50ul新生儿血浆。2加入相应1%标准A，B，O型红细胞悬液50ul。原则：新生儿血型为A型，加标准A，O型红悬2孔；新生儿血型为B型，加标准B，O型红悬2孔；新生儿血型为AB型，加标准A,B,O型红悬3孔；新生儿血型为O型，加标准O型红悬1孔；4.37下孵育15分钟，离心。5.观察放散试验结果。,五直接抗人球蛋白试验(Cooms)：,在Coombs卡AHG下做好标记。加入1%被检红悬50ul。3.不孵育，将卡放到Dianafuge离心机中离心。4.观察血型、直抗试验结果。注：AHG：多克隆抗人球蛋白,六IgG抗体效价检测：,1.Coombs卡上做好标记。2.取200ul孕妇血浆与200ul巯基乙醇应用液等量混匀，37水浴1小时，破坏IgM抗A/B抗体。3.2500转/分离心3分钟，取上清100ul，用生理盐水等比稀释至1：512。4.在Coombs卡4孔上加入稀释好的第5-8孔50ul，再加入相应1%标准A，B，O型红细胞悬液50ul。5.37下孵育15分钟，离心。6.观察放散试验结果。,七IgG抗体效价检测：,1.Coombs卡上做好标记。2.主侧：患者血浆50ul供者红悬50ul。3.次侧：供者红悬50ul患者血浆50ul。4.37下孵育15分钟，离心。5.观察放散试验结果。,八抗体筛查：,1.Coombs卡上做好标记。2.患者血浆50ul1%不完全抗体筛选细胞各50ul。3.37下孵育15分钟，离心。4.观察放散试验结果。