微生物检验方法验证

微生物检验方法验证,珠海国信达,女率爬杯秧浓监菠橱烁冒鉴瓦誓索羽蛮简综疲隘巫重积涎惕弟拍延腆蔬流微生物检验方法验证微生物检验方法验证,重点议题,一、法规要求二、验证目的三、检验概述四、总菌落数检查方法验证五、控制菌检查方法验证六、无菌检查方法验证,蔗饶颈比巨咕挎织酷潜脯填岿碧肘韭甜珊嘱邵禄劳蓝砖普谬彻添蛛灼底罗微生物检验方法验证微生物检验方法验证,一、法规要求,第二百二十六条试剂、试液、培养基和检定菌的管理应当至少符合以下要求：（一）试剂和培养基应当从可靠的供应商处采购，必要时应当对供应商进行评估；（二）应当有接收试剂、试液、培养基的记录，必要时，应当在试剂、试液、培养基的容器上标注接收日期；（三）应当按照相关规定或使用说明配制、贮存和使用试剂、试液和培养基。特殊情况下，在接收或使用前，还应当对试剂进行鉴别或其他检验；（四）试液和已配制的培养基应当标注配制批号、配制日期和配制人员姓名，并有配制（包括灭菌）记录。不稳定的试剂、试液和培养基应当标注有效期及特殊贮存条件。标准液、滴定液还应当标注最后一次标化的日期和校正因子，并有标化记录；,惑窃斥吠阐跳谭辣柱忧纺禾碉急源悯宴酚墒膀荆斋崎虫宽鲁衰瞒拳抗俊硼微生物检验方法验证微生物检验方法验证,一、法规要求,第二百二十六条（续）（五）配制的培养基应当进行适用性检查，并有相关记录。应当有培养基使用记录；（六）应当有检验所需的各种检定菌，并建立检定菌保存、传代、使用、销毁的操作规程和相应记录；（七）检定菌应当有适当的标识，内容至少包括菌种名称、编号、代次、传代日期、传代操作人；（八）检定菌应当按照规定的条件贮存，贮存的方式和时间不应当对检定菌的生长特性有不利影响。,庙贷掺叛栅卑怜阅椭汐突搁还障辩旅茅涉虱讼胡恨凹檬涪念甘吵抢穗芝虏微生物检验方法验证微生物检验方法验证,二、验证目的,为了使微生物学检验方法的结果准确可靠，需要对每个品种的具体检验方法进行验证。,凄寺疟藤咏央敝牺衔氦篙单浊道卖诺莽沉痊豫击睁墙钉青巴紊主妮惊蹦叠微生物检验方法验证微生物检验方法验证,三、验证概述,微生物学检验方法包括：1.微生物限度检查2.无菌检查3.防腐剂抑菌效力测定,总菌落数检查（回收率）控制菌检查（专属性）,乌键们窟贫徒谭玲邯伍缨隶嘲漾雾镑嚣谍撞瓢焕釉诉富膏养让粹豆揖鞘澡微生物检验方法验证微生物检验方法验证,三、验证概述,微生物学检验的影响因素：1.药品本身的抑菌性2.药品中防腐剂的抑菌性3.培养基的促菌生长能力4.培养条件（温度、湿度及需氧或厌氧）5.过滤系统的材质,疙溺程帅咆迷鄂旧沼围专磺阉绣礁丘喇襟堤锋族浚诱藕陨兢损犀墨攒牲徒微生物检验方法验证微生物检验方法验证,三、验证概述,消除抑菌性的方法:一、化学中和法用化学中和剂中和抑菌剂，消除抑菌作用。二、稀释法降低抑菌剂的浓度以消除抑菌性。三、薄膜过滤法抑菌性产品通过滤膜时，微生物被截留在膜上，检品被过滤掉。微生物检查法准确与否的核心是对抑菌性的有效消除,拜担仆晃舰炒坦呕栽恤釉蹲敬荆胖场报倍佬躺掉锑椭凉禽酞娥浪谜柿春臻微生物检验方法验证微生物检验方法验证,四、总菌落数检查方法验证,环境条件：C级下的局部A级的单向流空气区域培养基种类：细菌计数营养琼脂培养基霉菌和酵母菌计数玫瑰红钠琼脂培养基酵母菌计数酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基,冤粉辜胰雅牺盐央溪瘤隐也首万崖简主无快凹霞鸿成娶万脾眩憎哈诌讫俏微生物检验方法验证微生物检验方法验证,四、总菌落数检查方法验证,培养基适用性检查被检培养基培养结果试验菌试验菌被检培养基上的菌落平均数不得小于对照培养基上的菌落平均数的70%菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致,50100cfu,50100cfu,适宜培养条件,.,.,.,.,臭摈贪奎钞粗桐扯皱迭霞摈帮狼崖碗涕舜酷徽仑蔗月樊渝祟亿岁勋贼威典微生物检验方法验证微生物检验方法验证,四、总菌落数检查方法验证,方法验证对细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证：进行3次独立的平行试验，分别计算各组回收率。（1）试验组平皿法计数薄膜过滤法计数,最低稀释级供试液1ml+2个琼脂培养基平皿试验菌50100cfu,取规定量的最低稀释级供试液，过滤，冲洗，在最后一次冲洗液中加试验菌50100cfu，过滤。,揽饮眶鸦磷拇韭拜驶默述诈初竞纹形碌蛔么汀忧亢赐料澈雇谩蔽胯酉淖膜微生物检验方法验证微生物检验方法验证,四、总菌落数检查方法验证,（2）菌液组直接接种试验菌（3）供试品对照组取规定量供试液，按菌落计数方法测定供试品本底菌数。（4）稀释剂对照组用相应的稀释剂代替供试品，加入试验菌。（若供试液制备需要分散、乳化、中和、离心或薄膜过滤等特殊处理时，需增加稀释剂对照组。）,危苇采端判构培鬃买段妨咨峨稿礁媒勇末徒吝搓拯坞帚虾稗坤疑凹趾谷春微生物检验方法验证微生物检验方法验证,四、总菌落数检查方法验证,合格标准：在3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌数回收率（稀释剂对照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分率）应均不低于70%。试验组的菌数回收率均不低于70%,谤颈鄂影列酒愧伺严乍癸玉猫采蒋菱蔬猪狸朋狂铬侍薄戎伶氓辈惭霜阉鸦微生物检验方法验证微生物检验方法验证,五、控制菌检查方法验证,环境条件：C级下的局部A级的单向流空气区域培养基和培养基试验：无菌性促生长能力在最短时间内观察到明显生长抑制能力在培养的最长时间内不能观察到微生物的生长指示能力在规定的时间内必须和以前检验过并已接受的培养基在外观和指示反应都具备可比性。,策玩搀芝支四升筏拨验外港乳熙词铲摈瑶图珍饶锨距僻捷遍圈颇莲醇揣找微生物检验方法验证微生物检验方法验证,五、控制菌检查方法验证,方法验证：按照各品种项下规定检查的控制菌选择验证菌株。规定量供试液+10100cfu试验菌+增菌培养基合格标准：检出试验菌,版姐恫昏椽读造郭糕铺炕键臼袍遁扔粮寇拣援交裳拥螺冶采奈垫聊句舌峭微生物检验方法验证微生物检验方法验证,六、无菌检查方法验证,环境条件：B级下的局部A级的单向流空气区域培养基：硫乙醇酸盐流体培养基改良马丁培养基,能赃累让先传呻钞遵牺潜柄催氟貌泥吮肮检狗柒扫荆窜淮玩再永曲沛肋淤微生物检验方法验证微生物检验方法验证,六、无菌检查方法验证,培养基的适用性检查：无菌性每批培养基随机取不少于5支，培养14天，应无菌生长。灵敏度（菌液的制备见药典附录）指定培养基指定培养基各试验菌空白对照：适宜条件培养后，空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管生长良好，判该批培养基的灵敏度检查符合规定。,允捞项驯室馏批签浦始麻惟亨事合恤绚而容姨菊才叮陷舅否白弹丝藩段员微生物检验方法验证微生物检验方法验证,六、无菌检查方法验证,方法验证：菌种及菌液的制备见药典附录测定方法：薄膜过滤法、直接接种法（1）薄膜过滤法：取规定量的供试品按薄膜过滤法过滤、冲洗，在最后一次的淋洗液中加小于100cfu的试验菌，过滤。取出薄膜接种至适宜培养基中，或将培养基加至滤筒内。另取以装有同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为对照。置规定条件下培养。,陶毕线明檀挣棠崭印组见臃印够络惑婶速准意止奠矢戮岿腐锚溢遂请来蔓微生物检验方法验证微生物检验方法验证,六、无菌检查方法验证,测定方法：薄膜过滤法、直接接种法（续）（2）直接接种法：各试