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文档简介
回忆:构成生物体的遗传物质是什么?,分别加入,R型细菌,转化为S型菌,DNA,多糖,脂质,蛋白质,RNA,课题四DNA的粗提取与鉴定,南昌二中:黄宇,怎样才能将细胞内的DNA分离出来?,提取生物大分子的基本思路?,选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。,提取DNA的基本思路?,利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异,提取DNA,去除其他成分。,(1)DNA的溶解性DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,利用这一特点,选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反。,如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出?,(2)DNA在酒精溶液中的溶解性DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理,可以将DNA与蛋白质进一步分离,(3)DNA对酶、高温的耐受性蛋白酶能水解蛋白质,但是对DNA没有影响大多数蛋白质不能忍受6080C的高温,而DNA在80C以上才会变性,(3)DNA对洗涤剂的耐受性洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜,去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响,(一)实验材料的选取,材料:鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。(从中选取23种实验材料),什么材料适合提取DNA?,凡是含有DNA的生物材料都可以考虑选用DNA含量相对较高的组织,从核DNA数目来看,猪38条,鸡78条,哺乳动物血0条,猕猴桃58条,洋葱16条,豌豆14条,菠菜12条,大肠杆菌1条。,(二)破碎细胞,获取含DNA的滤液,1、动物细胞在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水,同时用玻璃棒搅拌,过滤后收集滤液即可,2、植物细胞植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜,(三)去除滤液中的杂质方案一,0.14mol/L,冷酒精,(三)去除滤液中的杂质方案二、三,方案二:30mL滤液嫩肉粉静置1015分钟DNA滤液,方案三:30滤液6075处理过滤获得DNA滤液,原理:是利用蛋白酶分解杂质蛋白,从而使提取的DNA与蛋白质分开。,原理:利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同,从而使蛋白质变性,与DNA分离,(四)DNA的鉴定,向两支试管中分别加入2mol/LNaCl溶液5ml其中一支试管中加入DNA丝状物各加入二苯胺试剂4ml混匀后,置于沸水浴中加热5min待冷却后,比较两只试管中溶液的颜色变化,(五)实验结果的评价,5.1如何知道是否提取出了DN
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