微免实验复习整理图文详尽版本

微免实验整理第1页共12页整理BY陆（一）实验一大吞噬现象、小吞噬现象吞噬功能的测定计数方法吞噬百分率计数100个中性粒细胞中具有吞噬作用的细胞数,即为吞噬百分率。吞噬指数观察100个中性粒细胞，计数被吞噬的细菌总数，求平均每个中性粒细胞吞噬的细菌数即为吞噬指数。大吞噬现象要认识“巨噬细胞”小吞噬现象主要认识“中性粒细胞”（马蹄状形）（二）实验二淋巴细胞转化试验（原理、分型、意义）1、原理T淋巴细胞可以在分裂剂的刺激下，向母细胞转化。促分裂剂能选择性地激发T淋巴细胞合成DNA与细胞分裂。转化百分率正常值为70左右2、分裂相即染色体型3、母细胞较小淋巴细胞大45倍；核质疏松呈网状结构，有13个核仁；核周透明区；胞浆嗜碱性，有空泡4、过渡型较小淋巴细胞略大；核质略疏松；着色较淡5、小淋巴细胞核质致密；着色深；胞浆少6、意义体外淋巴细胞转化反应，可为测定机体细胞免疫状态的指标之一。E玫瑰花环实验1、原理T细胞表面有绵羊红细胞受体，可在自然情况下与绵羊红细胞结合，形成E玫瑰花环，由此可区分T淋巴细胞与B淋巴细胞2、判定结果凡是淋巴细胞周围围绕4个以上绵羊红细胞者为阳性血清学反应1、基础抗原决定簇抗体的互补决定区微免实验整理第2页共12页整理BY陆2、特点特异性、可逆性、比例性、阶段性3、抗原抗体反应因素电解质、温度、酸碱度4、抗原或抗体的检测方法凝集反应、沉淀反应、免疫标记技术I凝集反应（直接、间接）概念抗原抗体凝集团块直接凝集颗粒性抗原抗体凝集团块（玻片法、试管法）直接凝集反应玻片凝集反应定性；用已知抗体检测颗粒性抗原；细菌的诊断和分型，红细胞ABO鉴定出现白色凝集块，属于阳性反应直接凝集反应试管凝集反应（半定量，诊断伤寒副伤寒）间接凝集可溶性抗原包被于载体抗体凝集团块反向间接凝集抗体包被于载体抗原凝集团块协同凝集抗体结合金葡菌SPA抗原凝集团块II沉淀反应（单项、双向）概念可溶性抗原抗体沉淀物单向琼脂扩散单向琼脂扩散试验是一种定量试验。将一定量已知抗体混于琼脂中，制板，在适当位置打孔，将抗原加入孔中扩散，与板中抗体相遇，在比例合适处呈现白色沉淀环，环的直径与抗原含量成正比。主要用于测定血清各种IG和补体成分的含量双向琼脂扩散可用于分析和鉴定标本中多种抗原成分（抗原、抗体同时扩散（自由、定向）对流免疫电泳在相应抗原抗体孔之间可见白色沉淀线。火箭电泳抗原定量试验（抗体琼脂板、抗原扩散（自由、定向）将一定量已知抗体混于琼脂中，制板，在板的一端打一排小孔，加入待检样品，置于阴极端进行电泳。抗原在泳动过程中与抗体在比例合适部位形成锥形沉淀峰，状如火箭，称火箭电泳。沉淀峰的高低与抗原的浓度成正比。敏感度与单扩相仿，但需时较短。微免实验整理第3页共12页整理BY陆III直接凝集反应玻片凝集（三）实验三补体结合实验中和反应实验（病毒中和实验、毒素中和实验）略免疫标记技术1、概念将已知抗体标记上显示性物质，通过检测标记物，反映有无抗原抗体反应，从而间接测出微量的抗原或抗体。2、原理免疫标记技术是在免疫学、生物化学及显微镜术进展的基础上发展起来的一项技术，具有特异、敏感、快速的特点。将荧光色素（常用异硫氰基荧光黄，简称FITC）与特异性抗体（或抗原）以共价键基团牢固结合，但不影响该血清抗体的免疫特性。这种荧光标记的抗原抗体复合物，可通过荧光灯源中产生的紫外光或蓝紫光激发产生荧光，而从荧光显微镜加以观察。3、常用的标记物有酶、荧光素、放射性同位素、胶体金、生物素、电子致密物等。微免实验整理第4页共12页整理BY陆ELISA（酶联免疫吸附试验）1、原理把抗原抗体的免疫反应和酶（主要有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）的高效催化作用有机地结合起来，并仍保持其免疫和酶的活性。结合在抗原抗体复合物上的酶在遇到相应的底物时，可以催化底物水解、氧化或还原，从而产生有色的物质。颜色反应的深浅与抗体或抗原的量成正比。2、方法主要有间接法（用于测抗体）和双抗体夹心法（用于测抗原）。革兰染色1、意义对细菌鉴别、选择抗菌药物、研究细菌致病性等有重要意义。2、原理与细菌细胞壁有关，尚未完全阐明。阴性红色阳性蓝色细菌学总论细菌是一类具有细胞壁的单细胞微生物，形体微小，一般以微米（M）作为测量单位。微免实验整理第5页共12页整理BY陆细菌按其外型可分为球菌、杆菌、螺型菌三大类。不同种类的细菌大小不一，大多数球菌直径约1M，杆菌长25M，宽031M。细菌的特殊结构荚膜、鞭毛、芽孢、菌毛【实验】毒力试验（ELEK平板）鉴定分离出的细菌能否产生外毒素方法在含血清的琼脂平板中央贴上一条浸有白喉抗毒素血清的滤纸条，将待检菌垂直划过滤纸条接种现象如产生外毒素，则产生白色沉淀线（毒素与抗毒素特异性结合）本质抗原抗体沉淀实验【实验】细菌划线分离、药物敏感试验（观察抑菌圈的直径，MM来计数）、抗酸染色方法（四）实验四细菌生长情况（1）液体培养基沉淀生长、混浊生长、表面生长（2）半固体培养基（0103琼脂粉）混浊生长、线状生长（3）固体培养基（142琼脂粉）菌落、菌苔微免实验整理第6页共12页整理BY陆细菌变异1、菌落变异（SR变异）S型菌落SMOOTH光滑菌落表面光滑有光泽，边缘整齐。R型菌落ROUGH粗糙菌落表面粗糙而暗淡，边缘不整齐。菌落变异是由于菌体本身起变化。一般光滑的细菌有毒力；粗糙的细菌没有毒力或毒力减退。2、鞭毛变异（HO变异）细菌的鞭毛在某些情况下可以消失而变成没有鞭毛的细菌。细菌色素金黄色葡萄球菌产生脂溶性金黄色色素铜绿假单胞菌（俗称绿脓杆菌）产生水溶性绿色色素细菌生化反应微免实验整理第7页共12页整理BY陆（五）实验五化脓性球菌葡萄球菌（左上）、链球菌（右上）、肺炎球菌（左下）、淋球菌（右下）甲型（）乙型（）丙型（）溶血链球菌、肺炎链球菌、淋病奈瑟菌1、甲型草绿色，不完全溶血2、乙型透明完全溶血3、丙型不溶血4、肺炎链球菌G（血琼脂平板）（草绿色不完全溶血）5、淋病奈瑟菌G（巧克力血琼脂平板）6、其中，链球菌的致病扩散因子（透明质酸酶）使脓液稀释扩散。微免实验整理第8页共12页整理BY陆白喉杆菌G（亚碲酸钾血琼脂）（ALBERT染色异染颗粒）（ELEK平板白喉杆菌毒力试验）下面图片的ELECK平板写错了，正确是ELEK平板结核杆菌（齐尼抗酸染色红色）（罗氏培养基（绿色）菜花样（黄色）微免实验整理第9页共12页整理BY陆（六）实验六肥达反应1、概念用已知的伤寒沙门菌菌体（O）抗原和鞭毛（H）抗原，以及引起副伤寒的甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌H抗原的诊断菌液与受检血清做试管或微孔板凝集实验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验。2、结果判断3、【实验】血清学诊断肥达反应原理用已知伤寒沙门菌的O、H抗原、甲、乙副伤寒沙门菌的H抗原与患者血清做定量凝聚试验，根据抗体效价的增长，辅助肠热症的临床诊断。用途辅助诊断伤寒、副伤寒【带菌者检查VI抗体】【实验】方法试管凝集法（定量）当TO180，TH1160，PA、PB均180才有意义动态观察双份血清抗体四倍升高有诊断意义临床意义辅助诊断伤寒和副伤寒O抗体（IGM），H抗体（IGG）O、H抗体均升高，患伤寒的可能性大O、H抗体不升高，患伤寒的可能性小只有H升高，则可能是预防接种过或非特异性回忆反应，只有O升高而H不高，则可能是感染早期或其他沙门菌的交叉反应。分析结果时应注意微免实验整理第10页共12页整理BY陆正常人抗体水平。一般伤寒杆菌O抗体效价在180以上，H抗体效价在1160以上，甲、乙副伤寒杆菌H抗体效价在180以上才有诊断价值；动态观察一般随病程延长第2次检测抗体效价比第1次高4倍或4倍以上才有诊断意义。区别H、O抗体增高的意义两者同时升高有辅助诊断意义；两者同时低于正常无意义；O抗体效价高而H抗体效价低，可能是感染的早期或其他沙门菌感染引起的交叉反应。若H抗体效价高而O抗体效价在正常范围内，则可能是以往接种过疫苗或非特异性回忆反应所致。肠道杆菌G（SS、双糖培养基）生化反应表炭疽杆菌G（普通琼脂培养基）（灰白色粗糙型菌落）（卷发状边缘）霍乱弧菌G（碱性蛋白胨水）厌氧芽孢梭菌（破伤风、产气荚膜、肉毒梭菌）1破伤风梭菌G（庖肉培养基）（毒素动物实验）2产气荚膜梭菌G（庖肉培养基）（血琼脂平板双层溶血环）（高层琼脂断裂试验）（汹涌发酵试验）3肉毒梭菌G（庖肉培养基）（血琼脂平板完全溶血）微免实验整理第11页共12页整理BY陆产气荚膜梭菌【G，侵袭性很强】【实验】培养特性血琼脂平板上，双层溶血环（靶样溶血）；内环溶血，外环溶血（内环是由毒素引起的较窄的透明溶血环，外环是由毒素引起的不完全溶血环）蛋黄琼脂平板上，有NAGLER反应现象；菌落周围出现乳白色浑浊圈，是由于毒素分解卵磷脂所致；代谢活跃，分解多种糖类，产生大量气体疱肉培养基培养，可分解肉渣中糖类产气，肉渣呈淡红色牛奶培养基中，可出现“汹涌发酵”该菌分解乳糖产酸，使牛奶中的酪蛋白凝固，产生大量气体冲散酪蛋白，并将封固液微免实验整理第12页共12页整理BY陆面的凡士林层顶开，甚至冲掉试管口棉塞（七）实验七白色念珠菌G（白假丝酵母菌）（普通琼脂、沙保培养基）可见酵母样细胞伴假菌丝。新型隐球菌（血琼