第三章 人源性生物制品

,生化制品技术,第三章人源性生物制品,生化制品技术,一、人源性生物制品特点与种类（一）人源性生物制品特点:1.效价高、疗效可靠（纯化生物制品效价提高）2.安全性好、不易产生副反应（防止感染）3.稳定性好（相对原料）4.资源有限（通过现代生物技术解决）,第四章人源性生物制品,（二）人源性生物制品种类:,目前可作为生产原料的人体成分限于血液、尿液、胎盘、毛发等。1.血液制品（全血、血蛋白、血细胞）2.尿液制品（尿激酶、尿抑胃素、HCG）3.胎盘制品（人胎盘丙种球蛋白、胎盘白蛋白、HCS）4.人体液体细胞中的活性成分（IFN，细胞因子、白介素）,1.血液制品,血液制品：由健康人的血或血浆，特异性免疫人血浆分离、纯化或由基因工程技术制备的血蛋白或血细胞等成分。（1）全血来源：采血后添加抗凝剂（枸橼酸盐-葡萄糖溶液）使用：主要用于补充红细胞和血容量（失血超过40%），作用迅速。缺点：保存时间短，使用受限（裂解残留物），免疫反应，传播疾病,主张成分采血，成分输血：按照“缺什么，补什么”的原则输用，以达到治疗病人的目的。纯度高，针对性强，提高输血疗效并减少体循环负担减少输血的不良反应和病毒的传播一血多用，充分利用宝贵的血液资源,2.血液成分制品,表1人血液成份及其制品-血液有形成份血浆制品备注-红细胞1、“少浆血”常用2、浓缩红细胞常用4、滤过红细胞常用5、年轻红细胞少用6、照射红细胞少用白细胞1、白细胞2、粒细胞去淋巴细胞血小板1、单（机）采血小板2、浓缩血小板-,表1人血液成份及其制品-血液成份（无形）血浆制品备注-血浆1、普通冷冻血浆2、新鲜冷冻血浆白蛋白1、白蛋白制品球蛋白1、静注丙种球蛋白多用2、肌注丙种球蛋白少用凝血因子VIII1、人凝血因子VIII浓缩剂多用2、重组人因子VIII制剂少用3、猪凝血因子VIII浓缩剂-,表1人血液成份及其制品-血液无形成份血浆制品备注-凝血因子II、VII、1、凝血酶原复合物（PCC）2、人因子IX浓缩剂IX、X3、重组人凝血因子IX4、转基因因子IX制剂纤维蛋白原1、纤维蛋白原制剂2、冷沉淀（因子I）抗凝血酶1、抗凝血酶制剂其他（特殊免疫相应制剂球蛋白、转铁蛋白等）-,“少浆血”指红细胞比容（Hct）在53%60%并剩有部分血血浆的血液。适用于血容量丢失在20%25%（10001500ml）的出血。慢性贫血，如再障、缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、肾性贫血、消化道失血所致贫血等。浓缩红细胞（压积红细胞）指Hct在70%80%和剩有少量血浆的血液。适应证同“少浆血”。,（1）红细胞制剂,浓缩红细胞（压积红细胞）,浓缩红细胞可以在全血有效保存期内任何时间分离出部分血浆制备而成，一般用二联袋采集的全血制备浓缩红细胞。（1）用二联袋采集1单位或2单位全血于主袋内；（2）将全血在42离心，离心力5000g,离心7分钟，沉淀红细胞；（3）取出离心后全血，将部分血浆分入空的转移袋内（4）用热合机切断塑料袋间的连接管，制备成浓缩红细胞。,洗涤红细胞指用生理盐水洗涤三次的红细胞，本品中仅含1%的血浆蛋白和20%的白细胞。适用于下列疾病伴贫血免疫性疾病；自身免疫性溶血性疾病；阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）；输血性溶血反应；新生儿溶血病的换血疗法；照射红细胞、冻红细胞、年轻红细胞,主要为浓缩白细胞适应证：各种原因所致中性粒细胞低于0.5109/L，虽然中性粒细胞在0.5109/L以上，但伴有高烧或感染，特别是单用抗生素不能控制者。新生儿败血症,（2）白细胞制品,剂量：有效输注量是每天至少1010个中性粒细胞。不良反应：非溶血性输血反应，如寒战、发热、呼吸困难，甚至出现肺水肿和休克等。注：粒细胞离体很快失去功能，高效抗生素及细胞集落刺激因子出现、白细胞制品应用减少。白细胞还用于生产干扰素,（一）制品的种类1、浓缩血小板悬液（PC）400ml新鲜全血分离制成的PC，规定内含4.81010个血小板，容量5070ml。2、单采血血小板一般每袋含231011个血小板。,（3）血小板制品,浓缩血小板：1）全血采集于三联袋或四联袋主袋内；2）采后4-6小时内，于222存放或轻度离心，以离心力1220g离心5分钟或700g离心10分钟，使红细胞下沉，大部分血小板保留于血浆中为PRP层；3）将上层PRP分入第二转移袋内；4）把第三袋内的红细胞保存液加入主袋压积红细胞内，用热合机热合切断主袋与第3转移袋之间的连接塑料管。在主袋与第2血袋间塑料管内留取红细胞与血浆为血样品管；,5）把第2PRP袋协同第三转移袋重度离心，温222，以离心力4650g，离心6分钟，或3000g，离心20分钟，使血小板下沉于底部形成沉淀；6）分离上层少血小板血浆进入第3转移袋内，留下20-30ml(1单位全血所分出的血小板）或50-70ml（2单位全血所分血小板）血浆于第二血小板袋内；7）制备的血小板应放入血小板保存箱内。,血细胞分离机采集血小板,目前各种型号的血细胞分离机已广泛应用采供血机构和医院。严格按照细胞分离机的操作程序进行操作，能获得高浓度和高纯度的血小板。,血小板制品输注适应证：再障、急性白血病和恶性肿瘤行强烈化疗、放疗后血小板低于20109/L，或有其他危及生命的严重出血倾向者。心肺旁路手术行体外循环和骨髓移植患者于移植前血小板降至50109/L以下者。,急性免疫性血小板减少，在分娩、手术、创伤或有危及生命的严重出血时。原发性或继发性血小板功能异常症，在有自发性出血倾向或在分娩、创伤、手术时。大量输注贮存血液或药物所致血小板减少性出血。,（4）血浆制品,血浆：常用的血浆种类包括新鲜液体血浆、新鲜冷冻血浆（FFP）、普通冷冻血浆、冷沉淀这四种。前种是从采血之日起5天内从全血中制备的血浆，但缺少因VIII、因子V和血小板；后种是采血后6小时之内制备的血浆，但缺乏血小板。,1）新鲜液体血浆：,制备工艺：用三联袋采集全血，于采后6小时内经第一次5000g的离心力离心7分钟，分出上层血浆。再将血浆第二次以5000g的离心力离心5分钟，分出清除红细胞成分的血浆即为新鲜液体血浆；制备浓缩血小板后所得到的少血小板血浆和制备血小板、白膜后剩余的少血小板血浆可用作新鲜液体血浆。适用于：扩容、补充凝血因子,2）新鲜冰冻血浆(freshfrozenplasma,FFP),制备工艺：新鲜液体血浆立即放入-50的速冻箱，在最短的时间内迅速冷冻血浆，经完成速冻的血浆再放入-20以下的冰箱保存。从采血到冰冻过程应在8-24小时之内完成。,2)新鲜冷冻血浆适应证:单纯凝血因子缺乏、口服抗凝剂过量引起的出血肝病患者获得性凝血障碍大量输血伴发的凝血障碍抗凝血酶III（ATIII）缺乏免疫缺陷综合征血栓性血小板减少性紫癜(TTP)禁忌证:同普通冰冻血浆,3）普通冷冻血浆FP制备工艺：普通液体血浆立即放入-20以下的冰箱内冷冻保存新鲜冰冻血浆保存一年后，可改为普通冰冻血浆；制备冷沉淀后所得的血浆在-20以下冰箱冰冻并保存，也可作普通血浆之用。,适应证：严重肝脏疾病、凝血因子缺乏香豆素类药物作用的逆转、心脏直视手术、大量输血、弥散性血管内凝血（DIC）烧伤，抗凝血酶III（ATIII）缺乏症、血栓性血小板减少性紫癜（TTP）、血浆置换禁忌证：对血浆蛋白有过敏者，血容量正常的老、幼患者，心功能不全者。,3、血浆蛋白制品,血浆蛋白制品：人血浆中分离制备的有明确临床疗效和应用意义的蛋白总称。近年来已知的血浆蛋白质有二百多种，有些蛋白质的功能尚未阐明。将其中主要的血浆蛋白质含量及功能归纳如表10-1。,（1）白蛋白,白蛋白（又称清蛋白，albumin,Alb）：由肝实质细胞合成，在血浆中的半寿期约为15-19天，是血浆中含量最多的蛋白质，占血浆总蛋白的40%-60%。,白蛋白制剂的种类：人血白蛋白血浆蛋白成分两者的区别主要在于含白蛋白的纯度不同，前者为96%以上，后者为83%以上。制备工艺：用乙型肝炎疫苗免疫的健康人血浆，经低温乙醇蛋白分离法提取，并经病毒灭活处理制成。用重组DNA技术制备重组血浆蛋白制剂。,血浆,Cohn6法工艺流程,Cohn6法工艺流程,问：低温乙醇法中影响蛋白质沉淀反应的因素？,应用：维持和调节血液渗透压白蛋白产生的渗透压大而粘度低，是最有效的血容扩张剂。为组织提供营养白蛋白能结合阳离子，也能结合阴离子，故能输送性质不同的物质，如脂肪酸、激素、金属离子、酶和药物运输和解毒结合有毒物质运送至解毒器官，然后排出体外；,A、pH当pH位于等电点时，蛋白质的溶解度最小，所以最易沉淀以根据蛋白质的等电点不同顺序沉淀出不同的血浆蛋白。通常低温乙醇法是在pH4.4-7.4之间进行分离.B、温度温度低，蛋白质的溶解度低。溶液中加入乙醇，因乙醇的水合作用，会产生放热现象，而温度升高可能造成蛋白质的变性，所以在低温乙醇工艺中，整个过程均应控制在0-8。如温度控制不当，轻则会影响蛋白质的得率，重则引起蛋白质变性。,C、蛋白质浓度如果溶液的蛋白质浓度较大，容易引起多种蛋白共同沉淀，所以在分离过程中，可将蛋白质溶液作适当的稀释，以减少蛋白质之间的相互作用，避免多种蛋白共同沉淀，但过分稀释，蛋白质易变性，同时增大分离的容量，也不可取。所以应选择适宜的浓度。在低温乙醇工艺中，蛋白质浓度范围为：0.2-6.6%D、离子强度盐类与蛋白质的互相影响随离子强度而变化。在低盐溶液中，盐浓度的很小改变即可引起蛋白质溶解度的极大变化。离子强度用r/2表示。低温乙醇法工艺中离子强度的变化范围在0.01-0.16。正常人血清的离子强度接近于0.15。,E、乙醇浓度乙醇能降低蛋白质溶液的介电常数，随着乙醇浓度的增加蛋白质溶液的介电常数逐渐降低，而其溶解度急剧下降。在低温乙醇工艺中，乙醇的浓度范围在0-40%。在五变系统中，对蛋白分离最重要的变化因素是PH和乙醇浓度。,（2）免疫球蛋白制品,免疫球蛋白（immunoglobulin）：指具有抗体活性的动物蛋白。主要存在于血浆中，也见于其他体液、组织和一些分泌液中。人血浆内的免疫球蛋白大多数存在于丙种球蛋白（-球蛋白）中。按结构可以分为：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE五类按功能应用可分为：正常人免疫球蛋白、特异性球蛋白、静脉注射免疫球蛋白,1）正常人免疫球蛋白,又称丙种球蛋白或多价免疫球蛋白(简称丙球)，仅供肌肉注射用，所以又称肌注免疫球蛋白制剂。是采用低温乙醇法从大量混合血浆（药典要求1000人份以上）中分离制得的免疫球蛋白浓缩剂。有液体剂型和冻干剂型两种。,主要作用：主要用来预防一些病毒性感染，如甲肝、丙肝、麻疹等疾病的预防以及丙种球蛋白缺乏症的治疗。注:国内滥用正常免疫球蛋白的现象比较严重。一些人认为经常使用丙种球蛋白可以“增强抵抗力”或“有益无害”。事实上滥用丙球不但无益，而且可能产生免疫依赖等副作用。,不良反应：正常人免疫球蛋白只能用于肌肉注射，因此，剂量有限且作用慢。对于需要大剂量用药的病例，必须进行静脉注射。而如果将肌注丙球用于静脉注射，多数患者会发生程度不同的类过敏反应，如头痛、恶心、发热、胸闷，甚至血压下降，意识丧失。如果患者有丙球缺乏症，则发生不良反应的危险性更大。,特异性免疫球蛋白：是由对某些病原微生物具有高滴度抗体的血浆制备的特异的高效价免疫球蛋白。与正常免疫球蛋白不同，此类制剂必须具有至少一种高滴度抗体，用于临床上特定疾病的预防和治疗。,2）特异性免疫球蛋白,种类目前用于临床的特异性免疫球蛋白有十余种，较常用的如：乙肝免疫球蛋白甲肝免疫球蛋白破伤风免疫球蛋白、狂犬免疫球蛋白、风疹免疫球蛋白、水痘免疫球蛋白等。,A、乙型肝炎免疫球蛋白（HBIG）,HBIG是先用乙肝疫苗免疫供血浆者，然后采集富含高效价抗-HBs的血浆，低温乙醇蛋白分离法或经批准的其它分离方法提纯，并经病毒灭活处理制成，有液体和冻干两种剂型，主要用于乙肝的预防，尤其在阻断母婴垂直传播中有明显的效果。,B、破伤风免疫球蛋白（TIG）TIG系筛选经破伤风类毒素免疫过的供浆员，加强免疫后采集含高效价破伤风抗体的血浆，经低温乙醇蛋白分离法或经批准的其它分离方法提纯，并经病毒灭活处理制成。采用经批准的人用破伤风疫苗和免疫程序,C、狂犬免疫球蛋白（RIG）RIG是采用人用狂犬疫苗免疫供血浆者后，采集含高效价狂犬病抗体的血浆，经低温乙醇蛋白分离法或经批准的其它分离方法提纯，再经病毒灭活处理制成。采用经批准的人狂犬疫苗和免疫程序进行免疫。,3、补体系统蛋白制品,补体系统（complementsystem）：一组存在于人和脊椎动物正常新鲜血清中的非特异性球蛋白。补体系统是由20多种不同的血清蛋白组成的多成分系统，占血清总蛋白10%。作用：溶解和杀伤作用免疫粘附作用趋化作用过敏毒素作用促进血凝作用,4、凝血系统蛋白制品,正常情况下，当血管破损，血小板聚集，凝血酶生成，交联纤维蛋白在聚集血小板的基础上形成，巩固用于堵住伤口的塞子。继而激活纤溶系统，溶解多余的纤维蛋白，避免形成血栓栓塞，最终修复破损的血管，以维持血管的完整和通畅。,凝血因子纤维蛋白血小板血管内皮促凝功能,血流抗凝蛋白纤溶蛋白血管内皮抗凝功能,TheHemostaticBalance,出血,凝血,凝血过程,（1）、凝血因子VIII（FVIII）冷沉淀凝血因子：保存期内的新鲜冰冻血浆，在16的条件下融化后，分离出沉淀在血浆中的不溶解物质，并冻结而成的制品。注：冷沉淀要在-20-30冰冻保存，输注时还要融化。特别是作为家庭治疗就太麻烦。,凝血因子VIII浓缩剂：,大混合血浆（5005000个献血者血浆）制备此产品,新鲜冰冻血浆内的冷沉淀作为起始原料，进一步用硅胶胶吸附、甘氨酸或聚乙二醇纯化，最后冷淡干燥冻干燥制成。可分为中纯度及高纯度。中纯度一般为毫升含第VIII因子活性1520单位；高纯度可达2540单位。,VIII因子浓缩剂与冷沉淀相比有高活性（1520单位毫升）、高稳定性和可溶性已知制品瓶中第VIII因子单位数，可准确计算输注剂量并且体积小，便于运输、储存、再配制及使用，可在家庭或工作场所随时自己注射治疗。,适应症：,冷沉淀含有第VIII因子，还含有纤维蛋白原（浓度相当于血浆内的5倍）及其他血浆蛋白（如第XIII因子和纤维结合蛋白）。甲型血友病，纤维蛋白原、第XIII因子缺乏症和Willebrand病的患者使用。清除非毒性物质、细胞粘连、炎症、创伤愈合中起重要作用。,VIII因子浓缩剂含高纯度的第VIII因子，用于治疗甲型血友病，不能用于治疗血管性假血友病及无纤维蛋白原血症。,(2)、凝血酶原复合物浓缩剂（prothrombincomplexconcentrates，PCC),凝血酶原复合物：从健康人混合血浆中分离制备的1种能促进血液凝固的静脉注射血浆蛋白制剂。PCC主要含有依赖于维生素K的凝血酶原（F）、凝血酶原转化因子（F）、抗血友病乙型因子（F）和自身凝血酶原（F）其理化性质极为相似，商品PCC几乎都含有上述4种因子,制备工艺：,PCC的制备方法，都是使用无机盐吸附剂（如硫酸钡、磷酸三钙、氢氧化铝）或离子交换吸附剂（如DEAE纤维素和DEAESephadexA50及DEAESepharoseFastFlow）。这些吸附剂的特性允许为治疗目的从人血浆中大规模制备含F、F、F、F4种凝血因子的浓缩物。,无机盐吸附剂方法制备PCC,是用EDTA抗凝的血浆，再以枸橼酸钠洗脱，随后经乙醇沉淀。磷酸三钙作为吸附剂制备的PCC，再用超滤法或PEG沉淀法获得浓缩物，磷酸三钙吸附的PCC制剂中，F含量比F高,离子交换吸附剂方法制备PCC,血浆、或去冷沉淀血浆（冷上清）作为PCC分离的起始原料PCC中的F、F、F、F4种凝血因子都有低的等电点，通常使用离子交换剂吸附。以阴离子交换剂DEAE纤维素和DEAESephadexA50广泛使用。,适应证：血友病B（hemophiliaB）严重肝脏疾病：如重症肝炎、肝硬化等。血浆凝血酶原时间（prothrombintime,PT)延长患者的手术维生素K缺乏症DIC,(3)人血纤维蛋白原,纤维蛋白原（xianweidanbaiyuan）：一种由肝脏合成的具有凝血功能的蛋白质，是纤维蛋白的前体。分子量340000，半衰期46日，血浆中参考值24克/升。制备工艺：方法步骤为：（）冻血浆融浆；（）乙醇组分沉淀；（）离心；（4）乙醇组分沉淀；（）乙醇组分沉淀；（）原液制取。,适应症：,先天性低纤维蛋白原血症、原发性和继发性纤溶引起的低纤缩蛋白原血症,（三）血液制品安全性,1、经血液制品传播的疾病：病毒：目前经输血传播的病毒包括HIV、肝炎病毒（包括乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒等）、微小病毒B19（B19V）、巨细胞病毒（CMV）和EB病毒等。细菌：梅毒螺旋体、耶尔森菌、葡萄球菌、链球菌等。病原虫：输用疟疾流行区的血液或红细胞制品，有可能传染疟疾。,2、血液制品安全的综合性保证系统（三重安全网）（1）加强血源管理（2）加强原料血浆的筛检（3）核心生产技术血浆蛋白分离方法和病毒去除/灭活方法,（3）血液制品中病毒去除/灭活方法,灭活物理法加热方法（巴斯德消毒法）、紫外照射、美蓝荧光照射。化学法有机溶剂结合/表面活性剂(S/D法)、低PH发法，理化结合法-丙内脂/紫外照射法,去除病毒色谱法,2、人尿液制品,正常人尿是人代谢排出的无菌的液体，并且已知尿中含有50多种物质，其中95左右是水，无机物质：钠、钾、氯、硫酸盐、磷酸盐、铵盐、钙离子等；有机物质：尿素、尿激酶、表皮生长因子、生长激素、促红细胞生长素、促性腺激素、血管舒缓素和抗肿瘤肽类物质等，都是对人体有益的物质。,（1）尿液中的生物活性物质,尿激酶激肽释放酶尿抑胃素人尿胰蛋白酶抑制剂人绒毛膜促性腺激素促红细胞生长素,尿激酶,人血液中的尿激酶原在部分降解后从尿液中排出的一种丝氨酸蛋白酶，为血纤蛋白溶酶原激活剂，可将纤溶酶原转化为纤溶酶。该品主要用于血栓栓塞性疾病的溶栓治疗：急性心肌梗塞、急性脑血栓形成和脑血管栓塞、肢体周围动静脉血栓、中央视网膜动静脉血栓及其他新鲜血栓闭塞性疾病。以及肾移植、整形外科手术等出现的血栓形成，均有较好的疗效。,激肽释放酶,一种丝氨酸蛋白酶，能使激肽原释放出一种多肽激肽，它具有很高的生理活性，在人体组织中起着十分重要的生理作用。发现激肽释放酶激肽系统（kallikreinkininsystem，KKS）作为一个复杂的内源性多酶系统，参与调控心血管、肾脏、神经系统等的生理功能，与心脏病、肾病、炎症反应、癌症等疾病的发生有着密切关系。,尿抑胃素,是从妊娠妇女的尿中提取出HCG(绒毛膜激素)之后所分离到的一种高分子糖蛋白抑制胃分泌盐酸的一种肠胃激素。其结构与人的表皮生长因子相同。还能促进表皮生长。在临床上主要用于治疗十二指胃溃疡,人绒毛膜促性腺激素(HCG),人绒毛膜促性腺激素是由胎盘的滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，,绒膜促性腺激素,人绒毛膜促性腺激素(HCG)由胎盘滋养层合体细胞分泌的一种糖蛋白。,适应症：,（1）维持月经黄体的寿命，使月经黄体增大成为妊娠黄体；（2）促进雄激素芳香化转化为雌激素，同时刺激孕酮形成；（3）抑制植物凝集素对淋巴细胞的刺激作用，人绒毛膜促性腺激素可吸附于滋养细胞表面，以免胚胎滋养层细胞被母体淋巴细胞攻击；（4）刺激胎儿睾丸分泌睾酮，促进男性性分化；（5）能与母体甲状腺细胞TSH受体结合，刺激甲状腺活性。,胎盘为胎儿进行营养、呼吸和排泄的器官，并产生分泌素。当分娩时，先是子宫收缩，然后子宫口扩张，胎儿突破羊膜产出，结扎并剪断脐带；最后子宫再次收缩，由底蜕膜的海绵层与子宫壁分离，将胎盘及胎膜排出。,3.胎盘制品,人胎盘作为补药在我国已有1000多年的历史了.本草拾遗中便以“胎胞”和“胞衣”加以记载。本草纲目中称胎盘为“紫河车”。“味甘或咸”、“性温”，具有“安心养血、益气、补精、解毒、补血”的作用，对“疲劳、消瘦、衰弱者”有奇效.人胎盘中含有多种维生素和酶，如卵泡激素、黄体激素、催乳素、溶菌酶、激肽酶、蛋白酶等,(1)人胎盘血白蛋白,健康人胎盘血液经盐析、辛酸钠处理的方法或卫生部批准的其他适宜方法提取，经6010小时加温灭活病毒素制成。白蛋白含量96%以上，含适宜的稳定剂，不含防腐剂和抗生素，专供静脉输注,制造工艺,提取：采用硫酸铵盐析、酸沉淀以及辛酸钠保护下的热处理等步骤，自胎盘浸液中提取白蛋白，纯化：并结合适宜的吸附剂吸附，或低温乙醇分段沉淀等处理步骤进一步提纯。（应含适量的稳定剂，每g蛋白质加0.16mmol辛酸钠或0.08mmol辛酸钠和0.08mmol乙酰色氨酸钠）。热处理：每批制品经600.5加温10小时处理。热处理可在除菌过滤前或分装后24小时内进行。,分批：同一制造工艺、同一容器混合的制品作为一批。不同滤器除菌过滤或不同机柜冻干的制品应分为亚批。半成品检定：液体制剂于除菌过滤后应做理化检查及热原质试验，并应按亚批抽样做无菌试验。冻干：除菌过滤后，制品应及时分装、旋冻，并按人血白蛋白制造及检定规程1.2.5项规定进行冻干。,适应症：,失血创伤及烧伤等引起的休克。脑水肿及大脑损伤所致的颅压升高。防治低蛋白血症。肝硬化或肾病引起的水肿或腹水。新生儿高胆红素血症。,(2)促性腺激素释放素（GnRH）,促性腺激素释放激素是下丘脑分泌产生的神经激素，对脊椎动物生殖的调控起重要作用向雌性动物注射促性腺激素，可以促进其超数排卵。对供体雌性动物和受体动物注射促性腺激素，提高胚胎在受体雌性动物体内的成活几率。,(3)人胎盘免疫调节因子(HumanPlacentalImmunoregulatoryFactorHPIF,HPIF具有免疫调节活性,能提高机体的细胞免疫和体液免疫水平。动物试验及临床应用证明:使用安全、无毒副作用、无抗原性。HPIF是一种较为理想的免疫调节剂。,制备工艺：,健康新鲜胎盘,洗净、剪去脐带、羊膜及大血管,剪碎,称重,加生理盐水,再用匀浆器捣碎,于低温冰箱及室温中反复冻融数次透析(各家不全相同,有的用静置法透析3648小时;有的用负压透析12小时;有的则用超滤代替透析),取透析液定浓度,除菌过滤后分装安瓿,封口,第二节人体来源生物制品制备实例（Exampleofbio-preparateapplicationtohuman）一、人血浆白蛋白制剂的制备（preparateofhumanbloodplasmaalbumin）血（无抗凝剂）自然凝固分离出血清（无纤维蛋白酶原、凝血因子等）,血+混合抗凝剂,草酸铵草酸钾,离心,上清血浆,总蛋白：6.2-7.9%白蛋白：3.8-4.8%水：90-92%,（现常用肝素、柠檬酸钠）,（1）结构和性质（structureandcharacter）白蛋白（albumin）又称人血浆白蛋白，约占血浆总蛋白的65%。是维持血浆胶体渗透压的主要物质。白蛋白为单链分子pI为4.7，易溶于水，在60%硫酸铵饱和度以上沉淀。对酸较稳定，受热变性。从人体中分离的白蛋白有两种：人血浆白蛋白和胎盘白蛋白。,（2）工艺路线（图3-1）,2%利凡诺、NaHCO3,pH8.6,离心分离,络合物,蒸馏水NaCl、HCl,弱酸性，65，离心,离心液,浓缩,超滤,浓缩液,灭活病毒,65/h，60/10h,热处理液,除菌,除菌过滤,白蛋白液,干燥,冷冻干燥,白蛋白,图3-1白蛋白生产工艺路线,去杂蛋白,人血浆（%）,（3）工艺要点络合（利凡诺沉淀，乳酸依沙吖啶）：搅拌血浆用NaHCO3调pH至8.6，加等体积2%利凡诺溶液，搅拌后静置2-4h，分离上清与络合物沉淀。解离：在沉淀中加灭菌蒸馏水。用0.5mol/LHCI调节pH至弱酸性，加NaCl至0.15%-0.2%，搅拌下进行解离。,去杂蛋白：65恒温1h，离心分离出上清液。热处理（60，10h）：灭活病毒。冻干品白色疏松物体。白蛋白含量占95%以上，水分1%，水溶后pH为6.6-7.2，硫酸铵残量15,000IU/mg蛋白质。,三、绒膜促性激素（HCG）的制备（1）HCG的性质（characterofHCG）HCG是一种糖蛋白，由、两亚基组成，易溶于水，pI为3.2-3.3。HCG由胎盘滋养层合体细胞所分泌。妇女妊娠45-70天，尿中HCG含量可达30.000-50.000IU/24h。治疗女性不育症，神经性皮炎。男性性功能过低症和隐睾症，子宫出血和习惯性流产。,图3-3HCG生产工艺路线,（2）HCG生产工艺路线,粗制,（3）工艺要点吸附粗品：先用HCl调孕妇尿至pH4-5，加苯甲酸乙醇饱和液（孕妇尿：苯甲酸乙醇饱和液：乙醇=1:0.075:5）搅拌1h静置2-3h，过滤，弃滤液，得吸附物。在搅拌下加入95%乙醇，至苯甲酸全部溶解有絮状沉淀产生，静置过夜，离心，沉淀用95%乙醇和丙酮洗涤，干燥得粗制品。,提取：在4下加10倍量0.067mol/L、pH4.8醋酸盐缓冲液，搅拌4h，离心，取上清液。沉淀再提取2h。合并两次提取液，弃去沉淀。离子交换层析：CM-Sepharose柱用0.01mol/L的醋酸盐缓冲液平衡后进行层析上柱。依次用pH4.8、0.01mol/L的醋酸盐缓冲液和pH5.9、0.01mol/L的醋酸盐缓冲液洗涤出两个峰（杂质）。再用pH8.5、0.2mol/L的醋酸盐缓冲液洗脱，得到的第3峰即为HCG。,羟基磷灰石柱层析：柱用pH6.8、0.5mmol/L磷酸盐缓冲液平衡。样品用pH6.8、0.5mmol/L的磷酸盐缓冲液进行层析上柱。洗脱先用pH6.8、0.5mmol/L再用pH6.81.0mmol/L的磷酸盐缓冲液。得到I、II活性峰。然后冷冻干燥。HCG纯品的比活性为10,000-12,000IU/mg蛋白质。,四、白细胞介素-2（IL-2）的制备（1）性质：由活化的淋巴细胞所产生的，糖蛋白有一个链