白喉棒状杆菌及检验（课堂PPT）

第二十三章：需氧革兰阳性杆菌及检验检验系刘涛,1,棒状杆菌属,第一节,2,*G菌，菌体一端或两端彭大呈棒状而得名*菌体染色不均匀，出现节段浓染或异染颗粒*排列不规则，呈栅栏状，或L形，或V形*无荚膜、无鞭毛、不产生芽胞*多为条件致病菌，只有白喉棒状杆菌是致病菌,3,白喉棒状杆菌,4,CASE,患儿，男，6岁，咽痛、声嘶、咳嗽、发热3天；体温37，心率96/分，白细胞升高；亚碲酸钾培养+病史：百白破疫苗出生后三个月打了第一针，加强免疫因经济困难而未接种（家属说舍不得花钱，一针要40多元；孩子的父亲右手残疾）问题：什么病？患者和密切接触者需如何处理？,5,*白喉（Diphtheria）是一种急性呼吸道传染病,特征：患者咽喉部出现灰白色的假膜,假膜,6,一、生物学性状,7,1.白喉棒状杆菌的形态学特征,细长杆菌，粗细不一，一端或两端膨大呈棒状，排列不规则，呈栅栏状、V字形或L形。,奈瑟染色,革兰染色,8,1.白喉棒状杆菌的形态学特征,异染颗粒成分：核糖核酸+多磷酸盐作用：储存养料、鉴定价值,Albert染色,9,2.培养特性,*吕氏血清斜面培养物含凝固的血清，生长迅速，异染颗粒明显。*亚碲酸钾血平板黑色菌落。,还原,在亚碲酸钾血琼脂平板上的白喉棒状杆菌菌落（1824h）,亚碲酸盐,碲（黑色）,10,根据对亚碲酸钾的还原能力、菌落形态及生化反应可将白喉棒状杆菌分为3种类型：重型（gravis）、轻型（mitis）和中间型（intermedius）。,重型,轻型,菌落不溶血、不规则、有条纹,菌落溶血、光泽、凸起,11,3.变异,*白喉棒状杆菌形态、菌落和毒性均可发生变异。*无毒株溶原性细菌（产生外毒素）,噬菌体,12,4.抵抗力,*抗寒冷和干燥*对湿热抵抗力弱*对青霉素、氯霉素、红霉素敏感对磺胺不敏感,13,二、致病性与免疫性,14,1.致病物质：,*白喉毒素（diphtherotoxin）*索状因子（cordfactor）*K抗原（Kantigen）,15,2.致病机制,1）白喉外毒素：只有携带棒状杆菌噬菌体的溶原性白喉杆菌才能产生外毒素,外毒素结构：B亚单位：有结合和转位功能A亚单位：其上有1个催化区,作用靶位：心肌和神经细胞,16,2.致病机制,2）索状因子破坏哺乳动物细胞中的线粒体，影响细胞呼吸与磷酸化。,3）K抗原：抗吞噬,17,3.所致疾病：,*传染源：患者、恢复期带菌者、健康带菌者*传播途径：飞沫或污染（多在秋冬季）*临床表现：,白喉急性呼吸道传染病,18,*临床表现：1）细菌与毒素共同作用引起局部症状：炎症，坏死，纤维蛋白渗出，假膜导致窒息2）毒素入血引起全身中毒症状：外周神经炎：膈肌麻痹呼吸困难声带麻痹声音嘶哑软颌麻痹吞咽困难心肌炎,3.所致疾病：,19,20,1）人群易感性*普遍易感；*15岁儿童；*成人也有可能。,4.免疫性,21,2）免疫特点*抗毒素免疫；*感染后机体可获得牢固的免疫力；*机体还可通过其它方式获得免疫力：六月以下婴儿-母亲成人-隐性感染、疫苗,22,三、微生物学检查法,23,*标本：假膜边缘取材*涂片镜检：,革兰染色菌体颜色奈瑟染色典型菌体排列Albert染色异染颗粒,标本片,镜下特点,24,*分离培养：,标本,接种,吕氏血清斜面,37,612h,直接涂片镜检,接种,亚碲酸钾琼脂平板,培养,黑色菌落,1218h,灰白色小菌落,（快速诊断）,25,Elek平板试验白喉杆菌的有毒菌株可产生白喉外毒素，白喉抗毒素可与其特异性结合，中和白喉外毒素的毒性，可用细菌培养法和动物试验予以证实。【原理】Elek平板毒力试验是一种体外的毒力测定方法。通过观察白喉抗毒素与白喉外毒素的双向琼脂扩散现象，判断所培养的白喉杆菌的产毒性。【材料】1产毒素的白喉杆菌、类白喉杆菌及待测的白喉杆菌吕氏血清斜面24h培养物。2Elek琼脂蛋白胨培养基。3白喉抗毒素(1000u/m1)、马或兔血清(无菌)、无菌滤纸条(6.01.5cm)、无菌5ml刻度吸管、无菌平皿及镊子等。,26,【方法】1将Elek琼脂蛋白胨培养基10ml加热融化，待冷至5055时，加入无菌的马或兔血清2ml，立刻混匀，并倾注平板。2趁琼脂未凝固前，用无菌镊子将浸有白喉抗毒素(1000u/m1)的滤纸条(尽量使滤纸条上的抗毒素流尽)贴于平板中央，待琼脂凝固后将平板置37温箱内12h(平板面朝下)，使培养基略干燥。,27,3接种细菌，以接种环取产毒素白喉杆菌、类白喉杆菌和待检的白喉杆菌分别以与滤纸条成垂直的方向划线接种，接种线须密且集中，接种的菌量宜多。若用此法测未知标本需设阳性对照(产毒株)及阴性对照(无毒株)，一般每个平板可接种56个标本。置37培养24、48、72h观察结果。,28,【结果】注意观察在接种线两侧距滤纸条约1cm处有无与接种线呈45角的白色沉淀线出现。有沉淀者，白喉杆菌毒力试验阳性，该菌株产生白喉外毒素；无沉淀线者，白喉杆菌毒力试验阴性，该菌株不产生白喉外毒素。,29,*毒力鉴定：动物试验，Elek平板毒力实验,白喉杆菌菌苔,沉淀线(阳性),含白喉抗毒素滤纸