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文档简介

IPTG诱导表达,原核基因的表达调控,原核生物绝大多数基因按功能相关性成簇地串联、密集于染色体上，共同组成一个转录单位操纵子，如乳糖（lac）操纵子、阿拉伯糖（ara）操纵子及色氨酸操纵子。操纵子机制在原核基因调控中具有较普遍的意义。,原核生物的转录单位是操纵子，操纵子包括相关结构基因及其上游的调控序列。,结构基因,调控序列,乳糖操纵子（元）调节机制,乳糖操纵子,操纵子,P：启动序列O：操纵序列I：调节序列,I,P,O,CAP,调控区,ZYX,结构基因,ZYX,I,P,O,CAP,ZYX,I,P,O,CAP,乳糖（-）,乳糖（+）,要点,阻遏蛋白的负性调节真正的诱导剂是半乳糖异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）,pGEX-4T载体图谱,IPTG诱导表达实验步骤,第一天在超净台中将含有PGEX-4T-2空载体的甘油菌5ul接种在5ml的LB培养液中，摇床过夜。第二天将含有PGEX-4T-2空载体的过夜菌按照1:200比例接种至100mlLB中，37振荡培养2.5小时。留取1.5ml菌液作为未诱导培养的对照。在超净台中加入终浓度为0.4-1mM的IPTG于30诱导表达3.5小时。,蛋白样品制备,取1.5ml诱导后菌液及预先准备的未诱导培养的菌液离心，将沉淀部分加入相同体积的蒸馏水与上样buffer，将蛋白样品于沸水中加热10分钟，离心取上清进行SDS-PAGE，检测融合蛋白的表达情况。,开始转录,TTGACAAACTGT,-35区,(Pribnowbox),TATAATPuATATTAPy,-10区,原核生物启动子
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