实验五、血液葡萄糖测定概论PPT课件

实验五血液葡萄糖的测定（福林-吴宪氏法）,一、实验目的,1、掌握采用福林-吴宪氏法测定血液中葡萄糖的原理。2、熟悉分光光度计的使用。,二、实验原理,磷钼酸,钼蓝（蓝色）,C6H12O6+2Cu(OH)2,C5H11O5COOH+Cu2O,3Cu2O+3H3PO42MoO312H2O,6CuO+3H3PO4Mo2O312H2O,Na2CO3H2ONaOH+NaHCO3NaOH+CuSO4=Cu(OH)2+Na2SO4,碱性铜试剂,钼蓝溶液显蓝色，其蓝色的深浅与血滤液中葡萄糖的浓度成正比，选用颜色深浅较接近于测定管的标准管一同比色，即可求出测定管中葡萄糖的含量。血糖管的使用：血糖管下部的管径较细，以避免还原生成的氧化亚铜被空气中的氧再氧化，降低实际结果。,-,4,无蛋白血滤液的制备,多生化分析要避免蛋白质干扰，常常先将其中蛋白质除去；分析血液中许多成分时，也常常需要除去蛋白质，制成无蛋白质的血滤液。制备无蛋白血滤液的方法很多，可根据不同的需要加以选择。现将生化常用的无蛋白血滤液制备方法介绍如下：,-,5,钨酸法,原理：血液中的蛋白质在pH小于其等电点时，可用钨酸来沉淀。钨酸钠与硫酸混合产生钨酸和硫酸钠，游离的钨酸被，蛋白质吸附，形成不溶性的钨酸蛋白而沉淀，经过滤或离心，除去沉淀即得无蛋白的血滤液。试剂：10%钨酸钠溶液；0.333molL硫酸溶液。仪器与器材：锥形瓶、吸管、奥氏吸管、滤纸、漏斗或离心管及离心机。,-,6,方法与步骤：取50ml锥形瓶1只，加入蒸馏水7份；用奥氏吸管吸取抗凝血l份，擦去管壁外血液，将吸管插人锥形瓶中水的底部，缓慢地放出血液。放完血液后，将吸管提高吸取上清液再吹人，反复洗管3次。充分混合，使红细胞完全溶解；加入0.333molL硫酸溶液1份，随加随摇，充分混匀。此时血液由鲜红变成棕色，静置510min，使其酸化完全；加入10钨酸钠溶液1份，边加边摇，血液由透明变成凝块状。当振摇到不再产生泡沫为止；放置数分钟后用定量滤纸过滤或离心除去沉淀，即得完全澄清的无蛋白血滤液，供测定用。用此法制得的无蛋白血滤液为10倍稀释的血滤液。即每毫升血滤液相当于全血0.ml，适用于葡萄糖、非蛋白氮、尿素氮、肌酸酐和氯化物等的测定。,三、实验步骤,1、全血无蛋白滤液的制备,抗凝血1ml,蒸馏水7ml,混匀,1/3mol/L硫酸1ml,振摇,10%钨酸钠1ml,振摇,过滤,放置5min,无蛋白血滤液,2、按表操作,混匀，置沸水浴中煮8min。取出用流动自来水冷却3min,无蛋白血滤液,蒸馏水,标准葡萄糖应用液,碱性铜试剂,空白管,标准管,测定管,1.0,1.0,-,1.0,-,-,-,-,-,2.0,2.0,2.0,血糖管,试剂ml,磷钼酸试剂,2.0,2.0,2.0,1：4磷钼酸溶液加至,混匀后放置2min,12.5,12.5,12.5,3、比色测定,将各管颠倒混匀后，用空白管调零，在420nm处测定吸收度。,四、操作注意,1、等水沸腾后，才能放入血糖管。加热要准确8分钟。2、冷却时切不可摇动血糖管，以免还原的氧化亚铜被空气中的氧再氧化，降低实际结果。3、加入磷钼酸后迅速比色。4、分光光度计的使用。,分光光度计的使用,1、接通电源，打开比色皿盖，预热20-30分钟后，调节波长至所需波长。2、将盛有空白溶液的比色皿放在比色架的第一格，其余放测定溶液。将比色皿盖盖上，此时空白溶液在光路上。将光点调到“T”，调节T为100%。3、将光点调到“A”，轻轻拉动比色架固定拉杆，使第二个比色皿溶液处在光路中，此时读数即为该溶液的吸收度。4、依次拉出第三、第四个比色皿，分别读