微生物的培养与观察

第三课,实验设计,土壤取样,制备培养基,样品稀释,取样涂布,培养,观察并记录结果,肥沃、湿润。,注意：小铁铲和盛装的信封都要灭菌。,土壤要求：,先铲去表层土3cm左右，再取样，并装入事先准备好的信封中。,取样要求：,制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。,稀释操作：,制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,注意事项：,涂布操作：,注意事项：,温度和时间要求：,细菌：303712d放线菌：252857d霉菌：252834d。,每隔24h统计一次菌落数目。,菌落数目稳定时的记录。,记录时间要求：,最终结果：,原因：防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。,1.使用前对试管做好标记，在酒精灯火焰附近称取土壤10g。2.在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在酒精灯火焰附近进行3.试管及其中9mL水、移液管都要灭菌；转移液体后要吹吸三次4.若是初次实验,对于稀释的范围没有把握,可将稀释的范围放宽一点，如可将103-107倍的稀释度分别涂布并培养，以保证选出在30300间的平板进行计数。4.实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养。,原因：不同的微生物在土壤中的含量是不同。,目的：保证获得菌落数在30300之间、适于计数的平板,如：细菌：104、105、106放线菌：103、104、105真菌：102、103、104,样品稀释,1.做好标记：使用前在培养皿的底部注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。,2.若同一稀释度下得到了2个或2个以上菌落数目在30300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，若三个重复的菌落数相差较大，表明实验不精确，需要重新实验。,取样涂布,微生物的培养与观察,在一定的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征,仔细观察分离的菌落，若有不同的菌落，最好以表格的形式将不同菌落的特征记录下来,操作提示,无菌操作,做好标记,规划时间,目的:避免混淆,目的：提高工作效率，在操作时做到有条不紊,通过对照实验，若培养物有杂菌污染，菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。,结果分析与评价,1.培养物中是否有杂菌以及选择培养基是否筛选出一些菌落,2.样品的稀释操作是否成功以及重复组的结果是否一致,选择每个平板上长有30300个菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。,若得到了2个或2个以上菌落数目在30300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。,思考：,一、以尿素作为唯一氮源的培养基分离出的微生物,1.只是一种细菌吗？,2.都是能分解尿素的微生物吗？,不是，有多种。芽孢杆菌、小球菌、棒状杆菌、某些真菌、放线菌等,不一定，有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物进行生长繁殖,因此，要对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助生物化学的方法。,二、请你提供一种方法，判断分解尿素的细菌确实能将尿素分解成氨,在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。接种并培养该细菌后，若指示剂变红，说明该细菌确实能够分解尿素。,原理：,分解尿素产生的氨，使培养基的PH升高,测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到伊红美蓝培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记算得出水样中大肠杆菌的数量。,滤膜法,目的菌株,稀释涂布平板法,显微镜直接计数法,滤膜法,C,B,是否能在选择培养基