动物实验课件

实验动物的麻醉,一、常用麻醉剂1、挥发性麻醉剂1)乙醚2)氯仿2、非挥发性麻醉剂1)巴比妥类2)水合氯醛3)乌拉坦,3、中药麻醉剂1)洋金花2)“麻服散”,实验动物的麻醉,二、麻醉方法1、全身麻醉1)吸入法2)腹腔静脉2、局部麻醉1)盐酸普鲁卡因2)盐酸可卡因,实验动物的麻醉,三、影响麻醉因素1、动物因素1)年龄和体重2)性别3)生理健康状况2、环境因素1)温度2)湿度3)空气流速、清洁度,四、麻醉注意事项1、静脉注射缓慢2、药液浓度适中3、注意保温,常用麻醉剂的用法及剂量,实验动物的采血,一、小、大鼠剪尾采血眼眶后静脉丛采血断头采血心脏采血腹主动脉采血,实验动物的采血,一、小、大鼠1.剪尾采血割去尾尖0.30.5cm每鼠可采10次以上小鼠每次0.1ml大鼠每次0.30.5ml,实验动物的采血,一、小、大鼠眼眶后静脉丛采血刺入深度小鼠23mm,大鼠45mm2)小鼠每次0.2-0.3ml3)大鼠每次0.51ml,实验动物的采血,一、小、大鼠3.断头采血猛剪鼠颈,约1/24/5颈部剪断2)小鼠0.8-1.2ml3)大鼠510ml,实验动物的采血,一、小、大鼠4.心脏采血刺入右心室,吸取血液2)小鼠约0.5-0.6ml3)大鼠约0.81.2ml,实验动物的采血,一、小、大鼠5.腹主动脉采血腹正中线皮肤切开腹腔,腹主动脉清楚暴露2)无齿镊子剥离结缔组织,夹住动脉近心端,尖头手术剪刀,剪断动脉,二、豚鼠1.耳缘切口采血1)耳消毒,切口边缘涂抹20%柠檬酸钠2)锐器割破耳缘,血自动流入容器3）可采血约0.5ml。心脏采血1)心跳最明显部位,胸骨左缘正中2)动作迅速,缩短留针时间3)抽不出血时,将针头稍微后退,实验动物的采血,二、豚鼠3.足背正中静脉采血1)脚背面酒精消毒2)左手拇指和食指拉住豚鼠趾端3)右手拿注射针刺入静脉4)纱布或脱脂棉压迫止血,实验动物的采血,实验动物的采血,三、兔1.耳静脉采血拔毛,使静脉扩张2)末梢端刺破血管待血液漏出取血,棉球压迫止血3)可采血510ml,实验动物的采血,三、兔2.耳中央动脉采血中央动脉末端,沿动脉平行地向心方向刺入动脉6号针头,不要太细可采血15ml,实验动物的采血,三、兔3.心脏采血1)第三肋间胸骨左缘3毫米处注射针垂直刺入心脏2)动作迅速,缩短留针时间3)抽不出血时,将针头稍微后退4)针头不应左右摆动,防止伤及心、肺5)一次可采血2025ml,常用实验动物的最大安全采血量与最小致死采血量,实验动物处死,安乐死是指在不影响动物实验结果的前提下,使实验动物短时间无痛苦地死亡。1、颈椎脱臼处死法左手拇指、食指用力向下按压鼠头及颈部,右手抓住鼠尾根部用力拉向后上方,造成颈椎脱臼,脊髓与脑干断离。,实验动物处死,2、断头处死法左手按住实验动物的背部，拇指夹住实验动物右腋窝，食指和中指夹住左前肢，右手用剪刀在鼠颈部垂直将鼠头剪断，使实验动物因脑脊髓断离且大量出血死亡。击打头盖骨处死法抓住实验动物尾部并提起,用木锤等硬物猛烈打击实验动物头部,使大脑中枢遭到破坏,实验动物痉挛并死亡。,实验动物处死,4.放血处死法将实验动物的股动脉、颈动脉、腹主动脉剪断或剪破、刺穿实验动物的心脏放血，导致急性大出血、休克、死亡。5.空气栓塞处死法向实验动物静脉内注入一定量的空气，形成肺动脉或冠状动脉空气栓塞，或导致心腔内充满气泡，心脏收缩时气泡变小，心脏舒张时气泡变大，从而影响回心血液量和心输出量，引起循环障碍、休克、死亡。,实验动物处死,6.过量麻醉处死法快速过量注射非挥发性麻醉药(投药量为深麻醉时的30倍),或让动物吸入过量乙醚,使动物中枢神经经过过度抑制,导致死亡。7.毒气处死法实验动物吸入大量CO2等气体而中毒死亡。,第五节动物实验基本设计,一、设计原则1.对照（antitheses）性原则：是要求在实验中设立可与实验组比较，用于消除各种无关因素影响的对照组。空白对照：不施加任何处理因素实验条件对照：不用处理因素，但施加某种与处理因素相同的实验条件。标准对照：用现有标准方法对照，如已知有效药物、公认标准疗法。,2随机（random）化原则动物实验一般采用完全随机分配或分层随机分配。小动物实验一般先配对或配伍，然后“对”内或“伍”内进行随机分配大动物多半先分层，然后在层内随机分配。,3重复（repetition）的原则指同一处理要设置多个样本例数降低试验误差。应该在保证实验结果具有一定可靠性的条件下，确定最低的样本例数,一般估测的样本数小动物(大鼠、小鼠、蛙、鱼)：每组10-30例,计量资料每组不少于10例,计数资料每组不少于30例；中等动物(豚鼠、家兔)每组8-20例,计量资料每组不少于8例,计数资料每组不少于20例；大动物(犬、猫、猪、羊等)每组6-20例,计量资料每组不少于6例,计数资料每组不少于20例.,按统计学方法测算的样本数n=22(t+t)2/2n为样本含量，为标准差；t取有显著性的t分布值，t0.05=1.96；t为无显著性的t分布值，1-为实验检验能力，动物实验一般取1-=0.80，t0.20=0.842；为处理组与对照组均值间的差异，可从预实验或文献资料库中获得。,举例：给某种动物饲喂一种药物，预实验中每月体重增长比对照增加3015g（均值标准差）。设显著水平为95%，检验能力为80%，则正式实验所需样本含量n为：n=2152（1.96+0.842）2/302=3.93即每组只需4只动物。,二、基本设计方法单组比较设计指在同一个体上观察实验处理前后某种观测指标的变化。优点：能排除个体间生物差异。缺点：不适用于在同一个体上多次进行实验和观察的情况。,配对比较设计指实验前将动物按性别、体重或其它有关因素加以配对，以基本相同的两个动物为一对，配成若干对，然后将一对动物随机分配到两组中。优点：减少两组实验误差及动物间的个体差异。缺点：应考虑种属、品系、性别、年龄与体重、同父母、同胎次出生等因素对实验结果的影响。,举例：为研究VitE缺乏饲料对大鼠肝脏中VitA含量(u/mg)的影响，选取同性别(雌、雄各半)、同月龄(断乳1个月)、同体重(50g+2g)等正常大鼠配成10对，对每对中每只大鼠按随机数字表(或抽签)随机分配到给以正常饲料组和VitE缺乏饲料组，分饲条件相同的不同笼中，经1个月饲食后杀掉，按每对分别取肝脏，测得VitA含量(u/mg)如表。,完全随机化设计将动物随机分配到处理组及对照组做实验观察。优点：统计分析也比较简单，抗数据缺失能力较强。缺点：对非实验因素缺乏有效控制，适用于实验对象同质性较好的实验设计。,举例：为比较小白鼠接种3种不同菌型伤寒杆菌(9D、11C、DSC1)后存活日数的差异，选择同品系、性别(雌、雄各半)、体重(土1s)、月龄(土2天)、生理精神状态、饲养条件等小鼠30只，依随机数字表随机分为3组，在相同条件下接种菌苗，后观察存活日数如下表。,随机区组设计在动物实验时，可将一窝小鼠或大鼠划为一个区组，确定数个区组后，按区组随机化原则将各区组的动物随机分配到处理组和对照组。优点：均衡性好，可减少误差，提高实验效率，统计分析也较简易。缺点：抗数据缺失能力较低。若一个区组的某个动物发生意外，那么整个区组都得放弃，或不得已采取缺项估计。,举例：有人用4种不同种系的未成年大鼠做实验，每一种以同窝雌大白鼠3只，随机分配注射3种不同剂量的雌性激素(mg/100g)后，在相同条件下称其子宫重量(g)，见表：,析因设计可以分析多种交互作用，但一般采用较简单的析因试验。当水平和因素过多，不但计算复杂而且解释困难。举例：观察绝经促性腺激素(HMG)、绒促激素(HCG)及其交互作用，随机将20只幼雌大白鼠分成4组。第一组空白，第二组每天注射HMGl个单位，第三组每天注射HCG20单位，第四组每天HMGl单位、HCG20单位，一定时间后取卵巢称重，以每10g大白鼠体重卵巢mg数表示(mg/10g)，结果如表：,三、实验结果变异分析实验间变异处理会使对照组和实验组平均度量值发生变化，即实验间变异。降低实验间效应变异将减少对同一实验的重复性。实验结果必须是建立在可重复实验的基础上。,实验内