纸色谱与薄层色谱法ppt课件

纸色谱和薄层色谱，实验15，1，1 .实验目的，1 .了解色谱对化合物的定性分析和纯化原理2 .熟悉并掌握薄层色谱和纸色谱的基本操作。 2，2 .实验原理，(1)色谱法的基本原理是，利用混合物中各成分对某物质的吸附或溶解性能(分配)的不同，或者其亲和性的不同，使混合物的溶液流入该物质，进行反复吸附或分配的作用，分离各成分. 根据分离的原理，可分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱、亲和色谱等，根据操作条件可分为柱色谱、纸色谱、薄层色谱、气相色谱等3、(2)薄层色谱、薄层色谱中常用的TLC，根据其作用机理，吸附薄层色谱、分配薄层色谱等，基本原理是分离的混合物通过溶剂(流动相)和固定相时，各组理化性质存在差异， 两相发生相互作用(吸附、溶解、结合等)的能力不同，两相分配(含量的对比)不同，并且随着溶剂向前移动，各组不断在两相进行再分配。 与固定相的相互作用越弱的成分，伴随流动相的移动的阻挡作用越小，向前方的移动速度越快。 相反，与固定相的相互作用越强的成分，前进速度越慢。 通过逐步收集流出液，可以得到样品中含有的各单一成分，达到分离各成分的目的。 4、薄层色谱的优点：适用于少量样品(数数十微克)的分离纯化样品，特别是挥发性小或温度容易变化，因此适用于气相色谱无法分析的物质。 5、(3)纸色谱、纸色谱主要用于多功能团和高极性化合物的分析和分离。 基本原理是以纸为载体，以纸中含有的水分和其他物质为固定相，用展开剂展开的分配色谱。 在供试品展开之后，可以用比较移位值(Rf )表示各构成成分的位置，但是，影响比移位值多，因此，通常在相同的实验条件下与对照物质进行比较来确定异同。 作为药品的鉴别，供试品在色谱中出现的主要斑点的颜色(或荧光)和位置，必须与对照品在色谱中出现的主要斑点相同。 作为药品的纯度检查，取一定量的试验品，展开后，如各药品项中规定的那样，调查其出现的杂质斑点的个数和显色(或荧光)的强度。 Rf=溶液最高浓度中心到原点中心的距离/溶剂前端到原点中心的距离。 6、纸相色谱示范，7，3 .实验试剂和仪器，甘氨酸、亮氨酸水溶液，2种氨基酸分别为等体积组成的混合液，展开剂为5:4:1的水-正丁醇-冰醋酸(体积比)，2%的氨醇溶液。 大试管1根、滤纸(2*15cm )、喷雾1根、吹风机1根、毛细管(口径1mm )数根、直尺1根、铅笔1%偶氮苯的苯溶液、1%苏丹的苯溶液、1%羧甲基纤维素的钠(CMC )水溶液、硅胶g、9:1的一个乳钵，台秤，5张载玻片(7.5 * 2.5厘米)，一个烤箱，一个广口瓶。 8，4 .操作顺序，(1)，薄层色谱偶氮苯与苏丹III的分离，9，(1)，薄层片的制备：将硅胶g和CMC溶液制成均匀的糊状，用滴管涂抹在干净的载玻片上，取下薄层片，放置在水平台上在室温下晾干，110下60分钟放在干燥箱里。 (2)、点：从底边开始1cm处画横线作为起始线，点的直径不得超过2mm。 点间距离约为1.8cm，点时应注意不要损伤薄层表面。 样品溶液含水量越小越好，样品溶液含水量越大，斑点扩展越大，如降落伞。3个样品分别为偶氮苯和混合液、混合液和苏丹、偶氮苯和苏丹、10、 (3)展开：广口瓶预先用展开剂(9:1的苯酐-乙酸乙酯)饱和，将样品薄的片材放入装有展开剂的广口瓶中，薄的片材浸入展开剂的深度距薄的片材底边约0.7cm (样品不要浸入展开剂)，将密闭室盖等按规定距离(从薄层板的端部开始取出薄层板，尽快画横线晾干，测定显色点和开始线的距离和溶剂上升的距离，计算比移值。 11、(二)纸相色谱氨基酸纸相色谱，(一)取两张新华一号滤纸，分别用铅笔从下端约1cm处开始，用尺从中间折叠，左右两侧约1.8cm的距离，试剂分别为亮氨酸和混合酸、甘氨酸和混合酸。 展开剂为5:4:1的水正丁醇冰醋酸(2ml )。 展开剂在2/15cm的大试管上。 (2)展示开始剂上升约7厘米后，取出终点线在红外灯下干燥。 (3)干燥后喷洒2%的胆碱溶液使其显色。 (4)采集薄层片，分别着眼亮氨酸和甘氨酸，用展开剂5:4:1的水正丁醇冰醋酸展开。 (5)测定显色点和开始线的距离和展开剂的上升距离，计算比较移动值。 12、装置图、薄层色谱法、纸色谱法、13、5 .注意事项、1 .制备薄层片材后必须活化、去除水分的样品2 .样品直径不得超过2mm。 指定一些采样点的时间间隔必须是11.5厘米。 如果一次样品不够，可以多次订购，但溶剂挥发后再次订购，需要防止量多产生拖尾现象3 .使用的滤纸质量均匀平整，实验中手不接触滤纸表面，避免污染4 .两根滤纸用大试管碰撞不可将样品点浸泡在展开剂中5 .溶质展开后分散，选择其最高浓度中心6 .在滤纸上散布苯胺醇时，雾状散布，使液滴不可在其表面凝聚，液滴在其表面流动，