抗体工程研究进展沉倍奋

抗体工程研究进展,沈倍奋军事医学科学院基础医学研究所,治疗性抗体的研发阶段,靶标发现抗体制备抗体筛选、确认和优化中试工艺研究临床前研究临床研究,主要研究进展,靶抗原的发现抗体人源化改造及人源抗体制备提高抗体效应功能提高抗体表达量其他,靶抗原的发现,TRAIL:TNF-relatedapoptosis-inducedligandTRAILR:DR4、DR5、DcR1、DcR2、OPG,Proteinextractionanddigestion,Treated/Sick,Control/Healthy,MassSpectrometer,Proteinpeptides,identification,MSspectra,quantification,characterization,P,O,Phosphorylation,Oxidation,posttranslationalmodifications(PTM),Peptides,andMS/MSspectra,HPLC,Proteomics,20a5-6HeavyChain,功能单抗识别表位可能是一个新的药靶？,主要研究进展,靶抗原的发现抗体人源化改造及人源抗体制备提高抗体效应功能提高抗体表达量其他,治疗性抗体产生抗抗体的比例,抗体人源化的主要技术,嵌合抗体CDR移植,FR移植,SDR移植表面氨基酸残基人源化抗原表位定向选择,嵌合抗体、CDR移植抗体,SDR人源化方法,鼠抗体（红）和人源化抗体（绿）Fv结构的叠合图,表面氨基酸残基人源化,人源化抗体识别的抗原表位与親本抗体相同,抗原表位定向选择,H,L,人抗体重链文库,人源抗体制备技术,人人杂交瘤技术EB病毒转化技术人源抗体库噬菌体抗体库合成抗体库核糖体展示抗体库转基因动物,大容量抗体库,合成抗体库,核糖体展示scFv文库,各种抗体库筛选方法,感染性筛选,抗原库对抗体库筛选方法,提高抗体特异性和亲和力,Chainshuffling,计算机模建技术,定点突变技术,chainshuffling原理示意图,L,H,L,L,L,L,H,L,H,L,H,H,H,H,H,L,更高亲和力抗体,亲和筛选,建抗体库,亲和筛选,+,重链文库,建抗体库,轻链文库,高亲和力抗体,+,亲本抗体,抗体H22计算机分子设计与直接进化,S-B(10-11M),Ka6x1010L/mol,B/F,抗体CH22m亲和常数测定,Items,Z12Ka=8107M-11/750CH22Ka=9109M-11/6.5mCH22Ka=61010M-11RemicadeKa=11010M-11/6,Antibodyaffinity,移植人免疫球蛋白的小鼠,抗体结构信息具有重要的研究价值,Her2靶点人源抗体（HF)的设计与验证,HF人源抗体对Her2+细胞的ADCC杀伤效应分析,新抗体或抗体类似物的设计,以抗原抗体复合物的晶体结构设计新抗体以人抗体Fc为支架设计类抗体以全人抗体为支架设计小抗体以非Ig的人蛋白为支架设计功能分子,PT4LinkerFC融合蛋白的构象,PT4-Linker-FC与TNF-相互作用复合物的构象,拮抗肽linkerFc融合蛋白设计,单域抗体（PTVH5）设计,PTVH5与TNF形成的复合物模型,单域抗体单链抗体(scFv),单链抗体（TSA1、TSA2）设计,主要研究进展,靶抗原的发现抗体人源化改造及人源抗体制备提高抗体效应功能提高抗体表达量其他,抗体药物的作用机理,直接效应诱导凋亡抑制增殖阻断生长因子或生长因子受体干扰血管生成间接效应依赖补体的细胞毒（CDC）依赖抗体的细胞毒（ADCC)作为毒素、放射性同位素和细胞毒药物的载体形成抗独特型抗体通过双特异性抗体靶向效应细胞,抗体偶联细胞毒物质,抗体融合蛋白,双功能抗体作用原理,BsAb,BsAb,效应细胞,靶细胞,触发受体,膜表面分子,NK细胞,CD16,肿瘤细胞,HER2/neu,抗HER2/neu抗CD16BsAb,BsAb,双特异性抗体介导的杀伤作用机制（a),BsAb桥连效应细胞和靶细胞；(b),连接的触发分子启动细胞毒反应；(c),效应细胞对靶细胞产生致死性杀伤反应。,细胞毒反应,细胞内抗体：在细胞内合成并作用于细胞内组分的抗体,细胞核,EGFR,EGFR,EGFR,抗体的ADCC和CDC效应,提高ADCC和CDC的策略,抗体Fc突变改变抗体糖基化,RituximabFc的三维结构,Rituximab突变体与C1q的结合,主要研究进展,靶抗原的发现抗体人源化改造及人源抗体制备提高抗体效应功能提高抗体表达量其他,提高表达量的方法,应用扩增系统GS/DHFR弱化选择标记基因应用有利于基因表达的元件强启动子强增强子反式作用元件位置效应（positioneffects),Cre-LoxP定点整合系统,工程细胞株,lacZ-Zeocin,可扩增转录活性位点,Hotspot-tagedFRT,抗体的糖基化,主要研究进展,靶抗原的发现抗体人源化改造及人源抗体制备提高抗体效应功能提高抗体表达量其他,抗体可变区和框