经典色谱法液相ppt课件

.,1,第10章经典液相色谱法,液相色谱法：以液体为流动相的色谱法称。,经典液相色谱：固定相颗粒较大且不均匀常压下输送流动相柱效较低分析周期长现代液相色谱：固定相颗粒小且均匀高压下输送流动相柱效较高分析周期短,.,2,第1节液-固吸附柱色谱,（一）分离原理（二）常用吸附剂（三）色谱条件的选择,.,3,各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心，利用吸附剂表面的活性吸附中心对不同组分的吸附能力差异而实现分离,固定相为固体吸附剂，属吸附色谱,（一）分离原理,.,4,（二）、吸附剂,对吸附剂的要求：（1）具有较大的表面积和一定的吸附能力（2）颗粒要有一定的细度(d=75-150m，即100-200目)，且粒度均匀（3）与洗脱剂及样品不起反应,常用：硅胶、氧化铝、聚酰胺、活性炭、大孔树脂,.,5,吸附机制：表面的硅醇基，与物质形成氢键,适用范围：微酸性（pH=45），适于酸性和中性物质,失活：水与硅醇基结合使其失去活性,活化：105-110加热30min,粒度：100-200目,1.硅胶（SiO2H2O）中等极性吸附剂,.,6,碱性氧化铝pH910适于分析碱性、中性物质如：生物碱中性氧化铝pH7.5适于分析酸性碱性和中性物质如：生物碱、挥发油、萜类、甾体及在酸碱中不稳定的苷类、酯、内酯等化合物酸性氧化铝pH45适于分析酸性、中性物质如：酸性色素、氨基酸、对酸稳定的中性物质,2.氧化铝,.,7,硅胶、氧化铝的含水量与活性关系,活度测定法：Brockmamn法,.,8,3、聚酰胺,商品名：锦纶、尼龙-6不溶于水和有机溶剂，易溶于浓无机酸,分离机制：主要是氢键吸附,适用对象：黄酮类、鞣质、醌,粒度：20100目,氢键能力强组分越后出柱,.,9,（三）色谱条件的选择：,1.被测组分性质（极性大小）：烷烃烯烃醚硝基化合物二甲胺酯酮醛胺酰胺醇酚羧酸,依据被测组分、吸附剂和流动相的性质,2.吸附剂的选择：吸附剂的活性大，对被测组分的吸附能力强强极性物质选择弱吸附剂弱极性物质选择强吸附剂,酸性成分：硅胶碱性成分：氧化铝黄酮类：聚酰胺,用量：化学分离：30倍除杂：10倍,.,11,“相似相溶”原则：分离极性大的物质应选用极性大的溶剂作流动相，分离极性小的物质应选用极性小的溶剂作流动相，,3、流动相的选择,流动相极性：烷烃苯乙醚氯仿酯酮醇1.5使待测组分的Rf在0.30.5展开后各斑点圆而集中，不拖尾具有适中的沸点和小的粘度临用前配制,2、展开剂,.,36,展开剂的组成：单一溶剂、多元溶剂单一溶剂：重现性好，分离能力差多元展开剂：可改善分离效果，重现性差,展开系统的优化,优化原则：先调整展开剂极性使待测组分Rf值适中，保持这个极性不变，改变展开剂的选择性，直至所有组分有合适的分离度,Stahl图解法,展开系统的优化,Rf值的决定因素：组分极性展开剂的极性吸附剂的活性,.,38,加入少量的酸碱,常用酸：甲酸、冰醋酸常用碱：浓氨水、乙二胺,展开系统的优化,展开剂用量：展开剂浸没薄板下端约0.5cm,.,39,常用展开系统人参皂苷、黄芪甲苷：氯仿-甲醇-水（65：35：10，下层）正丁醇-醋酸乙酯-水（4：1：5，上层）黄酮苷：醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10：1：1：1）糖：正丁醇-冰醋酸-水（4：1：5，上层）,展开系统的优化,中等极性：甲苯-醋酸乙酯-甲酸（10：3：0.5),.,40,苯醋酸乙酯甲醇异丙醇浓氨水（6：3：1.5：1.5：0.5）,展开系统的优化,.,41,3、展开过程的控制,（1）展开方式：多次、分步展开,一次展开,多次展开,原因：低极性低沸点物质在薄层板边缘易挥发,产生边缘效应,克服办法：a“预饱和”b层析缸内壁贴浸湿的滤纸条c点样时不要太靠边缘,展开过程的控制,（2）溶剂蒸气的饱和程度,.,43,（3）湿度,（4）温度,展开过程的控制,.,44,1、定位方法：日光检视紫外光365nm下检视紫外光254nm下检视,检测,荧光淬灭斑点,.,45,a喷雾显色注意：喷雾显色前展开剂须挥干喷雾宜细而均匀,b浸渍显色注意：浸渍液溶剂易挥发，否则斑点扩散浸渍时间为几秒,检测,2、显色剂：与待测物质反应生成有色化合物,.,46,1）加热加热时应把握好时间和温度，特别在定量时应注意(常510min),2）防止显色后褪色加热显色后的板盖上一洁净的玻板并封边，放置于干燥器中,注意：,检测,.,47,四、高效薄层色谱法（HPTLC）,高效薄层板：粒度510m普通板：1040m特点：点样量小，展距短，斑点集中，分离度好，灵敏度高,.,48,五、聚酰胺薄层色谱法,聚酰胺色谱是分离黄酮类是最有效的方法,常用溶剂系统,苷元：氯仿-甲醇（96：6）氯仿-甲醇-甲酸（30：20：1）苷：甲醇-水（4：1）30%60%醋酸,.,49,六、纸色谱法,1、载体：纸固定相：纤维素结合的水，属正相分配色谱展开剂：有机溶剂（正丁醇）,2、适用：极性化合物（多糖）,葡萄糖,鼠李糖,毛地黄毒糖,极性,最强,其次,最弱,Rf值,最小,其次,最大,3、Rf值与物质的化学结构的关系：,.,51,样品预处理,七、薄层色谱法的应用,.,52,依据：固定色谱条件下，相同物质的Rf值相同,供试品对照药材对照品阴性对照,1234,（一）定性鉴别,.,53,1、限量检查,如：附子中乌头碱的限量检查,1.乌头碱对照品2，3，4.样品,（二）定量分析,2、洗脱测定法,准确吸取直线状点样，置于层析缸中，展至14cm，取出晾干，于紫外灯下，用针将Rf值约为0.4的盐酸吗啉双胍谱带划出，用刮刀将谱带全部刮入100ml容量瓶中，准确加入50ml蒸馏水，振摇静置离心。准确吸取上清液以