细胞生物学03PPT课件

.1，细胞生物学讲座：黄晓云。第二、三章细胞生物学研究方法，细胞形态结构观察方法细胞成分分析方法细胞培养，细胞工程和微操作技术，3，1节细胞形态结构观察方法，光镜(light microscopy)电镜(electro microscopy)扫描后显微镜(scanningtunneling microscope)，4，2节细胞成分分析方法，离心机技术细胞内核酸，蛋白质，酶，糖，脂质等标记方法特定蛋白质抗原的位置以及定性细胞内特定核酸的位置和定性放射自显影技术定量细胞化学分析技术，5，第三节细胞培养，细胞工程和微操作技术，细胞培养细胞工程，6，1，光学显微镜技术，普通复用光显微镜技术荧光显微镜激光共焦扫描显微镜。laserconfocallal microscopy，laser confocallal microscopy，laser confocallal microscopy，laser confocallal microscopy。7，2，电子显微镜，电子显微镜基本知识电子显微镜和光学显微镜的基本组成主要电子显微镜样品技术负染色技术冷冻蚀刻技术超薄切片技术电子显微镜三维重建技术扫描电镜(Sem)SPM(scanning pronmicroscope)、8、3、扫描后显微镜、scanningprobe microscope、SPM(检测80年代开发的样品微结构的仪器)包括：STM、AFM、磁显微镜、摩擦显微镜等原理：扫描探针接触或接近样品时，即产生量子力学中的隧道效应(隧道电流)、原子间力、磁、摩擦等相互作用力，并显示在计算机中，以反映样品表面形态信息、电特性或磁特性。设备：扫描压电陶瓷、近似设备、电子反馈控制系统和数据收集、处理、显示系统。特征：(1)无需复杂运算，就能成像晶体或非晶体，分辨率高。侧面分辨率为0.1至0.2 nm，垂直分辨率为0.01nm是。(2)可实时获得测量厚度信息的样品表面三维图像；(3)可在真空、大气、液体等各种条件下工作；无损测量。(4)通过连续成像进行轨道旋转的目的：作为纳米生物学研究领域的重要工具，在原子级别揭示样品表面的结构。9，普通复式光学显微镜技术，光固化样品制作分辨率为两个粒子之间分离的最小距离，10，利用荧光显微镜技术(fluorescence microscopy)、原理和直接荧光指示器技术进行间接免疫荧光指示器技术，用于在光的镜子级别对某些蛋白质等生物大分子的定性位置(如绿色荧光蛋白(GFP)。11，激光共焦扫描显微镜技术(laserscaningconfocacuminicroscopy)，原理应用：排除焦平面以外的光干扰，提高图像对比度(1.4-1.7)，重建样品的三维结构。12，相位差显微镜将光路径差或相位差转换为幅度差，从而实现活细胞差干涉显微镜(differential-interference microscope)适合研究活细胞中更大的细胞机图像增强显微镜的计算机辅助DIC显微镜，研究高分辨率活细胞的粒子和小器官的运动。13，电子显微镜与景象的比较，14，电子显微镜与光镜的光学显微镜比较，15，电子显微镜的基本结构，16、主电镜样品制备技术、超薄切片技术用于电镜观察的样品制备插图负染色技术(Negativestaining)和金属投影染色背景下样品的微结构冻结刻蚀技术(Freezeetching)(技术图)冻结破坏和蚀刻复合物：主要是膜破坏快速冻结深度刻蚀技术电子显微镜、电子衍射和计算机图像处理相结合形成的具有重要应用前景的新技术。电镜三维重建技术结合x射线晶体衍射技术和核磁共振分析技术，目前结构生物学主要是研究生物大分子空间结构及其相互关系的主要实验手段。与，17，扫描电镜，原理和应用：电子“探针”扫描刺激样品表面发射二次电子，探测器收集二次电子成像。CO2临界点干燥法可以防止引起样品变形的表面张力问题，18，1，1，离心技术，目的：微型和生物大分子及其复合物的微分离心：分离密度不同的细胞成分密度梯度离心：微成分或生物大分子的分离，19，2，细胞内核酸，蛋白质，酶，糖和脂质的显示方法，原理：某些显色剂与自己检测到的物质的某些特殊组特异性结合，使用显色剂的位置来确定细胞内某些物质的分布和含量。FeulgenStaining、20，3，特定蛋白质抗原的位置和定性，免疫荧光技术：快速灵敏、特异性、但有限分辨率(图)蛋白质电泳(SDS-page)和免疫印迹反应(western-blot)免疫电镜：免疫ferritin技术免疫细胞内酶的研究；膜蛋白的位置和骨架蛋白的位置等。21，4，细胞内特定核酸的位置和定性，光学显微镜水平的原位杂交(同位素标记或荧光标记)电子显微镜水平的原位杂交技术(连接生物素标记探针和抗生物素抗体)，22，5，辐射磁现象技术，原理和应用：利用同位素辐射磁显影对细胞内生物分子进行定性、定位和半定量研究；实现细胞内生物大分子的动力学及示踪研究。步骤：灯泡物质是细胞(标记：持续标记和脉冲标记)-辐射自显影，23，6。定量细胞化学分析技术、细胞显微镜分光光度法(microspectrophotometry)利用细胞内特定物质对特定光谱的吸收，测定核酸和蛋白质等物质的细胞内含量。包括：紫外显微分光光度法可见光显微分光光度法流式细胞术主要用于定量测定细胞的DNA、RNA或某些蛋白质含量。测定了细胞组中不同相细胞的数量。从细胞组中分离特定的染色细胞。分离DNA含量不同的中期染色体。，24，1，细胞培养，动物细胞培养类型：原代培养细胞(primaryculturecell)传代培养细胞(sub-culturecell)细胞株(cellstrain)，25，2，细胞工程，细胞融合和细胞杂交技术单克隆抗体技术也是细胞分解和微操作技术物理方法和微操作技术(图对其他技术遗传分析(mutant，knockeout，knockin)细胞生命活动的研究成为当今生命科学发展的瓶颈。26，对细胞生命活动的研究成为当今生命科学发展的瓶颈，细胞生命活动，突变分