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文档简介
课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,尿素CO(NH2)2重要的农业氮肥。只能被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用CO(NH2)2+H2OCO2+2NH3,分离产生脲酶的细菌,一、课题背景,(一)筛选菌株KH2PO41.4gNaHPO42.1gMgSO4H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g琼脂15.0g将上述物质溶解后,用蒸馏水定容到1000mL。,该培养基的配方中,为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质?此配方能否筛选出产生脲酶的细菌?为什么?,?,碳源:葡萄糖、尿素,氮源:尿素,能。只有产生脲酶的细菌能利用尿素作为氮源而生存。,(一)筛选菌株1、选择培养基:允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。2、菌株:纯且活状态所保存的菌种。,(二)统计菌落数目:1、活体计数法(稀释涂布平板)(1)操作方法:稀释涂布平板统计菌落数(2)原理:1个菌落1个活菌(3)统计原则选30300个菌落的平板统计每个稀释度取3个平板取其平均值,例:两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中,得到以下两种统计结果。1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板,统计的菌落数为230。2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板,统计的菌落数分别为21、212、256,该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。你认为这两位同学的作法正确吗?如果有问题,错在哪?,甲:没有重复实验(至少涂布3个平板)乙:A组结果误差过大,不应用于计算平均值,?,(二)统计菌落数目1、活菌计数法(4)统计结果:统计的菌落数往往比活菌的实际数目低,因此统计结果一般用菌落数表示。每克样品中的菌株数=(C/V)*MC:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数;V:所用稀释液的体积;M:稀释倍数。,2、显微镜直接计数,利用选择培养基进行尿素分解菌的分离过程中,从对应稀释倍数为106的培养基中,A、B两同学分别得到以下两种统计结果。1、A同学筛选出150个菌落。2、B同学筛选出50个菌落。B认为A的培养基被杂菌污染了,或培养基中混入了其他含氮物质,因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培养基中生长。A确认自己的操作无误,但也拿不出能令人信服的证据。请你帮助A同学改进实验,提供具有说明了的证据。,设置对照同等条件下,培养空白培养基,?,(三)设置对照1、设置对照的目的:排除实验组中非测试因素对实验结果的影响,提高实验结果的可信度。对照实验是指除了被测试的条件外,其他条件都相同的实验。满足该条件的称为对照组,未满足该条件的称为实验组。,四、实验过程,(一)土壤取样(1)取样的位置:土壤,天然培养基,含有大量的微生物,其中7090是细菌。在富含有机质的土壤层的38cm处中分布着绝大多数的细菌。(2)取样要求:铲去表层土。,(二)样品稀释(1)测细菌数:一般用104、105、106稀释液(2)测放线菌:一般用103、104、105稀释液(3)测真菌数:一般用102、103、104稀释液原则:确保平板上的菌落数在30300之间。(三)微生物的培养与观察1、接种:用适当的稀释液作涂布平板2、培养:细菌:3037,12d;放线菌:2528,57d;霉菌:2528,34d.3、观察:a.每24h统计一次菌落数目b.以“稳定菌落”为观察对象,(1)对样品进行系列稀释(2)用适当的稀释液涂布平板,在一定的培养条件下(相同的培养基、温度及培养时间),同种微生物表现出相同而稳定的菌
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