试验出凝血检查PPT课件

1、血凝检查、上海交通大学医学部馀文红、2、(1)血液标本采集应注意的问题、3、1.PT、APTT血凝实验使用静脉血。 采血者应技术熟练，防止组织损伤，防止外源性凝血因子进入针管。4，2 .一般的血液采集，从进入容器到进行实验的时间越短，所分析的凝血因子越受到保护。 不宜从输液三通管中取出血液。5、3 .采血时患者应放松，环境温暖，防止静脉挛缩，尽量减小止血带的压力，采血时拉针的速度应缓慢均匀，使血液顺畅地进入注射器，防止气泡的产生。6、4 .取样完毕后，立即与抗凝剂充分混合，一般提倡使用真空采血血管。 7、5 .用硅化玻璃或塑料注射器采血。 考虑到结果的准确性，试管刻度的可能误差应控制在规定体积的10%以内。8、6 .采血后标本在低温下保存，在一定时间内。9、7 .国际血液学标准化委员会(ICSH )、国际血栓止血委员会(ICSH )推荐3.2 g/dl (含2 h2o )或0.109mol/L柠檬酸钠作为凝血因子检测的抗凝剂。 10、8 .抗凝剂血液标本的绝对含量可以改变血浆中钙离子浓度，进而影响试验结果，因此必须根据患者的红细胞比例(Hct )随时调节抗凝剂的用量。11、(2)试剂应注意的问题是，12、1 .组织凝固酶工作制剂的国际敏感指数(ISI )，不同敏感性的组织凝固酶在PT中得到同样的结果，必须制定共同的敏感性指标。13、2 .凝血酶和部分活化凝血酶的应用程序应严格按照说明书进行。 通常，使用前要充分混合试剂，使微粒子再次均匀地悬浮在液体中。 14、3 .试剂的准备请使用去离子水。15、4 .正常对照血浆通常混合健康人的血液标本，以弥补个体误差。16、(3)使用实验器材需要注意的问题是，2222222222222222222222222652、18、2 .温度要求：人工测量终点法需要将水浴箱的温度保持在(371)，且周围的照明设备良好，终点容易读取。19、(4)实验操作需要注意的问题是，20、1 .很多试验误差都是由于技术错误引起的。 实验技术、试剂、温度及pH的微小变化可以明显改变实验结果。 21、2 .手工PT或试管法CT检查时，试管倾斜动作轻，角度小，减少血液与管壁的接触面积。22、3 .凝血主要是酶催化反应，因此在实验中必须严格控制理想的pH环境和溶液离子强度。23、4 .实验结果取决于所使用反应物的量、添加顺序和不同反应物的孵化时间。24、5.APTT、PT缺血小板血浆。25、6 .试验前检查血浆是否有溶血、黄疸、血脂和凝块。26、7 .报告方式：以PT的秒数(s )报告。 以患者PT(s)/正常对照(s )之比(PTR )报告。 口服药物治疗监测时应用INR报告。 ICSH规定不以百分比(活动度)报告。 APTT以秒报告。 27、1987年WHO将PT值以INR (国际标准化国际标准化比)作为PT结果报告形式提出，作为抗凝治疗监测的指标。 28，INR=患者PT(s)/正常人平均PT(s)ISIPTR=受试者PT(s)/正常对照PT(s)INR=PTRISIISI :国际敏感指数(internationalsensitivityindex )1 1.9， 29，CT，PT，APTT，RT 30凝血时间测定，CT，31，目的：了解玻璃试管法凝血时间测定的方法，32，原理：离体静脉血接触玻璃表面后，血中XII因子激活启动内源性凝血途径，最终生成纤维蛋白凝血所需的时间。、33、器材：直径6mm的玻璃试管3根静脉采血器材37恒温浴池的秒表、34、顺序： 3根试管分别为1ml的血，每0.5min倾斜一次，第一管计时后立即观察第二、三管，计时直至血液凝固。 结果表明，从血液刚进入注射器后到第3管凝固的时间为血液凝固时间。35、正常参考值：412分钟报告方式： CTX.Xmin (玻璃试管法)、36、注意事项：试管清洁干燥，采血应“一针见血”，血液中不含泡沫。 温度一定为37，试管倾斜的角度请控制在30度左右。37、评价：凝血时间采用玻璃板法测定，由于毛细血管采血容易混入组织液，因此凝血时间正常，是淘汰方法。 延长：严重内源性凝血途径的凝血因子中存在缺陷的血液抗凝物质增多的肝素治疗缩短：高凝血状态(DIC早期)、38、凝血酶原时间PT、39、原理：血小板不足血浆加入组织因子和钙离子(钙凝血活性酶)后血浆凝血的时间为凝血酶原时间(PT )。 40，步骤：取空腹静脉血1.8ml混入含109mmol/l柠檬酸钠的试管中。 抗凝血以3000r/min分离血浆，试剂与健康人血浆混合，测定血浆和37预热5min。 在血浆0.1ml中加入混合试剂0.2ml，启动秒表。41、正常参考值： PT:1113秒PTR:10.15INR:0.81.5、42、报告方式： PT:X.Xs、正常人血浆X.XsPTR:X.XINR:X.X、43、注意事项：试管清洁干燥、采血为“一针见血”、抗凝剂与血液的比率(1:9)正确采血后4h内完成测定。 钙凝产酶应附加国际敏感指数(ISI )，ISI越接近1.0越敏感。 测定标本前要测定健康人的混合血浆，如果其PT值不在允许范围内就不能测定标本。44，评价：血浆凝血酶是筛选试验，用于证实先天性或获得性纤维蛋白原、凝血酶和凝血因子v，VII，x缺陷或相应抑制物的存在，监测口服抗凝治疗时凝血酶和因子VII，x水平的下降。45、实质：样品(血浆)存在凝血酶时的再钙化反应包括因子VIIa、组织因子、磷脂、钙离子激活凝血酶原、凝血酶分解纤维素和纤维素的凝聚交联。46、活化部分凝血酶时间测定APTT、47、原理：白陶土活化XII因子、脑磷脂代替血小板磷脂，测定血小板缺乏血浆加入Ca2凝固所需时间。48，步骤：空腹静脉血1.8ml 0.2ml109mmol/L柠檬酸钠混合。 分离血浆3000r/min，离心10分钟分离血浆。 溶解试剂暂时加入蒸馏水1ml，在室温下静置15min以上，混炼后使用。 混入0.1ml预温活化血浆APTT试剂0.1ml，在37下正确加入3min (其间轻轻振荡数次)和钙，加入0.1ml的25mmol/lcca2混合，立即移动秒表，20s后观察混合液的流动状态。49、正常参考值：一般33.6840.32s (不同仪器和试剂测定参考值有差异)报告方式： APTT:XX.Xs、正常人血浆： XX.Xs、50、注意事项：采血时穿刺见血，不出淤血或气泡，采血后立即与抗凝剂混合，尽快进入实验室使用柠檬酸盐(抗凝)血浆不能立即测定时，应尽快分离血浆，装入装有血浆的容器，改变PH值，防止血浆在28下保持7天，应加上国际敏感指数(ISI )，ISI越接近1.0越敏感。51、临床意义：APTT延长：表明有内源性凝血途径相关因素缺陷(血友病)和纤维蛋白原缺损。 纤维活力增加，如继发性、原发性纤溶和血液循环中纤维蛋白(原)降解物(FDP )。 血液循环中有抗凝固物质。52、APTT缩短： DIC的高凝固期、凝固促进物质进入血液、凝固因子的活性上升等。53、评价：APTT与PT同时检测是目前二期止血缺陷的主要筛选试验组合。. 54、临床出血前提： APTTPT除正常延长因子VII缺陷延长正常因子VIII、IX、XI缺陷正常可疑因子XIII缺陷延长因子II、v、I、x缺陷外，主要表明异常抗凝物质增加，55、血浆钙化时间RT、56、原理：原理将0.2ml0.1mol/L草酸钠静脉血1.8ml混合，分离血浆。 将0.1ml血浆放入37水浴中，0.025mol/LCaCl20.1ml，立即移动秒表记录时间。 58、正常参考值：2.080.49分钟(2.183.77分钟)、59、注意事项：请勿溶血。 否则，可缩短时间新鲜制备CaCl2，分离血浆以1000转/分钟分离，高速离心可使大量血小板沉降，延长恢复钙的时间。 60、钙包复交叉时间RT、61、步骤：试样量12345被检血浆(ml)-0.010.050.090.10正常血浆(ml)0.100.090.050.01-加入上述试管，在37下加入1 min、0.025mol/LCaCl20.1ml 、62、注意事项：所用血浆均为富血小板血浆，分离血浆后应在2h内完成检测。63、临床意义：RT最初作为内源性凝血相关凝血因子缺陷的筛查，但该试验不及APTT，易受血小板数和功能的影响，因此目前仅筛查有无病理性抗凝物质。64、延长的钙包复时间被修正为1/10量的正常血浆时，如果不被修正为所检测血浆中显示内源性凝血因子不足的少量正常血浆，则表明存在异常的抗凝血物质。65、血浆纤维蛋白原Fg、66、纤维蛋白原的测定方法很多，基本上可以根据加入凝血酶后形成纤维蛋白原的方法，凝固纤维蛋白原。 物理化学测定法。 免疫学测定法。67、目的和原理、68、了解凝血途径最后部分的情况，可选择本试验，例如纤维蛋白原减少、排除异常对凝血筛查试验的影响、了解纤溶活度等。69、Clauss法用凝血酶作用于被检血浆中的纤维蛋白原，形成纤维蛋白原，凝固血液。70、纤维蛋白原的量与凝血时间呈负相关，测定结果与参考血浆制备的标准曲线相比，可以得到纤维蛋白原的含量。71、步骤：将参考血浆用血浆稀释液稀释至原来倍、1:2、1:4、1:8、1:16的5管. 将0.2ml稀释血浆放入试管中，在37水浴中预热2分钟，加入凝血酶溶液0.1ml，记录时间。，72，关联分析：首先清除存储器。 INV AC、浓度(log或In)XD、YD输入(在不取对数的情况下为XD、YD读取值DATA输入； 所有数据输入完成后，按INV 9读取相关系数r。 读取应测定的值INV log或In关联浓度。 如果不取对数，则测定的读取值直接读出INV x关联浓度。 最终浓度取决于样品稀释倍数的乘积。、73、标准曲线：t(s ) 2520158525252525252525252525352535253525352535253525352535253535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353 不足53535353535353535353535353535353535353535353535353535353530.8g/l时，将原血浆稀释为1:2或1:5，用标准曲线检查结果后，除以5或除以2。75，正常参考值：24mg/ml，76，临床意义：纤维蛋白原升高除生理压力、妊娠后期外，主要表现为感染、烧伤、动脉粥样硬化、急性心肌梗死、多发性骨髓瘤、糖尿病、败血症等。 纤维蛋白原减少可见于DIC、原发性纤溶亢进、重型肝炎、肝硬化和溶栓治疗时。77、评价：Clauss法测定的是纤维蛋白原功能，因此纤维蛋白原结构正常且需要一定的含量，低(无)纤维蛋白原血症及其后的纤维蛋白原血症必须采用ELISA和RIA等免疫测定手段。78、主要误差来源：血浆不许稀释。 凝血酶活性不足或发生故障。 凝血酶一般应在低温下保存，稀释后可在塑料(聚乙烯)试管中于4保存活性24小时。测