细菌内毒素检查结果准确性的影响因素ppt课件

细菌内毒素检测结果准确性的影响因素，一、试验误差分析和改进措施对鲎试剂的质量和灵敏度表示有价值的影响细菌内毒素工作标准品的有效性和使用影响实验仪器的影响样品成分和理化性质影响实验员的影响环境的影响，一、鲎试剂的质量和灵敏度表示有价值的影响鲎试剂的质量：耐诺鲎试剂的敏感度误差是否用国家标准细菌内毒素来测定？标准值是否正确？ 2 )内毒素标准品引起的误差细菌内毒素标准品种的内毒素标准品的效价误差细菌内毒素标准品的操作误差细菌内毒素单位表示误差细菌内毒素标准品的误用，1 ) 内毒素标准品种内毒素国际标准品细菌内毒素国家标准品内毒素标准品的内毒素作业标准品2 )细菌内毒素标准品的效价误差细菌内毒素国家标准品与细菌内毒素标准品之间， 或者细菌内毒素标准品与细菌内毒素标准品之间的生物效价存在一定误差，用不同的细菌内毒素标准品探讨同批鲎试剂的灵敏度时可能存在一定误差。 中国药典要求“c在0.5- 2(含0.5和2)时，可用于细菌内毒素检查，标记灵敏度为该鲎试剂的灵敏度”。 试验结果显示，如果在该合格范围内，鲎试剂的显示灵敏度是正确的。3)去除内毒素标准品的操作误差，取细菌内毒素的工作标准，轻击瓶壁，将粉末倒入瓶底，再用砂轮轻轻刮到瓶颈上部，用75%酒精棉球擦拭后打开，防止玻璃屑落入瓶中。 正确，错误，注意：只能在安瓿的易折点上部打开内毒素，不能沿着易折点打开，防止在振动中内毒素附着在封口膜上。 用细菌内毒素检查用水再溶解细菌内毒素的标准品只能取1ml。 使用细菌内毒素国家标准品时，可按照其使用说明书中记载的方法稀释至规定浓度进行分注保存。 如果是细菌内毒素的工作标准品，一次性使用。4)一些客户使用厂家生产的内毒素研究鲎试剂的灵敏度是错误的行为，而使用厂家生产的内毒素研究鲎试剂的灵敏度是严重的错误行为。3 )实验器具的计量管理(校正)器具的选择标准器具的正确处理；1 )器具对选择标准鲎试验器具的要求：刻度正确、内表面光滑、易于清扫。 细菌内毒素检查实验不宜选择注射器，最好使用校准刻度的滴管或吸嘴。 注射器刻度不准确，内壁磨砂面吸附内毒素，特别注意导入注射器针的铁离子对试验结果的干扰，因此不应选择注射器。如果使用量少，使用频率不高，因此建议选择本公司提供的一次性消耗品。 无热原消耗品是该行业认定无内毒素和-葡聚糖污染的产品，其中包括无热原试管、无热原移液管芯片。 这些产品能给你的工作带来很大的便利，另外，如果实验中有误差，可以先排除仪器因素，立即分析判断误差的原因。 2 )器皿的正确处理2005年版中国药品检验标准操作规范页细菌内毒素检查法“实验准备”是“用洗涤剂和自来水洗涤洗涤的玻璃器皿，干燥水分后，在洗涤液中浸泡4小时，切除洗涤液，用自来水洗涤，再用蒸汽洗涤，用蒸馏水干燥后，适当的密闭金属应该特别注意。 该规章明确规定，最后清洗玻璃容器时“必须禁止用蒸馏水清洗，用精制水清洗”。“用反渗透制备的精制水洗涤试验用玻璃器具，试验中的阳性都是对比的，对比研究鲎试剂的灵敏度，试验结果的误差大主要是因为精制水和蒸馏水的品质不同。 由于纯化水中存在的阴阳离子在250的高温干燥下不能完全被破坏，不同的离子会发生抑制或增强鲎试剂酶反应的反应，为了保证试验结果的正确性和检测报告的权威性，我们必须严格遵守操作规程，用高效的蒸馏水清洗鲎试验用玻璃器皿4样品成分和理化性质的影响-葡聚糖样物质的影响PH值的影响金属离子和弱酸阴离子的影响药物浓度的影响，1)-葡聚糖样物质的影响常见现象：假阳性。 鲎试剂的特异性是指在药品、生物制品和血液制品中鲎试剂能够正确检测出被检物质内毒素的能力，既不能引起样品内毒素的检测遗漏，也不能将其他物质误判为内毒素。 目前我们的研究表明，能与鲎试剂反应的物质已知有细菌内毒素和-葡聚糖，但内毒素反应曲线是s型的特征曲线，-葡聚糖反应曲线是通过0点的斜线。 鲎试剂特异性差的另一个表现是将其他物质(如-葡聚糖)判定为内毒素，误判合格药品不合格，导致制药公司直接经济损失。 鲎试剂的反应结构图，判断假阳性的方法： 1、特异性鲎试剂法； 2 .定量反应曲线分析法3，兔模拟法。2)PH值对反应速率的影响常见现象：样品阳性不成立。 鲎试剂和内毒素反应最适合的pH为6.5-8.0的pH3或10时，酶活性受到抑制。、相对活力、PH、7.0、PH对反应速度的影响：影响了酶原活化的酶分子的构象，过高的PH改变了酶的活性中心的构象，或改变了整个酶分子的结构使变性失活。因此，鲎试验的情况下，供试品的pH最好事先调配6.5-8.0，必要时可以用没有内毒素的HCl或NaOH稀溶液调节pH。 美国、日本药局及中国药局的2005版规定，检验品必须调节ph6.08.0。3 )金属离子和弱酸性阴离子对细菌内毒素的测定结果有很大影响，另一方面，阳离子例如Fe3、Al3强度在大会中引起内毒素的凝聚，内毒素的局部浓度过高，同时高价的阳离子(例如Fe3) 的氧化性对鲎试剂酶反应有很强的抑制作用，Ag、Cu2、Pb2等重金属离子可以使改性蛋白质的酶失活，而鲎试剂必须在二价阳离子Ca2、Mg2的参与下活化形成凝胶反应。 多数药物在ph10时，其阴离子吸收鲎试剂中的Ca2、Mg2离子，使实验呈假阴性。4 )药物浓度1，10 %葡萄糖注射液2、白蛋白、牛血清3、医用透明质酸钠4、中药类注射液5实验员的影响严格遵循操作程序，在安瓿打开前用酒精棉球擦拭曲颈部，折断颈部，防止碎屑落入安瓿内。 鲎试剂的溶解、样品的稀释以及取样时必须正确。 一个人独立完成试验，稀释内毒素标准溶液和样品溶液配制，然后溶解鲎试剂，最后加入样品，尽可能缩短鲎试剂溶液暴露在空气中的时间(希望控制在15分钟以内)。 6、环境影响保温时间保温温度1 )保温温度57348； 将细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查水稀释至2，进行鲎试验后，分别置于25、28、31、34、37、41、43、46、49的水浴保温中。 实验观察到凝胶形成的速度随着温度的上升而加快，但达到49，保温90min后仍未出现凝胶。实验表明，温度对鲎试剂的灵敏度有很大影响，保温温度在2541之间，随着温度的升高，反应速度也升高，41还没有达到反应速度的峰值，在25下反应速度相当快的4146之间，温度对鲎试剂的灵敏度没有显着影响，在49以上随着温度的上升，酶蛋白逐渐变性，鲎试剂被破坏，反而降低了反应速度。2 )保温时间用细菌内毒素检验水将细菌内毒素标准品稀释至2，进行鲎试验，在37下保温，分别在10、20、30、40、50、70min下观察，结果