设计性实验报告植物可溶性蛋白质和糖含量的测定

设计性实验报告题目：植物可溶性蛋白和糖含量测定植物可溶性蛋白和糖含量测定课程名称：课程名称：基础生物化学实验学期：实验学期： 2011年至2012年学年第一学期植物组织可溶性蛋白和糖含量测定摘要本文以莴苣、苹果为材料，采用乌贼亮蓝法(蛋白质)，结果报告如下结果莴苣蛋白质含量为5.88(mg/g )，糖含量为0.0739g/100g，苹果中蛋白质含量为0.2926(mg/g )，糖含量为0.2126g/100g。 也就是说，生菜中蛋白质的含量比苹果高，但苹果中糖的含量更高。 关键词可溶性蛋白、可溶性糖、高斯亮蓝G-250染色法、蒽酮法含量测定1、材料和方法、材料和方法1.1蛋白质含量测定标准蛋白质溶液、商业蓝试剂、莴苣、苹果分光光度计、离心机、乳钵、烧杯、电子秤、移液管、 试管等1.2糖含量测定200ug/ml标准葡萄糖、蒽酮试剂、浓硫酸、生菜、苹果试管、水浴锅、分光光度计、乳钵、电子秤、移液管、量筒、试管架2、实验顺序， 实验步骤蛋白质含量的测定(柯氏蓝蛋白含量的测定(柯氏蓝G-250G-250染色法)2.1标准曲线的制作取6根试管，按下表加入试剂，均匀，试管加入5ml柯氏蓝试剂，均匀，5min左右以蛋白质的含量为横坐标，以吸光度为纵轴制作标准曲线。 管号试剂012345测定标准蛋白质(ml) 00.200.400.600.801.00蒸馏水量(ml) 1.000.800.600.400.200蛋白质含量(ug) 020406080100 2.2样品，提取2.2.1样品，生菜、 分别取0.250.5g苹果生鲜样品，用蒸馏水5ml或缓冲液均匀研磨后，以3000r/min离心10min，制备上清液。 2.2.2取样提取液1.0ml (蛋白质含量适度稀释)，放入试管中，加入5ml乌司琼蓝试剂，摇晃，放置2min后用595nm比色，测定吸光度，用标准曲线调查蛋白质的含量。 糖含量测定糖含量测定2.3 .葡萄糖标准曲线的制作，取冷试管6根，编号，根据下表数据制备了一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。 在各管中加入0.5ml的蒽嵌苯试剂，再慢慢加入5ml的浓度H2SO4，摇晃后，打开试管栓，在沸水浴中煮沸10分钟，冷却至室温，在620nm的波长下比较颜色，测定各管溶液的光密度值(OD )，以标准葡萄糖含量为横轴、光密度值为纵轴，制成标准曲线2.4 .在可溶性糖的提取中，取出1克鲜菜叶和苹果，切成块放入乳钵，加入少量蒸馏水，制成匀浆后，转移到20ml的刻度试管中，用10ml的蒸馏水分洗涤乳钵，合成洗涤液转移到刻度试管中。 在沸腾水浴中煮沸10分钟，冷却后以3000r/min离心10min，滤液收集到100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容到刻度，均衡准备。 2.5 .糖含量测定用移液管将提取液1ml吸收到20ml堵塞试管中，加入水1ml和蒽嵌苯试剂0.5ml。 再缓慢加入5ml浓度H2SO4(注意：浓硫酸碰到水会产生大量热量)试管栓塞后，轻轻摇动放入沸水浴10分钟(比色空白是将蒸馏水2ml和蒽嵌苯试剂0.5ml混合，用沸水浴保温10分钟)。 冷却至室温后，以波长620nm进行比色，记录光密度值。 调查标准曲线，可知对应的葡萄糖含量(g )。3.3、结果记录和处理、结果记录和处理3.13.1 (蛋白质)管号012345莴苣苹果蛋白质含量(ug，x)0204065080100yy1yy2吸光度(nm，y ) 00.1650.2560.3850.4860.5970.4990.1830.183散布图标准曲线0.10.20.30.40.50.60.702040080100120蛋白质含量吸光度根据计算上的表可以使用y=0.00547x 0.0496表示的样品中的蛋白质含量=(C*Vt/(Vs*Wf*1000) (mg/g )式： C标准曲线值， 因为ug Vt提取液的总体积、ml Wf样品的鲜重、g Vs测定时的样品量ml，所以生菜中的蛋白质含量=5.88(mg/g )苹果中的蛋白质含量=0.2926(mg/g) 3.23.2 (糖) 管号123456莴苣苹果的葡萄糖含量(ug，x)04080120160200y1y22吸光度(nm )，y ) 00.01980.2870.4790.5890.7410.7390.7390.7800.780散布图通过计算糖含量标准曲线0.10.20.30.40.50.60.70.80501005350葡萄糖含量吸光度(nm，y )上表示， y=0.00347x 0.0424所示样品中的糖含量(g/100g生重) (计算得到的糖含量(ug)*稀释倍数)/(样品重量(g)*106)*100中，生菜样品中的糖含量=0.0739g/100g苹果样品中的糖含量=0.2126g/100g 4 4 苹果中蛋白质含量为0.2926(mg/g )，糖含量为0.2126g/100g。 也就是说，生菜中蛋白质的含量高于苹果，但苹果中糖的含量高于生菜。 5、收获体验、收获体验生物学是基于实验的自然科学，现代生物科学的发展依赖于科学实验。 在生物教育中，实验、学习和观察等实践环节对我们掌握生物学知识、科学方法，培养我们的手腕能力，形成科学素质发挥着重要作用。 因此，我们从接触生物这一学科开始，继续进行生物实验课，锻炼我们的各种能力。 生物化学是一门严格的课程，对于它的每一步，我们都必须认真操作每一步，认真读取数据，根据其规