基因工程的操作步骤PPT幻灯片

，1，基因工程的基本操作程序，2，基因工程的基本操作程序，1。目的获得基因的方法2。基因表达载体的构建3。目的基因导入受体细胞4。目的基因的检测和鉴定，3，4，知识点1: 1。原核细胞的基因结构、非编码区、非编码区、编码区上游、编码区下游、RNA聚合酶与结合区、启动子、终止、启动子：允许在基因的第一部分与RNA聚合酶结合并开始合成mRNA的序列启动子终结者：基因末端的特殊DNA片段阻碍了RNA聚合酶的运动，从DNA模型链上脱落，使战士结束。RNA聚合酶：使启动子识别结合部位，并与该蛋白结合。(在模子里阵亡后脱落)，5，不能用信使RNA转录，不能加密蛋白质。相应的信使RNA可以转录，蛋白质，编码区，非编码区，原核细胞的基因结构，有调控基因信息表达的核苷酸序列。这个序列中最重要的是位于编码区上游的RNA聚合酶结合部位。、非编码区、非编码区、编码区、编码区上游、编码区下游、启动子、终结器、6，7、可以编码蛋白质的序列为excon、不能编码蛋白质的序列为intron、intron:excon、excon真核细胞的基因结构，8，真核细胞的基因结构，编码区，非编码区，外显子：不能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列，可调节的核苷酸序列，包括编码区上游的RNA聚合，非编码序列：包括非编码区和内含子，9，连续，非连续，编码区，非编码，10，1，目的基因获取，2，基因表达载体的构建，3，将目的基因引入受体细胞，4，目的基因检测和鉴定，知识点2。遗传工程基本操作的4个阶段，11，12，1，获得目标基因，1。获得目标基因的方法a .在自然存在的物种中b .人工合成2 .如何获得目标基因a .在基因库中使用B. PCR技术进行扩增c .化学方法合成，目标基因主要是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _基因库：概念参考P9，2。基因库分类：来源分类、类型、基因组DNA文库：包含一种生物的全部基因；部分基因库：仅包含一种生物的部分基因(如cDNA文库，3)。基因库目的，为了方便下意识地获得想要的目的基因。4 .目的基因的基础：请看课本P9，14，提取某种生物的全部DNA，用适当的限制性酶切掉特定大小的DNA片段，将DNA片段连接到载体上，储存在受体细菌上，基因组文库，5。基因库构建方法之一，(1)直接分离法(新枪法)，cDNA合成过程，第一阶段，逆转录酶在RNA中合成互补的单链DNA，形成RNA-DNA杂交分子。第二阶段，核酸酶h在RNA-DNA杂交分子中分解RNA链，使其成为单链DNA。第三步是以单链DNA为模板，在DNA聚合酶的作用下，合成另一个互补的DNA链，形成双链DNA分子。，5 .基因库的构建方法，基因组库和部分基因组库(cDNA库)的比较，17， 概念：PCR全部_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 被称为的生物_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ Mg2(活化剂)，条件：缓冲液，寡核苷酸序列：目标基因的开始和互补，已知目的基因的核苷酸序列，根据此序列合成引物的目的基因扩增，原理：DNA双链复制前提3360必须有已知目的基因的脱氧核苷酸序列，以合成引物，20，工艺，高温变质(分解成单链)，低温退火(底漆和单链互补结合)，积温扩张(Taq酶作用下合成模板和互补DNA双链)，重复循环，初步变质(DNA变性的概率增加) 是生命_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ DNA改性(90 95):热作用下的双股DNA模板，_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ ，c，扩展(70 75):根据Taq酶的作用合成与模板交互的_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _。氢键，单链DNA，双链，DNA链，25，PCR技术扩增和DNA复制的比较，基本互补配对，4种脱氧核苷酸，模板，能量，酶，DNA在高温下变性分解酶，降解酶催化，测试1)逆转录方法：以目标基因转录的信使RNA为模板，将其逆转为互补的单链DNA，然后通过酶作用合成双链DNA，获得所需的基因。蛋白质的氨基酸序列，mRNA的核苷酸序列，结构基因的核苷酸序列，目的基因，推测，化学合成，2)根据已知氨基酸序列的DNA合成方法：3，合成目的基因，27，2，基因表达载体的构建基因工程，2，基因表达载体的构成：克隆原始基因启动子终止基因，29，启动子：位于基因第一端的特殊DNA片段是RNA聚合酶识别和结合部分，从而将基因转录到MRNA，最终蛋白质终止者：位于基因末端的特殊DNA片段，能够终止mRNA转录标记基因的作用是确认受体细胞是否包含目标基因载体和表达载体的差异：两者都有标记基因和克隆原点两部分DNA片段。表达载体向载体添加目的基因、启动子、终结者三种结构使用的工具酶：限制性酶切载体和DNA连接酶，结合目的基因和载体。两种酶作用化学结合是磷酸二酯结合启动子，终止者对目的基因表达至关重要目的基因不单独进入受体细胞，而是作为表达载体携带。第三，将目的基因导入受体细胞。-植物细胞，农杆菌转化基因枪法，容易感染双子叶植物和裸子植物，对大部分子叶植物没有感染能力，向受体细胞导入目的基因-向动物细胞，微注射，受体细胞导入目的基因-微生物细胞，通过Ca2处理细胞可以吸收周围环境的DNA -易感细胞确认：是否插入目标基因(DNA分子杂交技术)，检测(mRNA分子杂交技术)翻译(抗原抗体杂交技术)，确认：功能活性识别抗性，分别提取，诱导阶段，35，两种生物的DNA分子单链互补碱基序列。 在没有互补碱基序列的部分，仍然是两条玻璃单链。诱导：基因工程的基本操作程序，获取目的基因，从基因库中利用PCR化学合成基因表达载体构建基因，启动子，终止者，标记基因转化为受体细胞农杆菌的方法，微注射法检测和鉴定目标基因：插入与否，转录，翻译，基因操作的基本阶段，基因我国科学家利用耐盐基因培养出了新的耐盐水稻品种。(1)获得耐盐基因后，用于重组DNA分子的限制性内切酶作用于图，DNA结合酶作用于图。(填写“a”或“b”)，a，a，41，练习1: (2008年梁山东圈)为了扩大耕地，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱土的开发利用受到了广泛关注。我国科学家利用耐盐基因培养出了新的耐盐水稻品种。(2)将重组DNA分子引入水稻受体细胞的一般方法是农杆菌转化法和方法。(3)培养出具有引进对象基因的水稻细胞，然后利用该技术。这项技术的核心是系。(4)为了确定耐盐转基因水稻的栽培是否成功，需要用标记有放射性同位素的探针进行分子杂交检测，并在个体层面查明水稻植物的耐盐性。基因枪法(花粉管途径法)、植物组织培养、脱分化和再分化、耐盐基因、在一定浓度的盐水中供水、1)以下说法正确：()a，所有限制性酶只有一个特定核苷酸序列b，质粒是基因工程唯一的载体c，运输载体必须具备的条件之一是外源c，练习，2)质粒没有被选择为基因载体的原因是a，可克隆()b，多个限制性酶切c，标记基因D，它是环DNA，D