胰腺癌动物模型设计方案及藤黄酸的药效研究

胰腺癌动物模型设计方案及藤黄酸作用胰腺癌的药效研究思路,背景介绍,实验方法及材料的选择,造模过程,模型特征,藤黄酸的抗癌药效研究,背景介绍,胰腺癌是一种恶性程度很高的、转移早、早期诊断困难的肿瘤,其发病率在近年呈逐年上升趋势。临床上尚无经济、有效的早期发现方法,也很难获得新鲜的、不同时期的胰腺癌组织标本,更不可能在临床上观察胰腺癌发生发展过程。因此建立合适的人胰腺癌动物模型,在胰腺癌的治疗研究中起着十分重要的作用。,实验方法及材料,方法选择：,对SD大鼠胰腺被膜及部分胰腺实质进行手术植入化学致癌剂二甲基苯并蒽(DMBA)，该法致SD大鼠胰腺癌发生率大概为65%，需3-5个月时间，未发现同时伴有肝脏、肺等器官的肿瘤发生，较适合探讨胰腺癌发病机理。,实验材料：,SD大鼠、二甲基苯并蒽（DMBA）、10%水合氯醛、动物手术器械及耗材、藤黄酸注射液、生理盐水,手术植入化学物质诱导法,造模过程,（禁食24h,不禁水）,称重后，10%水合氯醛（0.3ml/kg）腹腔注如麻醉,经上腹正中切口2cm进腹，暴露出胰腺,在普通环境中饲养大鼠,6-0无损伤线荷包缝合包埋药物于胰腺内,被膜分别置入6mg9mg的DMBA晶体包,于胰体尾部切开胰腺,根据DMBA用量的不同，随机分为胰腺癌模型组I（6mg，40只）和胰腺癌模型组（9mg，40只）,SD大鼠（150-200g,雄性）,对照组：选取25只作对照组，仅行使胰腺被膜切开、6-0无损伤线包缝合胰腺。,样本采集：随时观察大鼠精神状况，每周称大鼠体重。于术后1月、2月、3月、4月、5月、6月、7月分别处死胰腺癌模型组I、（5只/次）、对照组（3只/次），观察腹腔及胰腺病变，切取胰腺标本。,模型特征,外观：大体肿瘤0.5-1.5cm不等，灰白色，质地坚硬。肿块向四周浸润形成癌性粘连，几乎所有癌症大鼠伴有大量血性腹水。,免疫组化染色：每张切片分别观察10个高倍视野，每个高倍视野计数100个肿瘤细胞内的免疫染色阳性细胞数，计算出每张切片的阳性细胞百分数，按阳性细胞百分数分为小于10%为阴性，大于或等于10%为阳性。镜下癌细胞呈腺管样分布，腺腔大小不一，核异形明显，并可见癌细胞巢，胰腺腺瘤镜下瘤内可见粗大的纤维间隔，实质区细胞大小形态一致，囊性区常见片状出血坏死，并见较多的乳头状结构。,藤黄酸的抗癌药效研究,藤黄是藤黄科植物)所分泌的干燥树脂，藤黄酸(GA)是从藤黄中分离提取出来的一种抗癌有效成分。藤黄味酸涩、有毒,具有攻毒蚀疮、破血散结等功效,主治痈疽、肿毒、顽癣、恶疮。近年来研究认为藤黄具有抗肿瘤作用,临床上用于治疗乳腺癌、淋巴肉瘤、皮肤癌均取得一定疗效。据文献报道藤黄酸对S180、肝癌、艾氏腹水癌等多种动物移植性肿瘤均有明显的抑制作用,且对正常的造血系统无明显的影响,毒性较低,动物耐受良好。本实验通过观察藤黄的有效成分藤黄酸对胰腺癌动物模型的肿瘤生长抑制情况,以挖掘治疗胰腺癌的新药物。,藤黄酸（GA）概述,药效实验步骤,尾静脉注射,以第一次给药计为第0天，隔日给药1次，共4次，最后1次给药第2天处死并解剖癌症大鼠。,对照组：注射给药生理盐水(saline),试验组：注射给药GA溶液(8mg/kg),SD大鼠胰腺癌阳性模型（随机分成两组）,各组小鼠每天称重，并分别于灌注后第3天、第7天、第14天开腹，用精密游标卡尺测量肿瘤的最长径a和垂直最短径b，根据公式V=0.5ab2计算肿瘤的体积，并绘制肿瘤生长曲线；实验结束时，处死大鼠，剥离肿瘤，称取瘤重，根据以下公式计算肿瘤生长抑制百分率：TI(%)=(1-WT/WC)100%其中WT为治疗组的平均瘤重，Wc为对照组的平均瘤重