临床常用免疫学检测培训.ppt

临床常用免疫学检测,温州医科大学附属一院医学检验中心,林晓梅,概述：,免疫学(Immunology)是研究机体自我识别和对抗原性异物排斥反应的一门科学。由免疫组织、免疫细胞、免疫分子组成。包括体液免疫和细胞免疫.1.免疫防御超敏反应、免疫缺陷病2.免疫稳定自身免疫病3.免疫监视病毒感染、肿瘤发生,临床免疫学检查常用于感染性疾病、自身免疫性疾病、变态反应性疾病、免疫缺陷病、肿瘤等疾病的诊断与疗效监测。,体液免疫检测,1,细胞免疫检测,2,肿瘤标志物检测,3,自身抗体检测,4,Contents,感染免疫检测,5,酶原活性糖蛋白参与灭活病原体的免疫反应也可破坏自身组织或自身细胞造成免疫损伤,体液免疫检测,1,（一）免疫球蛋白（Ig）的检测,包括：IgG、A、M、D、E,Ig的产生、结构与功能Ig通常是指一组具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白，由浆细胞合成和分泌，有特异性识别抗原的功能，但必须与抗原结合形成免疫复合物后才能启动效应功能。,1、IgG,含量：7.0-16.6g/L,占70-80(含量最多）特点：再次免疫应答抗体、具抗菌、抗病毒活性，能通过胎盘意义：多克隆：感染（病毒、细菌）、自身免疫病（SLE、RA）单克隆:免疫增殖病（MM）：免疫缺陷、重链病、轻链病、肾病,2、IgA,含量：0.7-3.5g/L，占10-15特点：分泌型（SIgA)，局部粘膜抗感染功能可存在于各种分泌物中（初乳）血清型（为单体，免疫作用弱）意义：IgA型MM，SLE，类风关等反复呼吸道感染，非IgA免疫增殖病,3、IgM,含量：0.5-2.6g/L,占5-10特点：初次免疫应答抗体，为五聚体，分子量最大的Ig意义：早期抗体，出现早，消失快。可用于传染病的早期诊断。,4、IgD、IgE,IgD:含量低、作用不很明确测定较难，ELISA法测定IgE：含量最少，0.1-0.9mg/L与变态反应、寄生虫病、皮肤过敏有关,（二）补体(Complement，C),补体是存在血清及组织液中的一组具有酶原活性的糖蛋白，可溶解细胞，灭活病原体，清除免疫复合物,1.总补体活性CH50测定,溶血程度与补体含量的关系,溶血素（抗体）致敏绵羊红细胞补体溶血溶血程度与补体正相关，为S形曲线。正常参考值：50-100kU/L,Totalhemolyticcomplement(CH50),意义：减低：各种免疫复合物性疾病、自身免疫性疾病增高：急性炎症、组织损伤、肿瘤等,2.补体C3与C4测定,补体系统有C1、2、C9及其它成分组成C3含量最高，是传统和旁路途径激活的关键，急性时相反应蛋白,参考值0.8-1.5g/LC4代表传统活化途径，在补体活化、促进吞噬、防止免疫复合物沉着和中和病毒等方面发挥作用。参考值0.2-0.6g/L补体测定的意义：炎症、肿瘤等(C3增高在急性炎性反应更敏感)：肾炎、自身免疫病等(C4对判断免疫复合物形成时补体消耗性减低更有意义),血清中补体代谢速度非常快，在病理情况下更会出现其他蛋白质所没有的急剧变化。因此，临床检测血中补体时，要在不同时期反复多次进行才能更有助于诊断和治疗。,T细胞亚群的检测1.E玫瑰花结形成试验（ERFT)：检测T细胞数量原理：T细胞表面具SRBC受体正常58-72左右意义：见于自身免疫性疾病及器官移植排斥反应等见于免疫缺陷性疾病等。2.淋巴细胞转化试验（LCT):检测T细胞的生物学功能原理：淋TPHA淋母细胞意义：转化率降低，见于细胞免疫缺陷或细胞免疫功能低下患者。,细胞免疫检测,2,淋巴细胞亚群的分化抗原测定(clusterdifferentiationCD)T细胞：CD3-总T标志CD4-TH标志(helpTcell)CD8-Ts标志(suppressorTcell)CD4/CD8:TH/Ts，降低常见于AIDS。B细胞：CD19、CD20、CD22等,细胞免疫检测,2,细胞因子(Cytokine,CK)测定活化的免疫细胞分泌产生的免疫调节性小分子多肽。1.白介素2（IL-2)和IL-2R：白细胞介素（IL）多种细胞产生的能介导免疫细胞间的相互作用。IL-2是由活化T细胞产生，具有多向性作用的细胞因子。2.肿瘤坏死因子（TNF)：引起肿瘤组织出血、坏死和杀伤作用。3.干扰素（IFN)：抗病毒、抗肿瘤作用,细胞免疫检测,2,肿瘤标志物（tumormarker)是指在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞本身合成、释放或者是由机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质。包括蛋白质类、糖类和酶类肿瘤标志物。肿瘤标志物检测的意义是：高危人群的筛查、辅助诊断、观察疗效和肿瘤复发检测以及判断预后。,肿瘤标志物检测,3,肿瘤标志物介绍以下6种,（2）癌胚抗原(CEA),（1）甲胎蛋白(AFP),（3）前列腺特异性抗原(PSA),（5）癌抗原125(CA125),（6）癌抗原153(CA15-3),（4）糖链抗原19-9(CA19-9),1.甲胎蛋白（-fetoprotein，AFP）AFP是胎儿发育早期合成的一种糖蛋白(1球蛋白)，分子量70kD，胎儿出生后不久即逐渐消失。参考值：血清300g/L；病毒性肝炎与肝硬化患者，血清中AFP可有不同程度的增高，但一般在300g/L以下；生殖系统肿瘤和胚胎性肿瘤，如睾丸癌、畸胎瘤等升高；妊娠时也升高，但一般不超过400g/L,参考值：血清60%）血清PSA明显升高,外科术后90%患者血清PSA水平明显降低。前列腺肥大，前列腺炎和泌尿生殖系统的疾病，也可见血清PSA水平升高。当PSA在4.0g/L10.0g/L的灰区时，须进行f-PSA和f-PSA/t-PSA比值的测定。,【注意事项】在采集病人的血标本前进行直肠指诊、前列腺按摩，导尿等，将会导致血清PSA升高，应注意避免。,(二)糖脂类肿瘤标志物检测：,（1）糖链抗原19-9(CA19-9),（3）糖链抗原15-3(CA15-3),（2）糖链抗原125(CA125),（1）糖链抗原19-9(CA19-9),CA19-9是一种与胰腺癌，胆囊癌，结肠癌和胃癌相关的肿瘤标志物，又称胃肠癌相关抗原。参考值：血清CA19937kU/L,胰腺癌首选指标，血清CA19-9水平明显升高，尤其是胰腺癌晚期病人，血清CA19-9浓度可达40万kU/L，是重要的辅助诊断指标；胆囊癌、胆管壶腹癌、胃癌、结肠癌时，血清CA19-9水平明显升高。胆囊癌、胆管壶腹癌阳性率约为85%，胃癌、结肠癌阳性率约为40%；急性胰腺炎，胆囊炎，胆汁淤积性胆管炎，肝硬化，肝炎等疾病，CA19-9也有不同程度的升高，注意与恶性肿瘤的鉴别。,（2）糖链抗原125(CA125),CA125是一种糖蛋白性肿瘤相关抗原，存在于卵巢肿瘤的上皮细胞内，对诊断卵巢癌有较大临床价值。参考值：血清CA12535kU/L,卵巢癌，阳性率可达5090%。手术和化疗有效者CA125水平很快下降，若有复发，CA125升高可先于临床症状出现之前。其他恶性肿瘤，如乳腺癌、胰腺癌、胃癌47%、肺癌、结肠直肠癌、其他妇科肿瘤等也有一定的阳性反应。非恶性肿瘤，如子宫内膜异位症，盆腔炎，卵巢囊肿，胰腺炎，肝炎，肝硬化等疾病也有不同程度升高。妊娠早期，CA125有升高。,（3）糖链抗原15-3(CA15-3),CA15-3是一种乳腺癌相关抗原，属糖蛋白，分子量超过400kD，对乳腺癌有重要的辅助诊断作用。参考值：血清CA15-325kU/L,乳腺癌，但在乳腺癌的早期阳性率较低约为30%，转移性乳腺癌阳性率可达80%；其他恶性肿瘤，如肺癌，结肠癌，胰腺癌，卵巢癌，子宫颈癌，原发性肝癌等，也有不同程度的阳性率；肝脏，胃肠道，肺，乳腺，卵巢等非恶性肿瘤疾病，阳性率一般低于10%。,理想的TM,敏感性高特异性好有器官特异性，能对肿瘤定位血清中浓度与肿瘤大小、临床分期相关，可预后半衰期短，能反映肿瘤动态变化（检测治疗效果、复发和转移）测定方法简单,(三)肿瘤标志物的选择,(三)肿瘤标志物的选择,在实际应用中肿瘤标志物用于肿瘤预后的判断和疗效的监测比用于诊断更有价值特异性欠佳：由于肿瘤标志物组织特异性较差，且不少肿瘤标志物在良性疾患中也有轻、中度的升高或暂时升高。敏感性不高：肿瘤早期许多肿瘤标志物常常为阴性，只有当肿瘤发展到一定的阶段方出现肿瘤标志物的明显升高，甚至有的肿瘤始终无明显升高。因此某一肿瘤标志物升高并非一定是恶性肿瘤，同样，肿瘤标志物不升高也不能轻率地否定有恶性肿瘤的存在。,(三)肿瘤标志物的选择,选择特异性的肿瘤标志物或最佳组合动态检测,常用肿瘤标志物联合检测的临床应用,肿瘤首选标志物补充标志物,肺癌NSE、CYFRA21-1CEA、TPA、SCC、ACTH、降钙素肝癌AFPAFU、GT、CEA、ALP乳腺癌CA15-3、CA549CEA、hCG、降钙素、铁蛋白胃癌CA72-4CEA、CA19-9、CA50前列腺癌PSAf-PSA、c-PSA、PAP结肠直肠癌CEACA19-9、CA50胰腺癌CA19-9CA50、CEA、CA125卵巢癌CA125CEA、hCG、CA72-4睾丸肿瘤AFP、hCG宫颈癌SCCCEA、CA125、TPA膀胱癌无TPA、CEA骨髓瘤2-M、本周蛋白,-自身免疫病是指免疫系统对自身成分的免疫耐受性减低或破坏，产生自身抗体损伤含有相应自身抗原的组织器官而造成的疾病。,自身抗体检测,4,是变性IgG刺激机体产生的一种自身抗体，主要存在于类风湿性关节炎患者的血清和关节液中。主要为IgM型。临床意义：类风湿性疾病时，RF，阳性率达70-90;其他自身免疫性疾病，RF亦,（一）类风湿因子(rheumatoidfactor，RF),1.ANA(antinuclearantibody):指抗各种细胞核成分的自身抗体，是血清中存在的一类和自身组织细胞的细胞核发生反应的自身抗体的总称。无器官和种属特异性临床意义：SLE(未治疗的)，阳性率达80一100，亦可见于其他自身免疫性疾病。,（二）抗核抗体检测,抗核抗体检测方法：间接免疫荧光法（IIF）,均质型,核膜型,颗粒型,核点型,抗着丝点型,ENA抗体谱包括抗Sm、抗核糖体、抗ScL70、抗Jo1、抗SSB、抗SSA和抗nRNP等的抗体。临床意义抗Sm抗体：SLE的特异性标志之一，抗dsDNA和抗Sm抗体同时检测，可提高SLE的诊断率。抗SSA、SSB抗体干燥综合征抗nRNP抗体-混合性结缔组织病,2.可提取性核抗原（ENA）抗体谱的检测,3.抗双链DNA（doublestranded-DNA,ds-DNA）抗体,抗dsDNA抗体靶抗原是细胞核中DNA的双螺旋结构。抗dsDNA抗体是SLE患者的特征性标志抗体。其抗体滴度与疾病的活动程度有相关性，抗体滴度的动态测定为监控治疗提供了有效的实验室手段。抗dsDNA抗体诊断SLE的特异性可达95%100%，但其敏感性仅为30%50%，因此抗dsDNA抗体阴性不能排除SLE的诊断。,抗dsDNA抗体,SLE特异性抗体，与病情活动度相关。,(一)抗链球菌溶血素“O”抗体（ASO）测定A群溶血性链球菌意义：风湿、风湿性关节炎、风湿性心脏病、急性肾小球肾炎时,感染免疫检测,5,是利用伤寒和副伤寒沙门菌菌液为抗原，检测病人血清中有无相应抗体的一种凝集试验。伤寒第三周后阳性率达80%，初期阴性参考值：H1:160，O1:80，副伤寒甲、乙、丙1:80临床意义：O、H均升高：伤寒O不高、H升高：预防接种或回忆性反应O升高、H不高：感染早期或交叉反应,（二）肥达氏反应,（三）病毒性肝炎检测（P456),1、甲型肝炎病毒标志物检测,2、乙型肝炎病毒病毒标志物检测,3、丙型肝炎病毒标志物检测,4、丁型肝炎病毒标志物检测,5、戊型肝炎病毒标志物检测,1、甲型肝炎病毒标志物检测,免疫学检测,特异性抗体检测IgM抗体IgG抗体HAV抗原检测,病原学检测,病毒分离RT-PCR,2、乙型肝炎病毒病毒标志物检测,乙型肝炎表面抗原（HBsAg）乙肝病毒前S1抗原抗乙肝病毒前S1抗体乙肝病毒前S2抗原抗乙肝病毒前S2抗体乙型肝炎核心抗原（HBcAg）,乙肝核心抗体-IgM乙肝核心抗体-IgG乙型肝炎表面抗体（抗-HBs）乙型肝炎e抗原（HBeAg）乙型肝炎e抗体（抗-HBe）乙型肝炎病毒DNA,（1）最常用的检测项目两对半测定方法：ELISA、放射免疫法（RIA）、发光免疫法,2、乙型肝炎病毒病毒标志物检测,2.乙肝DNA定量PCR检测：病毒复制的指标（1）乙型肝炎的诊断:急性HBV感染的诊断提供直接证据（2）抗病毒治疗方法及疗效评价：拉米夫定(贺普丁）、干扰素治疗效果的主要指标。（3）分泌物传染性判断（乳汁等）,（二）乙型肝炎病毒病毒标志物检测,阴性：最低检测灵敏度拷贝/ml（如:500拷贝/ml）阳性：具体数据拷贝/ml（如：5.0E+6拷贝/ml)参考值：最低检测灵敏度拷贝/ml,结果的报告,3、丙型肝炎病毒感染,分子生物学检测,RT-PCR：有助于早期诊断,免疫学检测,特异性抗体检测抗HCV-IgM抗体抗HCV-IgG抗体,4、丁型肝炎病毒感染,5、戊型肝炎病毒感染,HDV为缺陷病毒，需有HBV的存在方能复制和传播,实验室检查,病毒分离免疫学检查分子生物学检测,ThankYouforYourAttention,谢谢,两对半:,HBsAg（表面抗原）：存在于Dane颗粒的表面的糖蛋白。判断HBV感染的指标之一。抗-HBs（表面抗体）：是一种保护性抗体。是机体感染或接种乙肝疫苗的标志。HBeAg（e